林曉燕，張惠林，張忠英

(廈門大學附屬中山醫(yī)院檢驗科，福建廈門361000)

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血細胞分析稀釋液滲透壓對e- CHECK質控檢測影響的探討

林曉燕，張惠林，張忠英

(廈門大學附屬中山醫(yī)院檢驗科，福建廈門361000)

摘要:目的探討SYSMEX自動化血細胞分析儀不同批號稀釋液（EPK）試劑滲透壓的差異，以及該差異對MCV等紅細胞參數(shù)產生影響。方法35個批號的EPK試劑分別留取5支樣本在中國上海醫(yī)大FM-8T滲透壓儀上進行滲透壓檢測，統(tǒng)計更換批號前后SYSMEX XE2100血細胞分析儀室內質控中MCV的結果，采用t檢驗進行顯著性分析。結果34次比對結果顯示不同批號EPK滲透壓并沒有顯著性差異（P＞0.05）。更換批號EPK前后室內質控三個水平MCV結果（共19次）不存在顯著性差異（P＞0.05）。結論SYSMEX XE2100血細胞分析儀不同批號EPK試劑滲透壓不存在顯著性差異，故一般不會對質控品的紅細胞參數(shù)（如MCV）產生影響。e-CHECK質控品貯存壓力及基質中化學成分的變化，儀器檢測循環(huán)時間及工作人員操作誤差可能是導致室內質控紅細胞參數(shù)MCV出現(xiàn)漂移的原因。

關鍵詞：EPK滲透壓；MCV；顯著性差異；e-CHECK

本實驗在排除環(huán)境條件、溫濕度、儀器設備、質控品保存、試劑、操作人員、IQC均值設置等方面原因后，將導致同批號質控品MCV室內質控圖出現(xiàn)漂移的可疑因素-EPK(稀釋液)的滲透壓的改變，進行了比較和驗證，探討在血細胞分析中EPK更換批號是否存在不同批號間試劑滲透壓的顯著性差異，是否會對室內質控MCV等紅細胞參數(shù)產生影響等問題，以期改善實驗室工作程序和提高實驗室日常工作的效率?，F(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1儀器試劑滲透壓檢測采用中國上海醫(yī)大

FM-8T滲透壓儀；血細胞分析采用SYSMEX XE2100全自動血細胞分析儀。質控品為SYSMEX XE系列配套質控品e-CHECK；試劑為SYSMEX XE系列稀釋液（EPK）。

1.2方法2011年12月開始至2015年1月，本實驗室共更換了35次批號的EPK試劑，筆者對前后兩次不同批號EPK試劑分裝于5支潔凈一次性使用試管中，進行滲透壓檢測，記錄檢測結果并進行方差齊性和顯著性檢驗，共進行了34次的顯著性比較。2011年12月開始至2015年1月，本實驗室共更換了20次批號e-CHECK質控品，記錄了20次更換EPK批號前、后實驗室血常規(guī)室內質控中MCV的結果并進行顯著性分析，剔除由于更換批號EPK試劑時剛更換批號質控品的情況（即更換批號試劑前后IQC數(shù)據(jù)記錄少于5次的情況）1次，進行了19次的顯著性比較。

2　結果

2.1 XE2100血細胞分析儀在用的不同批號EPK的滲透壓差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果記錄如表1。

2.2更換批號EPK前后血細胞分析室內質控三個水平L1-L3 MCV結果差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果記錄如表2。

