顏 格，于 燕，王茂德

（西安交通大學(xué)：1.第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西西安 710061；2.醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院，陜西西安 710061）

PARP抑制劑對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)型血管痙攣及炎癥因子的影響

顏 格1，于 燕2，王茂德1

（西安交通大學(xué)：1.第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西西安 710061；2.醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院，陜西西安 710061）

目的 研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制劑3－氨基苯甲酰胺（3－AB）對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后遲發(fā)型腦血管痙攣（DCVS）的作用及對(duì)炎癥因子單核細(xì)胞趨化蛋白－1（MCP－1）、超敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）含量的影響，并探討其與NF－κB信號(hào)通路的關(guān)系。方法 將80只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（n＝8）、假手術(shù)組（n＝8）、SAH組（n＝32）和3－AB（n＝32）組。采用枕大池2次注血法建立大鼠SAH模型，并給與大鼠腹腔注射3－AB（30mg/kg），于2次注血后3、5、7、14d處死取材，光鏡下觀察SAH后腦基底動(dòng)脈形態(tài)變化；ELISA檢測(cè)腦組織中PARP和MCP－1、hsCRP的含量；免疫組化方法檢測(cè)大鼠腦基底動(dòng)脈NF－κB的表達(dá)。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，SAH模型建立后第5天，大鼠基底動(dòng)脈痙攣程度達(dá)到峰值［（30.47±3.89）％］，基底動(dòng)脈管壁厚度和管腔內(nèi)徑分別為（16.44±1.32）μm和（178.21±11.13）μm，腦血流量減少近60％（P＜0.01），基底動(dòng)脈NF－κB在胞質(zhì)及核內(nèi)表達(dá)明顯增強(qiáng)，腦組織中PARP含量顯著升高（P＜0.01），MCP－1、hsCRP含量亦顯著增高（P＜0.01），分別為（365.29±28.08）pg/mL和（402.16±48.99）ng/mL；與SAH組比較，3－AB干預(yù)5d后，大鼠基底動(dòng)脈痙攣程度、管腔狹窄、管壁增厚明顯緩解（P＜0.01），其值分別為（22.65±3.21）％、（14.89±1.27）μm和（198.56±10.91）μm，腦血流量明顯增加，基底動(dòng)脈NF－κB在胞質(zhì)及核內(nèi)表達(dá)明顯降低，腦組織中PARP的含量顯著降低（P＜0.01），腦組織MCP－1、hsCRP含量顯著下降（P＜0.01），分別為（126.51±18.67）pg/mL和（285.39±39.07）ng/mL。結(jié)論 PARP抑制劑3－AB能夠減輕SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣，抑制腦組織的炎癥反應(yīng)，其機(jī)制可能與NF－κB信號(hào)通路有關(guān)。

蛛網(wǎng)膜下腔出血；多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）；炎癥反應(yīng)；NF－κB信號(hào)通路

