王　影，蔡棟梁，黃佳濱

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江佳木斯154003)

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酸棗仁提取物對失眠小鼠腦內DA、NE的影響①

王影，蔡棟梁，黃佳濱

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江佳木斯154003)

摘要:目的:研究酸棗仁提取物對失眠小鼠腦組織內多巴胺(DA)和鹽酸去甲腎上腺素(NE)的影響。方法:通過測定戊巴比妥鈉小鼠入睡潛伏期、戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間、小鼠直接睡眠時間及“失望”小鼠不動時間對酸棗仁提取物進行藥效學研究;通過測定小鼠腦組織內DA和NE的含量。結果:酸棗仁提取物低劑量組、高劑量組均能縮短戊巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期，與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05) ;高劑量組能降低小鼠腦組織內DA、NE含量，增加戊巴比妥鈉小鼠入睡率并延長睡眠時間，增強小鼠的“失望”行為，與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05) ;結論:酸棗仁提取物安全性高，鎮(zhèn)靜安神效果顯著，為新藥臨床實驗研究提供了依據(jù)。

關鍵詞:酸棗仁提取物; DA; NE

目前快速發(fā)展的經濟社會，人們的生活水平不斷提高，生活節(jié)奏也不斷加快，各種壓力也在增加，隨之出現(xiàn)了失眠的癥狀，這樣影響了人們的生活和工作，延誤治療可能會轉化為慢性失眠或其他神經系統(tǒng)疾?。?］。因此，失眠癥的治療已成為當前醫(yī)藥界的研究熱點。酸棗仁為李科棗屬植物酸棗的種子經烘干而成。其具有斂汗生津、補肝養(yǎng)心安神之功效。主要用于心煩意亂，惡夢多夢，自汗等癥的治療。本文以中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論和現(xiàn)代藥理研究為依據(jù)，應用現(xiàn)代技術和方法對酸棗仁提取物進行較深入的研究，為新藥臨床實驗研究提供依據(jù)。

1　材料與方法

①儀器: TG16－WS高速低溫離心機(湘儀離心機儀器有限公司) ; 960－MC熒光分光光度計(上海分析儀器總廠) ; FA－2004型電子分析天平(上海恒平科學儀器有限公司) ;數(shù)控超聲波清洗器(昆明市超聲儀器有限公司)。②試劑:戊巴比妥鈉(中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司) ;地西泮注射液(天津金耀氨基酸有限公司) ;朱砂安神丸(藥都制藥集團股份有限公司) ;多巴胺標準品DA(Sigma公司)鹽酸去甲腎上腺素標準品NE(Sigma公司) ;酸棗仁提取物(自制)。③實驗動物:昆明種小鼠(佳木斯大學實驗動物中心)。

1.2實驗方法

1.2.1實驗動物分組及給藥

取昆明種小鼠56只，雌性28只，雄性28只，隨機分為4組，每組14只。適應環(huán)境2d后，在第3天給藥，空白作為對照組:灌服蒸餾水1.0mL;陽性對照組:灌服地西泮l.1mg·kg－1;低劑量樣本組:灌服酸棗仁提取物8g·kg－1;高劑量樣本組:灌服酸棗仁提取物20g·kg－1。每天一次，連續(xù)灌服7d。

1.2.2小鼠睡眠資料測定

觀察末次給藥后1.0h內各組小鼠入睡只數(shù)。小鼠放置于背臥位時，如大于40～60秒不能翻正者即為小鼠進入睡眠狀態(tài)，以入睡小鼠只數(shù)為計數(shù)資料;末次給藥60min后，將膠帶紙固定鼠尾在距尾尖2.0cm處，固定處系一15cm 8號手術線，另一端固定在臺架上，使小鼠頭向下懸掛。小鼠有活動時不記錄，小鼠活動不出現(xiàn)時開動秒表，觀察7min，記錄后6min內小鼠不動的時間。以小鼠不動時間為計量資料;末次給藥60s后，給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉，以刺激反射消失為指標，觀察給予藥物能否延長戊巴比妥鈉的睡眠時間;各組小鼠腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉，記錄30min內入睡小鼠數(shù);于末次給藥后25min后給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉，把刺激反射消失作為檢測指標，觀察給予藥物對戊巴比妥鈉入睡潛伏期的影響。

1.2.3小鼠腦組織內DA、NE的含量測定

1.2.3.1腦組織樣本處理

于末次給藥1h后，處死小鼠，用剪刀剪開顱骨取出小鼠的小腦，用常溫生理鹽水沖洗小腦組織表面，用濾紙吸干水分，用天平稱重后，放在帶有刻度離心管中，攪拌勻漿，用零度酸化的正丁醇補足到4.5mL，振蕩5min，離心5min(3000r·min－1)，取上清液2.5mL升置于另一帶塞離心管內，加5mL正庚烷和0.1當量濃度鹽酸1.2mL振蕩8min，離心10min，溶液分為上下兩層。取水相0.6mL，加入0.06摩爾pH7.2磷酸鹽緩沖液1.6mL，碘液0.1mL，靜置3min，加亞硫酸鈉0.6mL，靜置3min，加6當量濃度醋酸0.6mL，沸水浴25min，冷卻后，在Ex: 365nm，Em: 480nm時測定NE熒光強度，加45%磷酸0.lmL，沸水浴25min后，在Ex: 310nm，Em: 370nm時測定DA熒光強度。