3　討論

細胞膜、膀胱膜等是半透膜，會讓比較小的溶劑分子自由通過，但不會讓比較大的溶質分子通過。溶劑從比較稀的溶液通過半透膜而擴散流入較濃溶液(或純溶劑)的現(xiàn)象，稱為滲透；因為滲透而發(fā)生的靜壓力稱做溶液的滲透壓。滲透及滲透壓，與生物的成長有密切的關系。EPK滲透壓改變會影響全血標本細胞分析中紅細胞參數(shù)，如MCV、HCT、MCHC等的結果。使用高滲透壓的稀釋液時，紅細胞胞質內的水分通過細胞膜滲出，細胞脫水，體積縮小，造成一定測量容量內的血細胞過少；而當使用低滲透壓的稀釋液時，水分通過細胞膜進入胞質內，致使細胞膨脹，體積增大，會形成細胞排隊通過傳感器的重合缺損，嚴重影響血液細胞檢測的精度，故稀釋液的pH值、電導率和滲透壓是保證測定結果準確可靠的重要參數(shù)[1]。但對于EPK滲透壓是否會影響血細胞分析室內質控物的檢測結果，卻沒有相關研究給予支持或說明。曾建明等[2]研究提出Sysmex XE5000全血細胞分析儀的各項檢測指標均在1/5 CLIA’88TEa范圍內，遠遠超過1/2 CLIA’88TEa的要求。本實驗室XE2100血細胞分析儀的校準，性能驗證和室間質評的數(shù)據(jù)也表明儀器性能良好穩(wěn)定。SYSMEX血細胞分析室內質控品e－CHECK為SYSMEX原廠生產配套質控品，采用具有穩(wěn)定定值范圍的細胞懸液控制血液分析儀檢測結果的方法已經被認可。該質控品由穩(wěn)定的人類紅細胞、人類白細胞、血小板、有核紅細胞和防腐劑組成。在2－8℃的貯存條件下，有效期為91d，開瓶后在2－8℃的條件下可穩(wěn)定7d[3]。本實驗記錄顯示自2011年12月至2015年1月進行的34次更換批號EPK滲透壓比對，各批號EPK滲透壓并沒有存在顯著性差異（P＞0.05）。對更換批號EPK前后實驗室室內質控中MCV的結果進行統(tǒng)計分析表明：更換EPK前后血常規(guī)室內質控中MCV的結果不存在顯著性差異（P＞0.05）。這就說明，XE2100血細胞分析儀配套EPK試劑檢測室內質控時，不同批號EPK的滲透壓不存在顯著性差異，血常規(guī)室內質控MCV出現(xiàn)漂移的原因并非EPK滲透壓的改變。

表1　不同批號EPK滲透壓比對記錄表

圖1　血常規(guī)MCV出現(xiàn)漂移的室內質控圖

本實驗室MCV質控圖出現(xiàn)整體向上漂移1～2 SD范圍（具體見圖1），整體漂移現(xiàn)象明顯。由于儀器法在測定HCT時，是根據(jù)平均紅細胞壓積(MCV)及紅細胞數(shù)量得出的計算值，因此凡是能影響質量控制及平均紅細胞壓積測定的影響因素，均影響紅細胞壓積的測定[4]。e－CHECK為SYSMEX原廠生產配套質控品，由穩(wěn)定的人類紅細胞、人類白細胞、血小板、有核紅細胞和防腐劑組成。植物甾醇的結合強烈地影響分子間的相互作用，導致紅細胞膜的熱力學不穩(wěn)定性[5]。雖然含有防腐劑，但若持續(xù)存在影響紅細胞體積的因素，如由負壓變?yōu)檎龎?，那么質控品基質就會發(fā)生變化。首先，就是貯存壓力變化對質控品中紅細胞體積的影響。質控品在未開啟的情況下，瓶內壓力為負壓；本實驗室采用手動進樣的質控模式，故需要開啟質控品方能完成質控檢測。這就不可避免的會因為開蓋而改變質控品的管內壓力，使管內壓力由負壓轉變?yōu)檎龎褐苯訉е录t細胞體積的變化。雖然質控品經過防腐處理，但其基質為人類血細胞懸液，隨著開瓶后貯存壓力由負壓變?yōu)檎龎海琈CV會增大，本研究考慮出現(xiàn)MCV檢測結果整體漂移是質控品貯存壓力改變導致，而且壓力改變導致的MCV變化是當壓力達到某個點時候才會對MCV造成影響。其次，在稀釋-過濾系統(tǒng)中，細胞體積在每個去除低溫保護劑的循環(huán)過程中都會經歷周期性的收縮與膨脹。在血細胞分析儀中具有固定的稀釋液流速，如果前一個循環(huán)中平衡時間不夠長導致細胞傳質不夠充分（即細胞沒有到達平衡狀態(tài)就進入下一個循環(huán)），細胞體積的膨脹程度就會積累起來，導致細胞體積變化的最大值與細胞遭受的滲透性損傷增加。事實上，每次循環(huán)中周期性的收縮與膨脹也會使細胞遭受非滲透性損傷，如鉀滲漏[6，7]、細胞骨架損傷與磷脂膜重組[8]等，這些均會導致細胞MCV的改變。再者，儀器及質控品操作手冊說明：e－CHECK從冰箱拿出平衡室溫（18～30℃），并在室溫下保持15min再使用；質控品混勻應直到所有紅細胞都完全浮起來為止（大約需要顛倒20次），然后再檢測；質控品若在打開狀態(tài)下使用，應在取樣后重新裝好瓶蓋之前，使用干凈的無毛紙或布將瓶和蓋上的螺紋均擦拭干凈。及時將瓶蓋蓋緊，送回冰箱儲存[9]。質控品基質為人類血液，雖有保存液存在，但仍存在對葡萄糖、尿素等生化物質的反應性變化。有研究表明隨著尿素濃度的增加，測定的MCV值也會增加，體內、體外實驗均如此，而且尿素濃度越大，對MCV測定產生的干擾也越大[10]。而陳彤和史小波的研究指出，血細胞計數(shù)儀所測紅細胞MCV值隨著滲透壓濃度的增大而呈現(xiàn)假性增高趨勢；而血尿素、血糖及鈉離子是構成滲透壓的三種重要物質，由于這三種物質含量的改變從而導致滲透壓的改變[11]。當然，并非所有批次e－CHECK質控品均出現(xiàn)漂移，本研究不能排除某一批質控品存在同批號質控品各瓶間的差異問題，人員操作不當未將質控品螺旋帽旋緊也是影響壓力值的因素。此外，在質控品運輸過程的某個環(huán)節(jié)沒做到位，也會導致質控品的性質發(fā)生變化。