腦卒中有5％是由蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）引起的［1－2］。SAH最常見(jiàn)的并發(fā)癥有遲發(fā)型腦血管痙攣（delayed development cerebral vasospasm，DCVS）及遲發(fā)性腦缺血、再出血和腦水腫等，其中DCVS最為嚴(yán)重，是SAH患者致死與致殘的主要原因［3］。然而關(guān)于SAH引起DCVS的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，至今仍無(wú)理想的預(yù)防和治療方法。因此，關(guān)于SAH后DCVS的發(fā)生機(jī)制、診斷及臨床治療成為當(dāng)前神經(jīng)系統(tǒng)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。最新的研究表明，炎癥反應(yīng)在SAH后DCVS的啟動(dòng)和維持中發(fā)揮著重要作用［4－5］。多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly ADP－ribose polymerase，PARP）是近年發(fā)現(xiàn)的治療炎性疾病的一個(gè)新靶點(diǎn)，PARP過(guò)度活化能在基因水平調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)因子的表達(dá)，從而導(dǎo)致細(xì)胞變性壞死，引起炎癥反應(yīng)［6］。PARP可通過(guò)影響轉(zhuǎn)錄因子如核因子－κB（nuclear factor－κB，NF－κB）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、激活蛋白－1等參與炎性基因表達(dá)的調(diào)節(jié)［7］。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)多種炎癥因子轉(zhuǎn)錄的NF－κB及其共活化物PARP能夠加重SAH后的炎癥反應(yīng)［8］。因此，PARP抑制劑在SAH中的應(yīng)用已引起廣泛關(guān)注。目前已有多種PARP抑制劑應(yīng)用于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，如1，5－異喹啉二醇、3－氨基苯甲酰胺（3－AB）、PJ34、5－氨基異喹啉酮等［9］，其中3－AB是一種PARP特異性抑制劑，它能夠有效地降低PARP的表達(dá)，該特性已在大鼠及家兔其他器官實(shí)驗(yàn)中得以證實(shí)［10］。本研究應(yīng)用大鼠SAH模型模擬DCVS的發(fā)生，使用PARP抑制劑3－AB，通過(guò)觀察其干預(yù)后炎癥因子單核細(xì)胞趨化蛋白－1（monocyte chemotactic protein 1，MCP－1）、超敏C反應(yīng)蛋白（hypersensitive C－reactive protein，hsCRP）含量及NF－κB表達(dá)的變化，從而揭示3－AB對(duì)SAH后腦組織炎癥反應(yīng)的抑制作用及與PARP/NF－κB信號(hào)通路的關(guān)系，并探討PARP在SAH后DCVS形成中的作用，為SAH及其并發(fā)癥的治療提供新的思路和策略。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 大鼠MCP－1、hsCRP和PARPELISA試劑盒均購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司；3－AB購(gòu)自梯希愛(ài)（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；兔抗大鼠NF－κB抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；免疫組化染色試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康雄性Sprague－Dawley （SD）大鼠，體質(zhì)量（180±20）g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。80只SD大鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組8只，不做任何處理；假手術(shù)組8只，枕大池2次穿刺，注入與血等量的人工腦脊液；SAH組32只，枕大池2次注血法建立SAH模型；3－AB干預(yù)組32只，建立SAH模型后，分別于第2次注血后3、5、7、14d將SAH組和3－AB組各處死8只。3－AB干預(yù)組于第1次注血后30min開(kāi)始腹腔注射給藥，每天給藥1次，給藥劑量為30mg/kg，SAH組、正常對(duì)照組和假手術(shù)組每日腹腔注射等體積生理鹽水。

1.3 HE染色 分別于建模后3、5、7、14d處死動(dòng)物，取腦組織基底動(dòng)脈及其周圍腦干組織，制作病理切片行HE染色。光鏡下觀察基底動(dòng)脈血管壁變化，并采用德國(guó)LEICA公司Q550CW圖像分析采集系統(tǒng)分析，量化分析各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腦基底動(dòng)脈的形態(tài)變化以及血管管壁厚度和血管內(nèi)徑。

1.4 免疫組化檢測(cè)NF－κB表達(dá) 腦組織基底動(dòng)脈病理切片常規(guī)脫蠟，山羊血清封閉后加入抗NF－κB抗體（1∶400）。PBS洗后滴加生物素化二抗工作液，37℃溫箱濕盒內(nèi)孵育30min，PBS沖洗3次后，滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液，孵育過(guò)夜。最后用DAB顯色，蘇木精核染，自來(lái)水沖洗，5mL/L鹽酸水分化，梯度脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片、鏡檢。陰性對(duì)照用PBS替代一抗，其余步驟同上。采用德國(guó)LEICA公司圖像采集分析系統(tǒng)觀察腦基底動(dòng)脈及腦干組織NF－κB表達(dá)及分布情況。

1.5 ELISA檢測(cè)PARP、MCP－1、hsCRP含量

SAH模型建立后5d處死動(dòng)物，取100mg腦組織，PBS洗去血污后，剪碎于組織研磨器中，加入1mL 的PBS制成勻漿，－20℃過(guò)夜。反復(fù)凍融2次，破壞細(xì)胞膜后，將組織勻漿于4℃條件下5 000g離心5min，取上清，并分裝保存于－80℃。上清液凍存樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，且檢測(cè)前需要再次離心。按試劑盒的要求配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液，采用ELISA法測(cè)定腦組織中PARP、MCP－1、hsCRP含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果以珔x±s表示，各組樣本均數(shù)比較均采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠行為學(xué)觀察 參照KAOUTZANIS［11］的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分法，對(duì)運(yùn)動(dòng)、睜眼、進(jìn)食反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分范圍為3～11分，11分為正常，分別于術(shù)前及術(shù)后1、3、5、7、14d對(duì)大鼠進(jìn)行評(píng)分。