1.2.3.2標準品溶液處理

取標準液0.2mL置于帶刻度離心管中封塞，按著“組織樣品處理”方法進行操作。

1.2.3.3空白溶液處理

取重蒸餾水0.2mL，放在帶刻度離心管中封塞，按著“組織樣品處理”方法進行操作。

1.2.4計算公式:

1.3統(tǒng)計學方法

將測得的數(shù)據(jù)，采用t檢驗進行統(tǒng)計學分析。

2　結果

2.1小鼠直接睡眠實驗結果

受試驗小鼠在給予藥物后，空白對照組和低劑量樣本組小鼠活動自如，沒有睡眠跡象，高劑量組的小鼠亦沒有出現(xiàn)入睡跡象，而出現(xiàn)毛聳立、蜷縮、懶動，與空白對照組相比，陽性對照組小鼠入睡率為87.5%，有著性差異(P＜0.01) ;高、低劑量組小鼠入睡率為0.01，無顯著性差異?？梢娝釛椚侍崛∥餆o論高劑量還是低劑量均不能提高小鼠直接睡眠的入睡率。見表1。

表1　小鼠直接睡眠資料結果統(tǒng)計(±s)

表1　小鼠直接睡眠資料結果統(tǒng)計(±s)

注:與空白對照組比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別　　不動時間(s)　　睡眠時間(min)　　潛伏期(min)空白對照組95.2±74.1　 23.4±17.3　 38.8±11.1陽性對照組　160.6±27.8*　81.3±12.2＊＊　21.9±6.0樣品低劑量組　114.5±32.7　 29.5±20.5　 27.1±7.8*樣品高劑量組　166.7±35.2*　50.8±19.0＊＊　22.7±7.3＊＊

2.2小鼠腦組織內DA、NE的含量測定

將測定DA結果進行t檢驗，與空白對照組比較，陽性對照組與樣品高劑量組均能顯著降低小鼠腦組織內DA含量(P＜0.05) ;將測定NE結果統(tǒng)計進行t檢驗，與空白對照組比較，陽性對照組與樣品高劑量組均能顯著降低小鼠腦組織內DA含量(P＜0.05)。見表2。

表2　樣品含量測定(±s，n =14)

表2　樣品含量測定(±s，n =14)

注:與空白對照組比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別　DA平均含量(g·kg－1)　 NE平均含量(g·kg－1)空白對照組1.46±0.99　0.95±0.3232陽性對照組　0.63±0.33*　0.4467±0.3822*樣品低劑量組　1.26±0.71　0.7312±0.2302樣品高劑量組　0.63±0.09*　0.4677±0.2581*

3　討論

在藥效學實驗過程中采用隨機化設計觀察小鼠在給藥前后的組間行為學差別，為減少誤差，應選擇安靜溫暖的環(huán)境進行實驗，同時還要保證操作輕巧。小鼠腦組織組織內DA、NE提取液制備時，煮沸時間對DA和NE的熒光強度有影響，在15min，DA和NE的熒光強度隨時間的延長分別增強和減弱;在15～25min，DA和NE的熒光強度穩(wěn)定，因此，煮沸時間應選擇在15～25min。本實驗對失眠大鼠給予酸棗仁提取物，無論低劑量8g·kg－1、還是高劑量20g·kg－1均能縮短巴比妥鈉小鼠入睡潛伏期，與空白對照組有顯著性差異(P＜0.05)，給予高劑量酸棗仁提取物能降低戊巴比妥鈉小鼠腦組織DA、NE的含量，增加了戊巴比妥那小鼠入睡率并延長睡眠時間，增強了小鼠的失望行為，而且與空白對照組比較均有顯著性差異，充分表明酸棗仁提取物具有鎮(zhèn)靜安神、使用安全的功效，由此我們可以設想將酸棗仁提取物用于接近人類動物猴等動物身上，觀察其對失眠猴等動物睡眠的影響，如同對戊巴比妥小鼠的作用效果，可以將其引入臨床觀察，為改善臨床失眠患者的藥物研究提供切實可行的實驗依據(jù)。

參考文獻:

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［6］王心明，嚴明秀.引起睡眠障礙的常見原因［J］.中國社區(qū)醫(yī)師，2012，18(14) : 15

(收稿日期:2015－10－26)

作者簡介:王影(1964～)女，黑龍江佳木斯人，學士，主任醫(yī)師。

基金項目:①佳木斯大學科學技術項目，編號: L2012－056。

中圖分類號:R749.7+1

文獻標識碼:A

文章編號:1008－0104(2016) 02－0023－02