呂春紅, 王連珠

(江蘇省泰州市高港中醫(yī)院, 江蘇 泰州, 225300)

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丙種球蛋白聯(lián)合淋巴細胞主動免疫治療復發(fā)性流產(chǎn)的療效

呂春紅, 王連珠

(江蘇省泰州市高港中醫(yī)院, 江蘇 泰州, 225300)

摘要:目的觀察靜滴丙種球蛋白(IVIG)聯(lián)合淋巴細胞主動免疫(LIT)治療復發(fā)性流產(chǎn)的效果。方法90例原因不明性復發(fā)性流產(chǎn)(URSA)患者隨機均分為2組。聯(lián)合組患者接受IVIG治療和LIT治療，IVIG組僅接受IVIG治療。檢測治療前后T細胞亞群(CD3+、CD4+和CD8+)的表達水平，IL-2、IL-10表達水平以及NK細胞含量，比較2組患者封閉抗體轉陽率及臨床妊娠率。結果2組患者治療后CD3+細胞和CD8+細胞百分比升高，CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值均顯著降低(P<0.05); IL-2含量和NK細胞含量均顯著降低，而IL-10含量顯著升高(P<0.05)。聯(lián)合組變化幅度顯著高于IVIG組(P<0.05)。聯(lián)合組治療后封閉抗體轉陽率為95.56%，顯著高于IVIG組的82.22%(P<0.05); 臨床妊娠成功率為86.67%，也顯著高于IVIG組的64.44%(P<0.05)。結論 兩種治療方法均能有效改善患者體內(nèi)免疫狀態(tài)，提高妊娠成功率，但IVIG聯(lián)合LIT治療較單獨應用IVIG效果更好。

關鍵詞:復發(fā)性流產(chǎn); 丙種球蛋白; 淋巴細胞主動免疫

復發(fā)性流產(chǎn)是指產(chǎn)婦連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，是一種常見的病理性妊娠，發(fā)生率為1%～2%。原因不明性復發(fā)性流產(chǎn)(URSA)是指排除常見的染色體異常、生殖道畸形、內(nèi)分泌異常及感染等原因的復發(fā)性流產(chǎn)，占復發(fā)性流產(chǎn)的45%～60%[1]。有研究[2]顯示，T輔助淋巴細胞亞群失衡和封閉抗體(BA)缺乏是產(chǎn)生URSA的主要原因。免疫療法是治療URSA的主要療法，即通過誘導母體對胚胎產(chǎn)生免疫耐受，達到保證胚胎存活的目的[3]。本研究觀察靜滴丙種球蛋白(IVIG)聯(lián)合淋巴細胞主動免疫(LIT)治療復發(fā)性流產(chǎn)的效果，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取本院2011年1月—2013年1月治療的URSA患者90例。診斷標準：反復自然流產(chǎn)2次以上，無死胎、死產(chǎn)及活產(chǎn)史；性激素、葡萄糖耐量實驗和胰島素抵抗實驗等內(nèi)分泌檢查正常；抗精子抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體等自身抗體陰性；封閉抗體陰性；排除精子異常及夫妻雙方染色體異常、生殖器官病變及感染性因素等。所有患者均未進行過主動免疫治療。將患者隨機分為2組，聯(lián)合組(n=45)給予LIT聯(lián)合IVIG治療，IVIG組(n=45)僅給予IVIG治療。2組患者年齡、平均流產(chǎn)次數(shù)、體質量指數(shù)等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2方法