正常對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠精神、食欲正常。SAH組毛發(fā)蓬松，攝食減少，呈頭低位蜷縮狀，活動(dòng)明顯減少，小部分可出現(xiàn)球結(jié)膜下出血。3－AB組與SAH組比較，攝食和活動(dòng)均改善（表1）。各組大鼠均有不同程度神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)（P＜0.05），其中3－AB組5d時(shí)神經(jīng)功能缺損較SAH組有明顯減輕（P＜0.05）。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分Tab.1 Neurological deficit scores of the rats（珔x±s，n＝8）

2.2 SAH后腦血流量的變化 多普勒腦血流監(jiān)測(cè)儀觀察大鼠造模后腦血流量改變，各個(gè)體均以其術(shù)前檢查結(jié)果為基準(zhǔn)計(jì)算腦血流減少率。SAH模型建立后不同時(shí)間大鼠腦血流量均有不同程度減少（與對(duì)照組比較，P＜0.01）；3－AB組大鼠腦血流量減少均有不同程度緩解，尤以5d時(shí)較為顯著（P＜0.05，圖1）。

圖1 各組大鼠腦血流量減少率的比較Fig.1Comparison of cerebral blood flow reduction rate in rats after subarachnoid hemorrhage

2.3 腦基底動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化 腦基底動(dòng)脈HE染色結(jié)果顯示，正常對(duì)照組和假手術(shù)組的基底動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)彈力膜無(wú)皺褶，管壁無(wú)增厚，結(jié)構(gòu)層次清楚。中層平滑肌較薄，中膜平滑肌細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)排列整齊（圖2A、B）。SAH組3、5、7d時(shí)血管壁增厚，管腔狹小，內(nèi)皮細(xì)胞變形、腫脹，內(nèi)彈力膜明顯迂曲、皺褶，厚薄不均；中膜明顯變厚，其中5d時(shí)病變最為顯著（圖2C、E、G）。3－AB組內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量有所增多，無(wú)明顯空泡變，部分大鼠基底動(dòng)脈內(nèi)彈力層略厚，部分基本正常，皺褶度較SAH組減少。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，管壁厚度也逐漸變薄，較SAH組略薄，血管內(nèi)徑周長(zhǎng)略增加（圖2D、F、H）。

2.4 3－AB對(duì)腦血管痙攣及腦基底動(dòng)脈內(nèi)徑的影響SAH組3、7d腦血管痙攣程度較輕，5d痙攣程度達(dá)到峰值，14d時(shí)基本緩解；同一時(shí)間點(diǎn)3－AB干預(yù)組與SAH組比較，管壁厚度明顯減小、管腔內(nèi)徑顯著增大，腦血管痙攣值減?。ū?）。

2.5 3－AB對(duì)腦基底動(dòng)脈NF－κB表達(dá)的影響 NF－κB在正常對(duì)照組和假手術(shù)組基底動(dòng)脈的內(nèi)皮細(xì)胞上僅有局部微弱的表達(dá)，中外層表達(dá)不明顯（圖3A、B）；SAH組各時(shí)間點(diǎn)基底動(dòng)脈NF－κB在胞質(zhì)及核內(nèi)表達(dá)較假手術(shù)組增加，在內(nèi)膜、中膜表達(dá)逐漸增強(qiáng)，尤以SAH 5d組最為明顯（圖3C、E、G），與正常對(duì)照組和假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05，P＜0.01，圖4）。3－AB組與SAH組比較，基底動(dòng)脈NF－κB在胞質(zhì)及核內(nèi)表達(dá)有所下降（圖3D、F、H），尤以3、5、7d時(shí)顯著（P＜0.05，P＜0.01，圖4）。

圖2 各組大鼠腦基底動(dòng)脈HE染色結(jié)果Fig.2HE staining of the basilar artery of the rats（×400）

圖3 各組大鼠腦基底動(dòng)脈NF－κB免疫組化染色結(jié)果Fig.3The expression of NF－κB in the basilar artery of the rats（×400）

