郭文博，鄒志田，朱曉峰

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江佳木斯154003)

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STAT3和Ki－67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)①

郭文博，鄒志田，朱曉峰

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江佳木斯154003)

摘要:目的:觀察STAT3和Ki－67在人非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，分析兩者的表達(dá)水平及其與臨床病理因素的關(guān)系。方法:采用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)NSCLC組織及癌旁組織中的STAT3和Ki－67表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，本次研究共選擇73例NSCLC組織和30例癌旁組織，研究STAT3和Ki－67的表達(dá)與患者性別、年齡、組織學(xué)類(lèi)型等臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果: STAT3在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)(57.53%)，顯著高于其在癌旁組織中的表達(dá)(37.5%) (P＜0.01)。Ki－67在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為75.34%，而癌旁組織的表達(dá)率為36.7%。STAT3和Ki－67的表達(dá)水平均與性別、年齡和組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)(P＞0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論:①STAT3在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，尤其在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，提示STAT3在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中積極參與，是肺癌發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要因子。②Ki－67主要定位于細(xì)胞核，在NSCLC中高表達(dá)，與性別、年齡和組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)，但發(fā)現(xiàn)與有無(wú)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞:非小細(xì)胞肺癌; STAT3; Ki－67

STAT3是一種雙功能蛋白，主要是通過(guò)與酪氨酸磷酸化信號(hào)通道相偶聯(lián)而發(fā)揮作用的，然而STAT3發(fā)生過(guò)度表達(dá)將引起細(xì)胞增殖、調(diào)亡之間發(fā)生平衡的失調(diào)。相關(guān)研究表明多種人體腫瘤中存在STAT3的過(guò)度表達(dá)［2］。Ki－67被視為增殖細(xì)胞核的相關(guān)性抗原，目前被國(guó)內(nèi)外學(xué)者作為生物學(xué)標(biāo)記而廣泛使用。惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的本質(zhì)是異常細(xì)胞無(wú)限增殖和凋亡過(guò)程受阻，因而Ki－67可作為全細(xì)胞周期理想的標(biāo)記物，目前大量研究表明Ki－67的表達(dá)水平上調(diào)與腫瘤預(yù)后不良具有相關(guān)性［3～5］。本課題采用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)NSCLC組織及癌旁組織中的STAT3和Ki－67表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，從而觀察STAT3和Ki－67在人非小細(xì)胞肺癌［1］(NSCLC)組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，分析兩者的表達(dá)水平及其與臨床病理因素的關(guān)系，為NSCLC的早期診斷、臨床治療及預(yù)后判斷提供新的理論基礎(chǔ)。

1　材料與試劑

1.1材料

收集2013－01～2014－07我院手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌存檔蠟塊，并進(jìn)行系統(tǒng)分析和整理，從中挑選出各項(xiàng)資料齊整的80例，經(jīng)過(guò)詳細(xì)的閱片分析最后得到73例有效的病例。本次研究根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)將73例有效病例進(jìn)行分型，得到腺癌40例，鱗癌33例，此外還分出無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例有24例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例為49例;同時(shí)選取癌旁相對(duì)正常肺組織30例作為正常對(duì)照組(取自距癌組織邊緣＞5cm的肺組織，并經(jīng)病理證實(shí)未查見(jiàn)癌細(xì)胞)。在73例非小細(xì)胞肺癌組織中，男45例，女28例，年齡34～82歲，平均62.4歲，其中＜60歲的患者有38例，≥60歲的患者有35例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行任何的化療和放療。選取的所有標(biāo)本用福爾馬林固定后進(jìn)行石蠟包埋，連續(xù)性切片，且都分別行HE染色后重新復(fù)習(xí)病理。

1.2主要試劑

鼠STAT3單克隆抗體購(gòu)自武漢博士德生物工程公司，鼠抗人單克隆Ki－67抗體、S－P試劑盒以及EDTA抗原修復(fù)液(pH 8.0)均為北京中杉金橋生物科技有限公司產(chǎn)品。DAB顯色試劑盒為武漢博士德生物工程公司產(chǎn)品。不同濃度梯度的酒精以及二甲苯等為中心實(shí)驗(yàn)室提供。

2　方法

2.1實(shí)驗(yàn)方法

免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)［6］STAT3及Ki－67表達(dá)，組織經(jīng)10%甲醛固定和石蠟包埋，5μm厚切片，常規(guī)脫蠟和脫水化后，加過(guò)氧化物酶阻斷內(nèi)源性酶的活性，分別加入一抗、二抗進(jìn)行孵育。DAB顯色，蘇木精復(fù)染，封片后鏡下觀察。

2.2結(jié)果判定

免疫組化染色結(jié)果的判定:陽(yáng)性結(jié)果為NSCLC組織中的腫瘤細(xì)胞。STAT3陽(yáng)性信號(hào)定位為腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)黃色至棕褐色的顆粒，其具體評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)有相關(guān)參考文獻(xiàn)的報(bào)道。Ki－67染色定位于細(xì)胞核。方法:將染好的組織切片放置于400倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，觀察視野中的全部腫瘤細(xì)胞和免疫染色為陽(yáng)性結(jié)果的細(xì)胞(癌旁組織則計(jì)數(shù)肺泡上皮細(xì)胞)，然后計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)的百分?jǐn)?shù)。若鏡下觀察到STAT3陽(yáng)性細(xì)胞的百分率＜5%則判定為陰性(－)，陽(yáng)性細(xì)胞百分率為5%～25%時(shí)判定為弱陽(yáng)性(+ )，陽(yáng)性細(xì)胞百分率25%～50%判定為陽(yáng)性()，陽(yáng)性細(xì)胞百分率＞50%時(shí)判定為強(qiáng)陽(yáng)性()［7］。鏡下觀察Ki－67陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞百分率＜30%時(shí)即可判定為陰性，≥30%時(shí)則判定為陽(yáng)性。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行結(jié)果的分析。所有測(cè)得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，檢測(cè)的結(jié)果采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　結(jié)果

