齊燦，胡巖，馬立新，郭付臣，趙學(xué)強(qiáng)，苑博，岳丹(河北省兒童醫(yī)院，石家莊05000；北京鐵路局石家莊鐵路疾病控制所；天津醫(yī)科大學(xué))

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CD147在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻組織中的表達(dá)及意義

齊燦1，胡巖1，馬立新2，郭付臣1，趙學(xué)強(qiáng)1，苑博3，岳丹3(1河北省兒童醫(yī)院，石家莊050030；2北京鐵路局石家莊鐵路疾病控制所；3天津醫(yī)科大學(xué))

摘要：目的探討CD147在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻(UPJO)發(fā)病中的作用。方法選擇50例單純UPJO患兒手術(shù)切除的腎盂輸尿管連接部狹窄處組織為觀察組，因腎實(shí)質(zhì)腫瘤或腎外傷術(shù)中切除的腎盂輸尿管連接部正常組織12例為對(duì)照組。采用Western blot法檢測(cè)兩組CD147蛋白表達(dá)，采用qRT-PCR法檢測(cè)兩組CD147 mRNA表達(dá)。結(jié)果對(duì)照組、觀察組CD147蛋白表達(dá)量分別為0.10±0.03、0.38±0.04，觀察組CD147蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)照組、觀察組CD147 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.18、1.63±0.12，觀察組CD147 mRNA表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)論UPJO組織中CD147表達(dá)增高，CD147可能通過促進(jìn)腎盂輸尿管連接部組織纖維化參與UPJO的發(fā)病過程。

關(guān)鍵詞：CD147基因；腎盂輸尿管連接部梗阻；先天性腎積水；纖維化

先天性腎積水是小兒泌尿外科的常見疾病，病因較多，其中先天性腎盂輸尿管連接部梗阻(UPJO)是常見原因[1,2]。研究發(fā)現(xiàn)，腎盂輸尿管連接部纖維化在UPJO的發(fā)病中具有重要作用，肌細(xì)胞間纖維化增生可阻斷肌細(xì)胞間的電活動(dòng)傳導(dǎo)，影響輸尿管收縮舒張功能，導(dǎo)致梗阻[3]。CD147分子為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，廣泛參與組織纖維化、炎癥反應(yīng)、腫瘤發(fā)生、免疫等過程[4,5]。研究發(fā)現(xiàn)，CD147在肝和肺組織纖維化中均發(fā)揮重要作用[4～7]。但CD147在UPJO發(fā)病中的作用尚不明確。我們檢測(cè)了50例UPJO患兒UPJO組織中CD147蛋白及mRNA的表達(dá)，探討CD147在UPJO發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2014年1～12月在我院行離斷性腎盂成形術(shù)的50例單純UPJO患兒的腎盂輸尿管連接部狹窄處組織為觀察組，其中男42例、女8例，年齡(3.02±0.21)歲， 均經(jīng)影像學(xué)及術(shù)后病理檢查確診?；純盒g(shù)前均未接受任何相關(guān)治療。排除輸尿管息肉、輸尿管瓣膜等原因所致的腎積水及其他段狹窄所致的腎積水。選擇因腎實(shí)質(zhì)腫瘤或腎外傷術(shù)中切除的腎盂輸尿管連接部正常組織12例為對(duì)照組，其中男9例、女3例，年齡(5.02±0.61)歲。兩組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2CD147蛋白表達(dá)檢測(cè)采用Western blot法。將兩組標(biāo)本組織超聲裂解，提取總蛋白。取等量蛋白樣品經(jīng)SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)印于PVDF膜上，用脫脂奶粉室溫下脫色，搖床上搖動(dòng)封閉1 h，加入CD147一抗過夜。次日TBST洗膜后加二抗。將ECL發(fā)光液中A液和B液各取0.5 mL混合，立即將膜覆蓋在ECL發(fā)光液上，顯影、定影。應(yīng)用Kodak檢測(cè)系統(tǒng)觀察并照相。經(jīng)Quantity One軟件分析蛋白條帶灰度值，從而得出蛋白相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)一步進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以α-tubulin作為內(nèi)參照。

