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        無核葡萄胚挽救影響因素研究

        2016-05-14 14:07:47霍巖
        新農(nóng)業(yè) 2016年9期
        關(guān)鍵詞:三角瓶胚珠花后

        霍巖

        通常情況下,根據(jù)葡萄果實(shí)內(nèi)是否有種子而將其分為有核葡萄和無核葡萄。在葡萄生長發(fā)育過程中的開花結(jié)實(shí)階段,從雌配子體發(fā)育到有性生殖過程完成的任何一個(gè)階段出現(xiàn)障礙,就會(huì)形成無核果。不同階段出現(xiàn)障礙形成各種類型的無核葡萄。本試驗(yàn)研究了不同取樣時(shí)期、培養(yǎng)基類型及激素濃度等因素對(duì)無核葡萄自交胚挽救后代的影響,優(yōu)化昆諾無核和雷明無核胚挽救體系,試驗(yàn)結(jié)果為無核葡萄的育種研究提供了技術(shù)支持。

        1 材料與方法

        不同的種子敗育型無核品種,根據(jù)其授粉特性可分為兩大類:一類稱單性結(jié)實(shí)型,就是卵細(xì)胞不經(jīng)過受精作用而直接發(fā)育成果實(shí);另一類稱假單性結(jié)實(shí)型,即種子敗育型,就是雖受精,但受精后的胚很快停止發(fā)育導(dǎo)致無核果實(shí)產(chǎn)生,這種類型的品種占無核品種的85%以上,在無核葡萄胚挽救育種中即是利用這一類型作母本。

        試驗(yàn)在撫順縣后安鎮(zhèn)進(jìn)行,供試葡萄雜交組合材料為昆諾無核×雷明無核和雷明無核×昆諾無核。花粉父本品種在開花前1天至初花期采集,花粉干燥后于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。作為母本的所有品種在開花前3~5天進(jìn)行去雄,授粉1~2次,每組合去雄授粉10~20穗果。授粉后系標(biāo)牌,標(biāo)注好去雄授粉的時(shí)間及父、母本名稱。以授粉后的天數(shù)作為花后天數(shù)。

        將授粉后一定時(shí)期的幼果采回,果穗用純凈水反復(fù)沖洗,然后將果穗浸泡于酒精中約半分鐘(酒精濃度為70%),用沒有雜菌的純凈水沖洗3次,再將果穗放入0.1%升汞中浸泡8~10分鐘,用無菌水漂洗3~5次,消毒后的果粒用刀切開,取出其中胚珠,接種到三角瓶中(使用100毫升三角瓶,三角瓶中裝入50毫升胚發(fā)育培養(yǎng)基),培養(yǎng)60天后,將培養(yǎng)的胚珠橫切,以發(fā)現(xiàn)白色胚乳的胚珠為發(fā)育胚,將發(fā)育的胚珠轉(zhuǎn)入萌發(fā)培養(yǎng)基(1/2 MS+BA0.5 +IBA1.5+GA0.5+2%蔗糖+0.6%瓊脂+0.1%活性炭),30天后調(diào)查萌發(fā)成苗率。培養(yǎng)條件為溫度(25±1)℃,光強(qiáng)為2000勒克斯,每天光照12~14小時(shí)。

        昆諾無核×雷明無核、雷明無核×昆諾無核雜交胚珠為試材,采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),接種時(shí)期:50天、60天、70天;50天、53天、56天;培養(yǎng)基種類: B5、ER、Nitsch;IBA濃度:1.5毫克/升、2.0毫克/升、2.5毫克/升;GA濃度:0.3毫克/升、0.5毫克/升、0.7毫克/升。每種培養(yǎng)基中均加入6%蔗糖、0.6%瓊脂、0.1%活性炭、BA0.5。每瓶接種8~10枚胚珠,接種7~10瓶。調(diào)查胚珠發(fā)育率、萌發(fā)率。

        2 結(jié)果與分析

        試驗(yàn)結(jié)果如下表所示,可以看出各組合萌發(fā)或發(fā)育的胚珠都有一定的數(shù)量。從胚珠發(fā)育率來看,昆諾無核×雷明無核的胚珠發(fā)育率較高,在90%~97.5%,其中處理5即花后60天接種,采用ER培養(yǎng)基,IBA濃度為2.5毫克/升,GA濃度為0.3毫克/升時(shí)效果最好;雷明無核×昆諾無核的胚珠發(fā)育率為70%~86.25%,其中處理6即花后53天接種,采用Nitsch培養(yǎng)基,IBA濃度為1.5毫克/升,GA濃度為0.5毫克/升時(shí)效果最好。從胚珠萌發(fā)率來看,昆諾無核×雷明無核的胚珠發(fā)育率較高,在1.82%~38.89%,其中處理6即花后60天接種,采用Nitsch培養(yǎng)基,IBA濃度為1.5毫克/升,GA濃度0.5毫克/升時(shí)效果最好;雷明無核×昆諾無核的胚珠發(fā)育率為0%~8.75%,其中處理4即花后53天接種,采用B5培養(yǎng)基,IBA濃度為2.0毫克/升,GA濃度為0.7毫克/升時(shí)效果最好。

        3 結(jié)論

        試驗(yàn)結(jié)果得出,接種時(shí)期、培養(yǎng)基種類、IBA濃度及GA濃度都是影響無核葡萄胚挽救的因素,而對(duì)胚挽救影響最大的因素是接種時(shí)期。從胚珠萌發(fā)率來看,昆諾無核×雷明無核,花后60天接種,采用Nitsch培養(yǎng)基,IBA濃度為1.5毫克/升,GA濃度0.5毫克/升時(shí)效果最好;雷明無核×昆諾無核,花后53天接種,采用B5培養(yǎng)基,IBA濃度為2.0毫克/升,GA濃度為0.7毫克/升時(shí)效果最好。另外,培養(yǎng)基種類、接種時(shí)期及激素濃度在不同的基因型品種雜交組合下要求也不同。

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