表2 各組大鼠腦基底動(dòng)脈血管壁厚度、管腔內(nèi)徑及腦血管痙攣程度的變化Tab.2 The vessel thickness，lumen diameter and cerebral vasospasm of rat basilar artery （珔x±s，n＝8）

圖4 各組大鼠腦基底動(dòng)脈NF－κB免疫組化染色平均吸光度Fig.4Average optical density of immuohistochemical staining of NF－kappaB in rat basilar artery

2.6 3－AB對(duì)腦組織中PARP含量的影響 SAH模型建立后5d，大鼠基底動(dòng)脈痙攣程度最強(qiáng)，因此選取5d作為觀察時(shí)間點(diǎn)，比較各組腦組織中PARP含量。與假手術(shù)組比較，SAH組大鼠腦組織中PARP含量顯著升高（P＜0.01）；3－AB組PARP含量較SAH組顯著下降（P＜0.01）。結(jié)果表明，SAH后腦組織中PARP含量升高，而3－AB可顯著降低腦組織中PARP的含量（圖5）。

圖5 3－AB對(duì)大鼠腦組織中PARP含量的影響Fig.5The effect of 3－AB on PARP content in rat brain tissues（珔x±s，n＝8）

2.7 3－AB對(duì)腦組織炎癥因子MCP－1和hsCRP含量的影響 SAH組5d時(shí)，大鼠腦組織MCP－1、hsCRP含量較假手術(shù)組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。3－AB組5d時(shí)，大鼠腦組織中MCP－1、hsCRP含量較SAH組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表3）。

表3 各組大鼠5d時(shí)腦組織MCP－1和hsCRP含量的比較Tab.3 Comparison of MCP－1and hsCRP in rat brain tissues among different groups at 5days （珔x±s，n＝8）

3 討論

SAH是腦卒中的誘因之一，并會(huì)引起一系列并發(fā)癥。其中DCVS最為嚴(yán)重，是SAH患者致死與致殘的主要原因。最新的研究表明，炎癥反應(yīng)在SAH 后DCVS的啟動(dòng)和維持中發(fā)揮著重要作用。PARP是一種廣泛存在于真核生物細(xì)胞核中的蛋白酶，在多系統(tǒng)疾病發(fā)生中扮演著重要的角色，尤其在炎癥反應(yīng)中最為活躍［1－2］。在外界損傷刺激下，PARP易被受損的DNA激活，進(jìn)而通過(guò)不同途徑影響神經(jīng)細(xì)胞的生理功能，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生［12－14］。NF－κB最初是從B細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異結(jié)合的蛋白因子，是普遍存在于各種真核細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)錄因子［15］。NF－κB具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，尤其在細(xì)胞因子誘導(dǎo)的基因表達(dá)中起關(guān)鍵性的調(diào)控作用，如MCP－1和hsCRP［16］。研究表明，PARP通過(guò)調(diào)節(jié)NF－κB影響一系列的病理和生理反應(yīng)，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、增殖、凋亡，尤其是在炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答中處于重要地位［17］。這方面的研究主要集中在心血管、腫瘤等領(lǐng)域，而在SAH方面卻鮮有報(bào)道。

SATOH等［18］曾利用家兔的SAH模型證明SAH后腦組織中PARP表達(dá)上升，基底動(dòng)脈痙攣、血管管腔狹窄、管壁增厚；而給予3－AB后，可明顯抑制PARP在腦組織中的表達(dá)并可緩解基底動(dòng)脈痙攣。然而這一研究結(jié)果僅是通過(guò)血管造影、免疫組化染色等形態(tài)學(xué)方法獲得的，并且對(duì)其發(fā)生機(jī)制并沒(méi)有展開(kāi)深入的研究。

本實(shí)驗(yàn)采用枕大池2次注血法建立SAH動(dòng)物模型，較好模擬了臨床上SAH后DCVS的病理過(guò)程，采用3－AB進(jìn)行干預(yù)，觀察腦血管痙攣改善情況和NF－κB及下游相關(guān)炎癥因子MCP－1和hsCRP表達(dá)，探討3－AB作用的可能機(jī)制。

