陶文雅,王晨,徐韋(中國人民解放軍第102醫(yī)院,江蘇常州213003)

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甲狀腺乳頭狀癌組織中MMP-2、MT1-MMP的表達(dá)變化及意義

陶文雅,王晨,徐韋(中國人民解放軍第102醫(yī)院,江蘇常州213003)

摘要：目的觀察基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)在甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 采用免疫組化法對176例PTC患者的癌及癌旁組織標(biāo)本中MMP-2和MT1-MMP進(jìn)行檢測，觀察其在PTC中的表達(dá)并分析其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果MMP-2在甲狀腺乳頭狀癌及癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為67.04%(118/176)和13.6%(24/176)，二者比較，P<0.01；MT1-MMP在甲狀腺乳頭狀癌及癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為61.93%(109/176)和10.8%(19/176)，二者比較，P<0.01。MT1-MMP在PTC組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無相關(guān)性(P均>0.05)；MMP-2在PTC組織中的表達(dá)與包膜浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無相關(guān)性(P均>0.05)。MMP-2在PTC中的表達(dá)與MT1-MMP呈正相關(guān)(r=0.305，P<0.01)。結(jié)論 MMP-2與MT1-MMP在PTC組織中的陽性表達(dá)率均升高，在腫瘤發(fā)展中有協(xié)同作用,且與癌灶包膜浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

關(guān)鍵詞：甲狀腺乳頭狀癌；基質(zhì)金屬蛋白酶；細(xì)胞浸潤；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

甲狀腺癌乳頭狀癌(PTC)多見于年輕女性或兒童，惡性程度較低[1]。甲狀腺癌生長較緩慢，可局限于甲狀腺內(nèi)多年，但約50%的患者可出現(xiàn)癌細(xì)胞經(jīng)腺內(nèi)淋巴管擴(kuò)散至腺體的其他部位及局部淋巴結(jié)，引起預(yù)后不佳[2～4]。研究[5，6]表明，惡性腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和侵襲的先決條件在于突破細(xì)胞基底膜及間質(zhì)組成的一層組織學(xué)屏障，而基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)則可通過降解這層屏障中的成分使這一層組織學(xué)屏障被破壞及誘導(dǎo)免疫耐受等機(jī)制，為癌灶轉(zhuǎn)移及侵襲提供條件。作為MMPs家族的一員，MMP-2可通過誘導(dǎo)新生血管形成，降解細(xì)胞外基質(zhì)等作用，在肺癌、前列腺癌、乳腺癌等進(jìn)展遷移中發(fā)揮作用[7～9]。膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)是MMPs中的一員，可通過將多種細(xì)胞外基質(zhì)成分降解、促進(jìn)新生血管生成等機(jī)制來影響腫癌細(xì)胞的浸潤、遷移、凋亡等過程。研究[10]顯示，MMP-2與甲狀腺乳頭狀癌的遷移、浸潤相關(guān)。Deryugina等[11]研究表明，MMP-2與MT1-MMP在腫瘤組織中的表達(dá)存在相關(guān)性。 2009年2月～2015年8月,我們檢測了176例PTC患者癌及癌旁組織中MMP-2與MT1-MMP表達(dá)，分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2009～2015年于本院住院行手術(shù)治療的176例PTC患者的術(shù)后甲狀腺癌組織標(biāo)本(PTC組)，所有標(biāo)本經(jīng)病理檢查確診。收集癌旁2 cm組織(癌旁組)，均最后確定無腫瘤細(xì)胞存在?；颊吣?5例、女121例，年齡18～69(42.7±3.2)歲。臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期130例，Ⅲ～Ⅳ期46例；瘤灶最大徑>2 cm者63例，<2 cm者113例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移82例。

1.2癌及癌旁組織中MT1-MMP和MMP-2表達(dá)檢測采用免疫組化SP法。10%甲醛溶液固定兩組標(biāo)本后予石蠟包埋及連續(xù)切片，4 μm厚。切片脫蠟至水后行高壓熱修復(fù)。3%H2O2溶液將過氧化物酶阻斷，將鼠抗人MMP-2單抗(1∶100稀釋)與MT1-MMP多抗(1∶100稀釋)加入并進(jìn)行反應(yīng)，4 ℃過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗，加入生物素化二抗液，放置10 min(室溫)，滴加SABC液，再放置10 min(37 ℃)，磷酸鹽緩沖液沖洗，DAB顯色，蒸餾水洗后予蘇木精復(fù)染。陰性對照采用磷酸鹽緩沖液替代一抗，購自研生生化公司(上海)的陽性切片(已知)作為陽性對照。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)MT1-MMP與MMP-2在免疫組化實驗中陽性表達(dá)部位均為胞質(zhì)，陽性強度表現(xiàn)為淺黃色～棕褐色。按照半定量積分法[12]，聯(lián)合陽性細(xì)胞染色強度和陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行結(jié)果判定。陽性物質(zhì)染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)：胞質(zhì)染色呈棕褐色為3分，胞質(zhì)染色呈棕黃色為2分，胞質(zhì)染色呈淺黃色為1分，胞質(zhì)無著色為0分；陽性細(xì)胞百分率判定評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：染色細(xì)胞無或低于5%；1分：染色細(xì)胞為5%～25%；2分：染色細(xì)胞為25%～50%；3分：染色細(xì)胞超過50%。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組MMP-2、MT1-MMP表達(dá)比較 MMP-2在PTC組和癌旁組陽性表達(dá)率分別為67.04%(118/176)和13.6%(24/176)，兩組比較，P<0.01(χ2=104.302)；MT1-MMP在PTC組和癌旁組陽性表達(dá)率分別為61.93%(109/176)和10.8%(19/176)，兩組比較，P<0.01(χ2=99.420)。

