李娜劉瑞麗張明潔

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HPLC法測定天麻寧眩膠囊中芍藥苷的含量

李娜1,2劉瑞麗2張明潔1,2

【摘要】目的 建立測定天麻寧眩膠囊中芍藥苷含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱為Waters C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（12：88，v/v），流速：1.00 ml/min，檢測波長：230 nm，柱溫：30℃。結果 芍藥苷在0.097 34～1.557 50 μg（r=0.999 9）范圍內呈良好的線性關系，平均回收率為97.85%（RSD=0.54%）。結論 所建立的含量測定方法簡便、準確、專屬性強，可用于天麻寧眩膠囊中芍藥苷的含量測定。

【關鍵詞】天麻寧眩膠囊；高效液相色譜法；芍藥苷

天麻寧眩膠囊為焦作市溫縣第二人民醫(yī)院的自制制劑，由天麻、莪術、白芍、赭石、龍骨，牡蠣、半夏、地黃、仙鶴草等13味中藥材組成。具有平肝息風，燥濕化痰作用。臨床用于治療肝腎陰虛，肝陽上亢型眩暈[1]。天麻寧眩膠囊檢驗標準中無質量控制項，制劑中白芍為主要有效成分，白芍主要入肝脾經(jīng)，具有養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛，平抑肝陽等功效[2]，白芍中含有單萜及其苷類、三萜類、黃酮類等化學成分，據(jù)研究發(fā)現(xiàn)白芍中的有效成分具有抗炎，調節(jié)心血管，以及調節(jié)中樞神經(jīng)等作用[3-6]，這些有效化學成分中芍藥苷性質穩(wěn)定，易于檢測[7-11]，為有效控制產(chǎn)品質量，提高醫(yī)院制劑質量控制標準，對本劑中白芍的主要有效成份芍藥苷進行了含量測定的方法學研究，建立天麻寧眩膠囊中芍藥苷的含量測定的高效液相色譜法。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 島津LC-20A型高效液相色譜儀、島津SPD-M20A型二極管陣列檢測器、CPA225D型電子天平（賽多利斯）、KQ-300VDV超聲波清洗機（昆山超聲）。

1.1.2 試劑 乙腈為一級色譜純；超純水；磷酸為分析純；乙醇為分析純。

1.2 材料

1.2.1 對照品 芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，含量以96.0%計，使用前無需干燥處理，批號：110736-201136）。

1.2.2 樣品 天麻寧眩膠囊（溫縣第二人民醫(yī)院，批號：20150810、20150570、20150829）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱Waters C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）， 流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（12：88），進樣量：10 μl，柱溫：30℃，流速：1.00 ml/min。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算不低于3 000。用甲醇溶液溶解芍藥苷對照品，在200～300 nm處進行紫外掃描，在19 min 230 nm處有最大吸收，供試品溶液在230 nm處亦有最大吸收，故確定掃描波長230 nm。見圖1。

圖1　芍藥苷對照溶液紫外吸收3D圖

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品10.14 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取天麻寧眩膠囊內容物約1.6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按天麻寧眩膠囊的處方工藝，不加白芍，制成陰性樣品，同2.2.2方法制成陰性溶液。

2.3 操作方法

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.4 結果

試驗結果表明，供試品與芍藥苷對照品溶液均有一保留時間相同的色譜峰，并且陰性對照在芍藥苷對照品附近無干擾，芍藥苷峰與其它組分達到基線分離，分離度符合要求。理論塔板數(shù)n ＞3 000。

2.5 方法學考察

2.5.1 方法的專屬性考察 在上述的色譜條件下，將芍藥苷對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μl注入液相色譜儀中，得HPLC圖，結果顯示陰性對照無干擾。結果見圖 2。

圖2　A：芍藥苷對照品溶液；B：陰性對照溶液；C：供試品溶液

2.5.2 線性關系考察 取2.2.1對照品溶液1 μl、2 μl、4 μl、8 μl、16 μl測定色譜峰面積，得回歸方程（n=6）為Y=12 193.8X-20 401.9（r=0.999 9），在0.097 34～1.557 50 μg，呈良好線性關系，結果見表1。

