葉浩昕，范紹翀，潘永，鐘曉聲，李江，戴智梅，嚴睿成

(廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院，廣州511300)

鼻咽癌組織血管生成擬態(tài)觀察及其意義

葉浩昕，范紹翀，潘永，鐘曉聲，李江，戴智梅，嚴睿成

(廣州市增城區(qū)人民醫(yī)院，廣州511300)

目的 觀察鼻咽癌組織中血管生成擬態(tài)(VM)情況，并探討其與患者臨床病理參數的關系。方法 選擇鼻咽癌組織(鼻咽癌組)82例份和鼻咽慢性炎癥組織(炎癥組)30例份，采用CD31和PAS雙重染色檢測VM情況，并分析其與鼻咽癌患者臨床病理參數的關系。結果 鼻咽癌組23例份(28.05%)存在VM，炎癥組不存在VM，兩組VM陽性率比較有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。VM與鼻咽癌患者年齡、性別、組織類型均無關(P均>0.05)，而與淋巴結轉移有關(P<0.01)。Pearson相關分析顯示，VM陽性率與鼻咽癌患者淋巴結轉移呈正相關(r=0.502，P<0.01)。結論 鼻咽癌組織中存在VM，且與患者的淋巴結轉移有關。

鼻咽癌；血管生成擬態(tài)；淋巴結轉移；預后

惡性腫瘤需要獲得足夠血供，才能滿足其快速生長的需求[1]。經典觀點認為，只有內皮細胞才能形成血管，但是當內皮細胞依賴性血管不能滿足快速生長的腫瘤組織時，非內皮細胞的血管性結構會出現(xiàn)在惡性腫瘤組織中，以滿足其生長需要，這一現(xiàn)象被稱為血管生成擬態(tài)(VM)[2]。研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌[3]、黑色素瘤[4]、卵巢癌[5]、前列腺癌[6]、惡性膠質瘤[7]、骨肉瘤[8]、肺癌[9]組織中均存在VM，但目前關于鼻咽癌組織是否存在VM及其與患者臨床病理參數關系的報道較少，為此我們進行了如下研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2012年1月～2015年4月在我院病理科存檔的鼻咽癌組織82例份(鼻咽癌組)，均經組織病理檢查確診?；颊吣?8例、女24例，年齡29～78歲、平均46.2歲；伴頸部淋巴結轉移32例，不伴轉移50例；組織類型分化型非角化性57例，未分化型非角化性25例。另選同期鼻咽部慢性炎癥組織20例份(炎癥組)，患者男15例、女5例，年齡25～71歲、平均44.1歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究均獲得患者的知情同意，并經過醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 VM觀察 兩組組織均由4%中性緩沖甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后進行VM觀察。①HE染色：石蠟組織3 μm厚度切片，常規(guī)脫蠟至水。蘇木素染色2 min，自來水洗2～3 min，1%鹽酸乙醇分化6 s，自來水返藍20 min，伊紅染色5 min。常規(guī)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，干片后中性樹膠封片，光學顯微鏡400倍下由高年資病理醫(yī)師進行觀察。②免疫組化CD31聯(lián)合PAS雙重染色：石蠟組織3 μm厚度切片，常規(guī)脫蠟至水，加入檸檬酸鹽抗原修復液，高壓鍋加熱修復3 min。自然冷卻后PBS洗5 min×3次，3%H2O2室溫孵育10 min，PBS洗3 min×3次。加入CD31即用型抗體37 ℃孵育1 h，PBS洗3 min×3次；加入快捷型酶標羊抗鼠/兔IgG聚合物20 min，PBS洗3 min×3次。DAB顯色試劑盒顯色，顯微鏡下控色，蒸餾水終止染色，0.5%高碘酸氧化10 min；蒸餾水稍洗，Schiff氏液避光染色20 min，0.5%偏重亞硫酸鈉滴洗2 min×2次；蒸餾水稍洗，蘇木素復染細胞核，常規(guī)中性樹膠封片，400倍光學顯微鏡下由高年資病理醫(yī)師進行觀察。VM判斷標準:VM為CD31陰性的鼻咽癌細胞圍成的管腔樣結構，一些管腔內可見紅細胞，其外層被PAS陽性物質(紫紅色)圍繞[10]。如管壁有CD31陽性的血管內皮細胞，且PAS染色陽性，則判定為內皮依賴性血管；PAS陽性而CD31陰性則判定為非內皮依賴性血管，即VM。

1.3 鼻咽癌組織VM陽性與患者臨床病理參數的關系 收集觀察組的臨床資料(性別、年齡、組織類型、淋巴結轉移)，并分析其與VM陽性的關系。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Pearson相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組VM情況 ①HE染色：部分鼻咽癌組織中存在有癌細胞圍繞的呈管腔樣、網格樣結構，內無血管內皮細胞被覆(見插頁Ⅲ圖5A)。②CD31和PAS雙重染色：鼻咽癌組織中血管表現(xiàn)為CD31及PAS陽性；管腔樣、網格樣結構PAS陽性、CD31陰性，符合VM的染色表現(xiàn)，且存在VM的腫瘤區(qū)域很少出現(xiàn)壞死；一些CD31和PAS均陰性的網格樣及管道樣結構既不是血管也不屬于VM表現(xiàn)(見插頁Ⅲ圖5B)。觀察組中23例份(28.05%)存在VM，對照組中不存在VM，兩組VM陽性率比較有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。