2.2MMP-2及MT1-MMP表達(dá)與PTC臨床病理參數(shù)的關(guān)系MMP-2在PTC組織中的表達(dá)與包膜浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與性別、年齡、癌灶大小、臨床分期無關(guān)(P均>0.05)。MT1-MMP在PTC組織中的表達(dá)與腫瘤組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無關(guān)(P均>0.05)，見表1。

表1　MMP-2、MT1-MMP表達(dá)與PTC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3PTC中MMP-2與MT1-MMP表達(dá)的關(guān)系PTC中MMP-2與MT1-MMP表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.305，P<0.01)。

3討論

腫瘤遷移和浸潤的機(jī)制復(fù)雜，其中重要的一步即細(xì)胞外基質(zhì)屏障的破壞[13]。細(xì)胞外基質(zhì)成分包括纖維黏連蛋白、間質(zhì)膠原、彈性蛋白等,對與其接觸的癌基因表達(dá)及微環(huán)境的維持發(fā)揮重要作用,故破壞細(xì)胞外基質(zhì)更新代謝平衡失調(diào)的任何物質(zhì)均可能影響腫瘤浸潤、遷移等過程[8]，而MMPs則可通過降解各種細(xì)胞外基質(zhì)的成分影響腫瘤浸潤與遷移等[6，11]。研究[14,15]表明，肺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤的遷移和浸潤均與MMPs活性升高有關(guān)。研究[16]表明，MMP-2可降解Ⅴ型、Ⅳ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)成分，破壞與腫瘤遷移、浸潤相關(guān)的組織屏障，促進(jìn)癌灶的遷移及生長。

Saffar等[17]通過分析并檢測甲狀腺乳頭狀癌患者標(biāo)本MMP-2的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，MMP-2在PTC中表達(dá)和其包膜浸潤存在一定關(guān)聯(lián)。Wu等[18]發(fā)現(xiàn)，MMP-2在PTC中表達(dá)高于良性結(jié)節(jié)，而無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者癌組織中MMP-2表達(dá)明顯低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。本研究中，MMP-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，MMP-2在PTC組織中的表達(dá)與包膜浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無關(guān)。此與吳立剛等[19]的結(jié)論一致， MMP-2可能在PTC癌灶包膜浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。

MT1-MMP為一種膠原酶,活化后可將層黏連蛋白5和1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原蛋白、玻璃黏連蛋白等組成細(xì)胞外基質(zhì)的多種大分子降解，與此同時還能通過激活MMP-2從而達(dá)到對細(xì)胞外基質(zhì)成分的降解作用[8,16]。研究[20]表明, MT1-MMP在黑色素瘤、肝癌、肺癌、皮膚癌等惡性腫瘤中高表達(dá),并與癌細(xì)胞浸潤、遷移及惡性程度等存在一定關(guān)系。Ying-Chi等[21]發(fā)現(xiàn),MT1-MMP高表達(dá)于肝細(xì)胞癌、癌旁組織及肝周靜脈中。Yao等[22]研究表明，MT1-MMP在乳腺癌中的高表達(dá)通過對血管內(nèi)皮生長因子-C的上調(diào)促進(jìn)癌組織的血管和淋巴管形成。

本研究中，MT1-MMP在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織；MT1-MMP在PTC組織中的表達(dá)與腫瘤組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，MMP-2表達(dá)與MT1-MMP呈正相關(guān)。此與劉章毅等[23]研究結(jié)果一致。進(jìn)一步提示MMP-2與MT1-MMP對PTC遷移、浸潤過程有協(xié)同作用。

綜上所述，MMP-2與MT1-MMP在PTC中的表達(dá)與癌灶包膜浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，二者在腫瘤發(fā)展中有協(xié)同作用。

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本刊2016年第56卷第5期“誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的制備及其應(yīng)用進(jìn)展”一文的通信作者為“趙晶”。特此聲明。

本刊編輯部

(收稿日期：2015-12-20)

中圖分類號：R736.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)13-0068-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.027