2.5.3 精密度試驗 取對照品溶液，按照上述色譜條件，進樣量10 μl，重復進樣5次，記錄峰面積，芍藥苷峰面積的RSD值為0.41%。2.5.4 重復性試驗 取同一樣品6份，按2.2.2制備供試品溶液，分別注入液相色譜儀10 μl，記錄峰面積，芍藥苷峰面積的RSD值為1.3%。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液10 μl，分別在0 h 、4 h、8 h、 12 h、16 h注入液相色譜儀，記錄峰面積，芍藥苷峰面積的RSD 為0.59%。結果表明本品16 h內穩(wěn)定性良好。

2.5.6 加樣回收率試驗 精密稱取已測知含量（1.112 1 mg/g）的天麻寧眩膠囊（批號20150810）約1.6 g，共9份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入芍藥苷對照品溶液1 ml、2 ml、3 ml（0.097 344 mg/ml）。按2.2.2項下供試品溶液制備的方法操作，同法測定，結果見表2。

表1　芍藥苷線性關系

表2　天麻寧眩膠囊的加樣回收率

3 討論及小結

3.1 文中對于樣品超聲提取時間，通過分別測試超聲時間10 min、30 min、50 min的供試品溶液的含量，10 min提取的含量較低，50 min提取的含量與30 min提取的含量相差不多，從效率上考慮，最終確定30 min為最佳提取時間。

3.2 對供試品的制備中，分別采用甲醇，乙醇和稀乙醇三種溶劑進行30 min超聲處理，分別進行含量測定，根據(jù)峰面積可以確定稀乙醇作為溶劑提取效果最佳，同時又比較環(huán)保安全，因此最終選用稀乙醇作為溶劑。

3.3 經(jīng)過對多批樣品中芍藥苷的含量測定表明，該方法簡便、準確。可以控制產(chǎn)品的質量。

3.4 所建立HPLC法測定天麻寧眩膠囊中芍藥苷的含量測定方法在芍藥苷0.097 34～1.557 50 μg范圍內呈良好的線性關系，平均回收率為97.85%，RSD為0.54%，簡便、準確、專屬性強，可用于該藥中芍藥苷的含量測定。

3.5 天麻寧眩膠囊中除白芍還含有天麻、山茱萸、五味子等其他中藥成分，也可對這些中藥材進行進一步的研究和考察，對本藥藥效藥理作用能有更深的探索，同時建立更完善全面的質量控制標準，使之在疾病預防和治療應用中有更廣闊的前景。

參考文獻

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作者單位： 1 454000 焦作市食品藥品檢驗所；2 453000 新鄉(xiāng)醫(yī)學院

Determination of the Content of Paeoniflorin in Tianmaningxuan Capsule by HPLC

LI Na1,2LIU Ruili2ZHANG Mingjie1,2, 1 Jiaozuo Municipal Food and Drug Inspection Institute of Jiaozuo City, Jiaozuo 454000, China, 2 Xinxiang Medical University, Xinxiang 453000, China

[Abstract]Objective To establish a method that is using HPLC for determination of the content of paeoniflorin in tianmaningxuan capsule.Methods Chromatographic condition about the HPLC analysis includes: Waters C18column(4.6 mm×250 mm, 5 μm), CH3CN-0.1% H3PO4(12: 88, v/v)as mobile phase, 1.00 ml/min of flow rate, UV detector wavelength at 230 nm and 30℃ column temperature.Results The standard curve of paeoniflorin showed a good linear relationship within the range of 0.097 34～1.557 50 μg (r=0.999 9), the average recovery rate was 97.85% (RSD =0.54%).Conclusion The method established that is sensitive, accurate and specific can be used for the determination of the content of paeoniflorin in tianmaningxuan capsule.

[Key words]Tianmaningxuan capsule, HPLC, Paeoniflorin

通訊作者：劉瑞麗，E-mail：lrl@xxmu.edu.cn

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.07.127

【文章編號】1674-9308（2016）07-0183-03

【中圖分類號】R286

【文獻標識碼】A