2.2 VM與鼻咽癌患者臨床病理參數的關系 VM與鼻咽癌患者的年齡、性別、組織類型均無關(P均>0.05)，而與淋巴結轉移有關(P<0.01)，見表1。Pearson相關分析顯示，VM陽性率與鼻咽癌患者淋巴結轉移呈正相關(r=0.502，P<0.01)。

表1 VM與鼻咽癌患者臨床病理參數的關系

3 討論

鼻咽癌早期不具有特異性臨床表現(xiàn)，因此確診時患者往往處于中晚期。臨床上70%以上的鼻咽癌患者以頸部腫大結節(jié)就診，其特點是容易發(fā)生浸潤和轉移，局部復發(fā)和遠處轉移是其治療失敗的主要原因[10]。研究表明，VM在腫瘤的生長及轉移過程中具有重要作用，腫瘤患者存在VM者生存期更短，并且比無VM者更容易發(fā)生轉移；VM還能降低抗腫瘤血管生成藥物的治療效果[11]。因此，VM在腫瘤的生物學行為中可能具有重要的作用和意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織中有23例傷符合VM表現(xiàn)的管腔樣、網格樣結構，證實鼻咽癌組織中存在VM，且存在VM的腫瘤區(qū)域很少出現(xiàn)壞死，間接證實了VM是一種功能性循環(huán)結構。研究表明，VM不僅是腫瘤獲得血供的一種方式，而且與腫瘤的臨床分期、分級和腫瘤的轉移、預后等均有一定相關性[5,7,9]。頸部淋巴結轉移是鼻咽癌患者就診的主要原因，淋巴結轉移與鼻咽癌患者的臨床分期及預后有直接關系[12]。本研究結果顯示，VM與鼻咽癌患者的淋巴結轉移呈正相關，而與患者的年齡、性別、組織類型均無關(本研究未探討VM與鼻咽癌臨床分期的關系，原因為Ⅲ期以上患者例數過少)。既往研究表明，鼻咽癌臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期的患者VM陽性率比較無明顯差異，且患者預后基本相同[12]。因此推測， VM現(xiàn)象的存在可能提示更高的鼻咽癌臨床分期以及更差的預后，但尚待長期的隨訪及更大樣本資料的支持。

綜上所述，鼻咽癌組織中存在VM，且與淋巴結轉移有關。本研究樣本量較少，尚不足以形成足夠的證據證明VM與患者的預后有關，但多項研究表明，VM主要存在于高度惡性和高轉移能力的惡性腫瘤中[4～9]。因此，我們推測鼻咽癌組織中存在VM者更易發(fā)生淋巴結轉移，且預后更差。

[1] Hanahan D, Folkman J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis[J]. Cell, 1996,86(3):353-364.

[2] Qiao L, Liang N, Zhang J, et al. Advanced research on vasculogenic mimicry in cancer[J]. J Cell Mol Med, 2015,19(2):315-326.

[3] 王蓓蓓,武世伍,承澤農,等.宮頸鱗癌中血管生成擬態(tài)檢測及其臨床意義[J].實用醫(yī)學雜志,2014,30(19):3111-3113.

[4] Maniotis AJ, Folberg R, Hess A, et al. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry[J]. Am J Pathol, 1999,155(3):739-752.

[5] Millimaggi D, Mari MD, Ascenzo S, et al. Vasculogenic mimicry of human ovarian cancer cells: role of CD147[J]. Int J Oncol, 2009,35(6):1423-1428.

[6] Liu R, Yang K, Meng C, et al. Vasculogenic mimicry is a marker of poor prognosis in prostate cancer[J]. Cancer Biol Ther, 2012,13(7):527-533.

[7] Liu XM, Zhang QP, Mu YG, et al. Clinical significance of vasculogenic mimicry in human gliomas[J]. J Neurooncol, 2011,105(2):173-179.

[8] Ren K, Yao N, Wang G, et al. Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma[J]. Hum Pathol, 2014,45(10):2120-2129.

[9] Wu S, Yu L, Cheng Z, et al. Expression of maspin in non-small cell lung cancer and its relationship to vasculogenic mimicry[J]. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci, 2012,32(3):346-352.

[10] Folberg R, Maniotis J. Vasculogenic mimicry[J]. Apmis, 2004,112(7-8):508-525.

[11] Chen W, Hu GH. Biomarkers for enhancing the radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma[J]. Cancer Biol Med, 2015,12(1):23-32.

[12] 中國鼻咽癌臨床分期工作委員會.鼻咽癌92分期修訂工作報告[J].中華放射腫瘤學雜志,2009,18(1):2-6.

范紹翀(E-mail: fansc32@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.20.036

R766.3

B

1002-266X(2016)20-0091-02

2015-08-03)