2組患者均靜脈滴注丙種球蛋白(華蘭生物制藥廠, 2.5 g/支)，400 mg/kg, 1次/d，連續(xù)3 d。孕前每4周靜滴1次，2次為1個療程。孕后改為每3周同劑量靜滴1次，直至懷孕后30周。聯(lián)合組患者接受IVIG治療的同時進行LIT治療。具體方法：抽取患者丈夫靜脈血20 mL，在無菌條件下用淋巴細胞分離液分離獲得外周血單核細胞[4]。調整所獲得單核細胞濃度為1×109個/L, 于患者臂內(nèi)側進行皮內(nèi)注射，每2周1次，每次1 mL，治療4次為1個療程。治療結束后檢測封閉抗體，若為陽性則建議患者考慮懷孕，孕后每4周行LIT治療1次，直至孕后12周；若為陰性，則繼續(xù)治療1療程。2個療程未轉陽性者剔出本實驗。

1.3觀察指標

① 淋巴細胞亞型及細胞因子檢測：分別于治療前及1個療程后采集患者靜脈血5 mL, 加肝素抗凝，用流式細胞儀檢測T細胞亞群(CD3、CD4和CD8)的表達水平，IL-2、IL-10表達水平以及NK細胞含量。每次檢測獲取10 000個細胞。② 封閉抗體檢測：提取患者治療前及治療1個療程后的血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測封閉抗體。ELISA標準檢測試劑盒由上海恒斐生物科技有限公司提供，按照說明書進行操作。③ 妊娠情況統(tǒng)計：將妊娠超過3個月B超未見異?；虺晒Ψ置湟暈槿焉锍晒?。隨訪至分娩。

1.4統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0對不同組別間統(tǒng)計數(shù)據(jù)進行處理。各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，采用配對t檢驗和χ2檢驗進行統(tǒng)計學處理。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2組治療前T淋巴細胞亞型、IL-2、IL-10表達水平以及NK細胞含量比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后2組CD3+細胞和CD8+細胞百分比升高，CD4+細胞百分比下降，CD4+/CD8+比值也顯著降低(P<0.05); IL-2含量降低，而IL-10含量升高，NK細胞含量也明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。聯(lián)合組CD3+細胞和CD8+細胞百分比高于IVIG組，而CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值均顯著低于IVIG組(P<0.05); 聯(lián)合組IL-2含量和NK細胞含量均顯著低于IVIG組，而IL-10含量顯著高于后者(P<0.05)。見表1、2。

所有患者治療前封閉抗體均為陰性。治療后聯(lián)合組有43例封閉抗體轉為陽性，轉陽率為95.56%; IVIG組有37例轉為陽性，轉陽率為82.22%。聯(lián)合組封閉抗體轉陽率顯著高于IVIG組(P<0.05)。隨訪結果顯示，聯(lián)合組共有42例治療后懷孕，其中39例懷孕至3個月，35例足月分娩，4例早產(chǎn)。IVIG組有41例治療后懷孕，其中29例懷孕至3個月，24例足月分娩，5例早產(chǎn)。聯(lián)合組臨床妊娠成功率為86.67%，顯著高于IVIG組的64.44%(P<0.05)。

3討論

胎兒由于含有來自父方的基因，對母體來說相當于異物，會受到母體的排斥。為使胚胎能夠在體內(nèi)存活，正常情況下母體會產(chǎn)生封閉抗體，以保護胚胎免受免疫系統(tǒng)的攻擊。當封閉抗體缺乏時，免疫系統(tǒng)會攻擊胚胎細胞，導致流產(chǎn)。因此，封閉抗體的缺乏是導致URSA產(chǎn)生的重要原因。

表1　2組治療前后T細胞亞型變化比較

與治療前比較, *P<0.05; 與IVIG組比較, #P<0.05。

表2　2組治療前后IL-2、IL-10表達水平以及NK細胞含量變化比較

與治療前比較, *P<0.05; 與IVIG組比較, #P<0.05。

LIT治療的機制是通過向妻子注射丈夫或其他男性的淋巴細胞，刺激妻子的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生封閉抗體，從而保護胚胎的生長發(fā)育[5]。有研究[2，6]證實，LIT治療可顯著提高封閉抗體陽性率，而封閉抗體陽性者妊娠成功率明顯高于陰性者。本研究結果顯示，聯(lián)合組治療后封閉抗體轉陽率為95.56%，顯著高于IVIG組的82.22%(P<0.05), 臨床妊娠成功率為86.67%，也顯著高于IVIG組的64.44%(P<0.05)。