3.1 STAT3在NSCLC中的表達(dá)

在所選取的73例非小細(xì)胞肺癌組織中，STAT3在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的陽(yáng)性率為57.53% (42/73)，而癌旁組織的表達(dá)率為26.7%(8/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。鏡下觀察免疫組化結(jié)果中的陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞的胞漿和部分胞核出現(xiàn)棕黃色的顆粒，此結(jié)果與相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道相一致［8～10］。見(jiàn)圖1。

圖1　STAT3在NSCLC以及癌旁組織中的表達(dá)情況

3.2 Ki－67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)

結(jié)果顯示Ki－67的表達(dá)情況主要定位在腫瘤細(xì)胞的胞核中，并且胞核中可見(jiàn)棕黃色的顆粒即為陽(yáng)性。在所選取的73例非小細(xì)胞肺癌組織中，Ki－67在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的陽(yáng)性率為75.34% (55/ 73)，而癌旁組織的表達(dá)率為36.7% (11/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)圖2。

圖2　Ki－67在NSCLC以及癌旁組織中的表達(dá)

3.3 STAT3的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

在所有肺癌標(biāo)本中，腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為67.5%(27/40)，在鱗癌中為54.5% (18/33)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果表明STAT3的表達(dá)與病理類(lèi)型無(wú)關(guān)。此外STAT3的表達(dá)與性別、年齡無(wú)關(guān)(P＞0.05)，而與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1　STAT3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3.4 Ki－67的表達(dá)水平與臨床病理特征之間的相關(guān)性

Ki－67在鱗癌中的表達(dá)相對(duì)于在腺癌中的表達(dá)較高，但無(wú)顯著差異性(P＞0.05) ;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，且差異有顯著性(P＜0.01) ; Ki－67的表達(dá)與性別、年齡無(wú)關(guān)(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2　STAT3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

4　討論

近年來(lái)，關(guān)于STAT3信號(hào)通路與非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)關(guān)系的研究表明在NSCLC組織中STAT3的表達(dá)水平較在癌旁組織的表達(dá)明顯上調(diào)，且STAT3表達(dá)水平與分化程度具有負(fù)相關(guān)聯(lián)系，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)顯著增加，由此可見(jiàn)STAT3與NSCLC的組織分化水平及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有緊密聯(lián)系。本次研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，非小細(xì)胞肺癌中STAT3的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，此結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致。此外，研究還發(fā)現(xiàn)了STAT3的表達(dá)與病理類(lèi)型之間沒(méi)有特定的相關(guān)性，并且發(fā)現(xiàn)其在腺、鱗癌中的表達(dá)比較不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，這一研究結(jié)果可能與病例數(shù)的選擇以及病例資料的選擇有一定的關(guān)系，需要對(duì)其進(jìn)行更深入的研究。Ki－67被視為增殖細(xì)胞核的相關(guān)性抗原，此次研究表明Ki －67在NSCLC中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，且兩者的差異有顯著性(P＜0.05)。有相關(guān)的文獻(xiàn)指出如果細(xì)胞的增殖過(guò)程越活躍，其染色質(zhì)的復(fù)制增加，造成有絲分裂的活動(dòng)也越活躍，則Ki－67的表達(dá)也就明顯升高。因此，腫瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程發(fā)生失控，這一結(jié)果促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖高于正常組織，因此就表現(xiàn)為Ki－67的表達(dá)出現(xiàn)明顯增高［10］。結(jié)果還顯示Ki－67在鱗癌中的表達(dá)相對(duì)于在腺癌中的表達(dá)較高，但無(wú)顯著差異性(P＞0.05)，根據(jù)此結(jié)果可以推斷得出肺鱗癌細(xì)胞的增殖活躍程度要高于腺癌的增殖，推測(cè)這一結(jié)論可能與鱗癌的染色體倍增時(shí)間較短，且分裂速度較快有很大的相關(guān)性，由此也能夠充分說(shuō)明Ki－67在反映腫瘤細(xì)胞的增殖及生長(zhǎng)速度上具有意義，然而此理論的具體機(jī)理還有待于進(jìn)一步的研究探索。STAT3和Ki－67在肺癌中均具有較高水平的表達(dá)，因此對(duì)于這兩個(gè)因子的探究將會(huì)進(jìn)一步的揭示肺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)理，也將會(huì)成為肺癌診斷以及治療的新的研究靶向，進(jìn)而為肺癌患者提供更為高效的治療手段，為提高患者的生存周期以及生存質(zhì)量做出貢獻(xiàn)。

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(收稿日期:2015－04-07)

通訊作者:鄒志田(1963～)男，黑龍江佳木斯人，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E－mail: zouzhitian@163.com。

作者簡(jiǎn)介:①郭文博(1988～)男，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。

中圖分類(lèi)號(hào):R586.2+4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

文章編號(hào):1008－0104(2016) 02－0111－03