1.3CD147 mRNA表達(dá)檢測(cè)采用qRT-PCR法。取兩組標(biāo)本，采用TRIzol一步法抽提總RNA，合成cDNA。采用TaKaRa公司的SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)，總反應(yīng)體系為20 μL，引物設(shè)計(jì)采用Primer 6.0軟件，由上海生工生物工程有限公司合成。CD147特異性引物序列：上游5′-ACTCCTCACCTGCTCCTTGA-3′，下游5′-GCCTCCA-TGTTCAGGTTCTC-3′；GAPDH內(nèi)參照序列：上游5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游5′-TGGTGA-AGACGCCAGTGGA-3′。CD147 mRNA相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCT的方法計(jì)算。

2結(jié)果

2.1兩組CD147蛋白表達(dá)比較對(duì)照組、觀察組CD147蛋白表達(dá)量分別為0.10±0.03、0.38±0.04，觀察組CD147蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.05)。見圖1。

圖1　兩組CD147蛋白表達(dá)情況(Western blot法)

2.2兩組CD147 mRNA表達(dá)比較對(duì)照組、觀察組CD147 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.18、1.63±0.12，觀察組CD147 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.01)。

3討論

UPJO是導(dǎo)致先天性腎積水最重要的原因之一，發(fā)病率為0.13%～0.16%，男性多于女性。在新生兒中，約2/3的UPJO病變發(fā)生于左側(cè)，雙側(cè)病變的發(fā)病率為10%～40%[1,8]。目前對(duì)UPJO的發(fā)病機(jī)制尚不明確。研究發(fā)現(xiàn)，纖維結(jié)締組織增生可引起相應(yīng)輸尿管組織的不正常收縮，從而導(dǎo)致狹窄性小兒腎積水[3,9]。UPJO部位肌細(xì)胞間大量膠原纖維沉積增生后，螺旋狀排列的肌細(xì)胞可被縱行排列的纖維組織和肌束取代，使肌細(xì)胞互相分離，不能傳遞來(lái)自起搏細(xì)胞的電活動(dòng)傳導(dǎo)，影響了其正常收縮與舒張功能，導(dǎo)致輸尿管梗阻，引起腎積水，隨著積水逐漸加重，最終導(dǎo)致腎功能受損[3]。

CD147屬于免疫超家族成員之一，基因定位于19p13，其編碼區(qū)由269個(gè)氨基酸殘端組成，廣泛表達(dá)于多種組織與細(xì)胞中，參與組織纖維化、胚胎發(fā)育、生精過程、神經(jīng)系統(tǒng)成熟、腫瘤侵襲、動(dòng)脈粥樣硬化等多種生理、病理過程[10,11]。研究發(fā)現(xiàn)，CD147可通過TGF-β/Smads信號(hào)通路調(diào)控肝及肺組織纖維化。張大偉等[6]研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染CD147基因使其在細(xì)胞中過表達(dá)后，肝纖維化相關(guān)分子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1) mRNA表達(dá)升高。耿杰杰等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠肺間質(zhì)纖維化中，CD147能促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化，進(jìn)而產(chǎn)生多種細(xì)胞因子如TGF-β1等，參與肺組織纖維化過程。近年研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1信號(hào)通路在UPJO發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，UPJO組織中TGF-β1表達(dá)高于正?；純篬12,13]。因此，CD147可能通過導(dǎo)致腎盂輸尿管連接部組織纖維化參與UPJO的發(fā)病過程，其機(jī)制可能與TGF-β/Smads信號(hào)通路有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組CD147蛋白及mRNA表達(dá)量均高于對(duì)照組，提示CD147在UPJO組織中表達(dá)增高，可能在UPJO的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，其機(jī)制可能與其促進(jìn)腎盂輸尿管連接部組織纖維化有關(guān)。

綜上所述，UPJO組織中CD147表達(dá)增高，CD147可能通過促進(jìn)腎盂輸尿管連接部組織纖維化參與UPJO的發(fā)病過程。

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(收稿日期：2015-09-24)

中圖分類號(hào)：R726.9；R364.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2016)14-0068-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.14.025

通信作者：胡巖(E-mail: docteryanhu@126.com)

基金項(xiàng)目：河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)重點(diǎn)研究計(jì)劃項(xiàng)目(20150554)。