IVTG具有抗胎盤滋養(yǎng)層抗原的獨特型抗體及抗獨特型抗體，有益于自身獨特性抗體產(chǎn)生不足的復發(fā)性流產(chǎn)。有研究[7-8]認為IVIG治療URSA的作用機制主要是通過調節(jié)Th1、Th2細胞因子的產(chǎn)生和降低NK細胞的水平和毒性來發(fā)揮作用的。妊娠后母體會分泌Th1型(如IL-2、IFN-γ及TNF-α)和Th2型(如IL4、IL-10)細胞因子，Th1型細胞因子通過介導體液免疫，誘發(fā)母體免疫系統(tǒng)對胚胎的攻擊，導致流產(chǎn)發(fā)生；Th2型細胞因子可以抑制Th1型細胞因子介導的免疫應答，保護滋養(yǎng)細胞和胚胎，從而避免流產(chǎn)的發(fā)生[9]。IVIG可抑制Th1型細胞因子的分泌，促進Th2型細胞因子的產(chǎn)生，從而起到保護胚胎的作用。另外，IVIG是具有完整Fab和Fc部位功能的IgG 抗體，IVIG的Fc段可以與NK細胞的表面抗原CD16結合，部分阻斷了NK細胞與自身抗體的Fc段的結合，從而抑制了自身抗體介導的NK細胞ADCC效應，降低NK細胞的毒性[10]。本研究中，2組患者治療后CD3+細胞和CD8+細胞百分比升高，CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值均顯著降低；IL-2含量和NK細胞含量均顯著降低，而IL-10含量顯著升高，其中聯(lián)合組變化幅度顯著高于IVIG組。說明兩種治療方法均能有效改善患者體內(nèi)免疫狀態(tài)，而IVIG聯(lián)合LIT治療較單獨應用IVIG效果更好。

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Effect of intravenous immune globulin combined with lymphocyte active immunotherapy on the treatment of patients with recurrent abortion

LYU Chunhong, WANG Lianzhu

(GaogangHospitalofTraditionalChineseMedicine,Taizhou,Jiangsu, 225300)

ABSTRACT:ObjectiveTo observe the efficacy of intravenous immune globulin (IVIG) combined with lymphocyte active immunotherapy (LIT) in the treatment of patients with recurrent abortion. MethodsNinety patients with unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA) were randomly divided into two groups. Combination group was given IVIG and LIT, and IVIG group was given IVIG treatment only. The levels of lymphocyte subsets (CD3+, CD4+and CD8+) and the expression levels of IL-10, IL-2 and NK cells were detected before and after treatment. The positive rate of blocking antibody and the clinical pregnancy rate were compared between two groups. ResultsAfter treatment, the percentage of CD3+ and CD8+ cells in the two groups increased significantly, and the percentage of CD4+ cells and the ratio of CD4+/CD8+ significantly decreased (P<0.05). The levels of IL-2 and NK cells significantly decreased, while the level of IL-10 increased significantly (P<0.05). The change of the combination group was significantly higher than that of the IVIG group (P<0.05). The positive rate of blocking antibody in the combination group was 95.56%, which was significantly higher than 82.22% of the IVIG group (P<0.05). The success rate of clinical pregnancy was 86.67%, which was significantly higher than 64.44% of the IVIG group (P<0.05). ConclusionThe two treatment methods can effectively improve the immune status and increase the success rate of pregnancy in patients with recurrent abortion, and IVIG combined with LIT treatment is more effective than IVIG.

KEYWORDS:recurrent abortion; immune globulin; lymphocyte active immunotherapy

中圖分類號:R 714.21

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)07-096-03

DOI:10.7619/jcmp.201607028

收稿日期:2015-12-06