表2　更換批號EPK前后血細胞分析室內質控三個水平L1- L3的MCV結果比對記錄表

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)XE2100配套EPK試劑不同批號間滲透壓不存在顯著性差異，在使用儀器配套EPK檢測室內質控時，一般不會出現(xiàn)室內質控MCV出現(xiàn)漂移的情況。e－CHECK質控品的壓力及基質中化學成分的變化可能是導致室內質控MCV出現(xiàn)漂移的主要原因；至于MCV的變化是漸進性改變還是當貯存壓力達到某個點時才會改變還有待進一步研究。另外，儀器檢測時的循環(huán)檢測時間也是影響因素之一，我們不能一味認定儀器檢測性能的完好無誤。此外，一些未盡的外在因素及人員操作不當或許也是原因之一。對于血細胞分析室內質控，我們應該全面認識全血質控物法的局限性[12]。浮動均值法（Bull法）和全血質控物法都是屬于全血細胞分析的室內質控方法，可以從不同側面反映儀器、試劑和標本狀態(tài)。在常規(guī)應用全血質控物法時，可結合Bull法使用，以確保整個分析過程檢驗質量的可靠性[13]。

參考文獻

[1]黃勝，梁華英.稀釋液滲透壓降低對血細胞檢測的影響分析[J].實用醫(yī)技雜志，2004，11(3)：321－322.

[2]曾建明，龍一飛，李沫，等.應用Wes tgard方法評價決定圖判斷Sysmex XE5000全血細胞分析儀性能[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2012，30(3)：225－226，264.

[3]SYSMEX公司. e－CHECK質控品說明書[Z]. 2008.

[4]閆國慶，沈愛蓉，李宏偉，等.血細胞分析儀法和溫氏法測定紅細胞比容的比較[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2013，31(2)：193－194.

[5]Hac－Wydro K，Dynarowicz－Latka P. Externalization of phosphatidyl－serine from inner to outer layer may alter the effect of plant sterols on human erythrocyte membrane－The Langmuir monolayer studies [J]. Biochimica Et Biophysica Acta－Biomembranes，2012，1818(9)：2184－2191.

[6]Hoffinann EK，Lambert IH，Pedersen SF. Physiology of cell volume regulation in vertebrates[J]. Physiol Rev，2009，89(1)：193－277.

[7]Lang F，Busch GL，Ritter M，et al. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms[J]. Physiol Rev，1998，78(1)：247－306.

[8]Mirkka K，Andras K，Sergio G. Sensors、transducers and effectors that regulate cell size and shape [J]. J Biol Chem，2009，284(11)：6595－6599.

[9]SYSMEX公司. XE2100全自動血液分析儀主機操作手冊[M]. 1999.

[10]馬雙雙.血尿素升高對紅細胞平均體積測定的影響[J].重慶醫(yī)學，2006，35(20)：1888－1889.

[11]陳彤，史小波，劉培慧，等.血漿滲透壓增高患者血細胞分析儀MCV的變化[J].臨床檢驗雜志，2000，18(4)：242－243.

[12]楊文念，鐘金清，孟明，等.浮動均值法在血液分析中的應用探討[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2011，29(4)：445－447.

[13]何文軍，吳新忠，黃憲章，等.浮動均值法在血液分析室內質控中的應用[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報，2007，13(16)：115－118.

·質量控制·

(收稿日期2015－07－27；修回日期2016－02－03)

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.02.019

中圖分類號：R446.11

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)02-0185-04