研究結(jié)果表明，SAH組大鼠腦組織中PARP含量增高，而3－AB組較SAH組明顯降低，證實(shí)3－AB可有效通過(guò)血腦屏障，抑制PARP的表達(dá)。印證了ATOH等人的結(jié)論。在此基礎(chǔ)上，我們觀察了轉(zhuǎn)錄因子NF－κB在腦組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)SAH組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦基底動(dòng)脈NF－κB在胞質(zhì)及核內(nèi)表達(dá)量較正常對(duì)照組升高，而3－AB干預(yù)后其表達(dá)量在一定水平上有所下降。說(shuō)明在腦組織中，PARP可能對(duì)NF－κB有調(diào)節(jié)作用，PARP抑制劑對(duì)NF－κB有負(fù)調(diào)節(jié)作用。NF－κB的高表達(dá)出現(xiàn)在5d時(shí)，即嚴(yán)重DCVS前，說(shuō)明與DCVS的發(fā)生有一定時(shí)間關(guān)聯(lián)性，推測(cè)NF－κB信號(hào)通路可能與蛛網(wǎng)膜下腔出血后DCVS的形成有關(guān)。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SAH發(fā)生后腦組織中MCP－1 和hsCRP的含量顯著升高，而3－AB組中兩者含量較SAH組明顯減少。提示PARP介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)參與了SAH后DCVS的形成，PARP抑制劑能夠抑制腦組織的炎癥反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)腦基底動(dòng)脈形態(tài)學(xué)觀察，ELISA檢測(cè)腦組織中PARP和炎癥因子MCP－1、hsCRP的含量及免疫組化檢測(cè)大鼠腦基底動(dòng)脈NF－κB表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了SAH后PARP水平上升。而PARP被抑制后，炎癥反應(yīng)緩解，DCVS程度亦相應(yīng)減輕，提示PARP介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)、NF－κB信號(hào)通路可能參與了蛛網(wǎng)膜下腔出血后DCVS形成的發(fā)病機(jī)制。PARP有可能成為研究和治療SAH后DCVS的潛在有效靶點(diǎn)。

［1］GRASSO G.An overview of new pharmacological treatments for cerebrovascular dysfunction after experimental subarachnoid hemorrhage［J］.Brain Res Brain Res Rev，2004，44（1）：49－63.

［2］CHANDY D，SY R，ARONOW WS，et al.Hyponatremia and cerebrovascular spasm in aneurysmal subarachnoid hemorrhage ［J］.Neurol India，2006，54（3）：273－275.

［3］VIRAG L，SZABO C.The therapeutic potential of poly（ADP－ribose）polymerase inhibitors［J］.Phamaeol Rev，2002，54（3）：375－429.

［4］DUMONT AS，DUMONT RJ，CHOW MM，et al.Cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage：putative role of inflammation［J］.Neurosurgery，2003，53（1）：133－135.

［5］KAYNAR MY，TANRIVERDI T，KAFADAR AM，et al.Detection of soluble intercellular adhesion molecule－1 and vascular cell adhesion molecule－1 in both cerebrospinal fluid and serum of patients after aneurysmal subarachnoid hemorrhage ［J］.J Neurosurg，2004，101（6）：1030－1036.

［6］KOH SH，PARK Y，SONG CW，et al.The effect of PARP inhibitor on ischaemic cell death，its related inflammation and survival signals［J］.Eur J Neurosci，2004，20（6）：1461－1472.

［7］OHANNA M，GIULIANO S，BONET C，et al.Senescent cells develop a PARP－1 and nuclear factor－｛kappa｝B－associated secretome（PNAS）［J］.Genes Dev，2011，25（12）：1245－1261.

［8］SATOH M，DATE I，NAKAJIMA M，et al.Inhibition of poly （ADP－ribose）polymerase attenuates cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage in rabbits［J］.Stroke，2001，32（1）：225－231.

［9］GERO D，SZABO C.Poly（ADP－ribose）polymerase：a new therapeutic target？［J］.Curr Opin Anaesthesiol，2008，21 （2）：111－121.

［10］INABA H，TSUKAGOSHI A，KIDA S.PARP－1 activity is required for the reconsolidation and extinction of contextual fear memory［J］.Mol Brain，2015，8（1）：63.

［11］KAOUTZANIS M，YOKOTA M，SIBILIA R，et al.Neurologic evaluation in a canine model of single and double subarachnoid hemorrhage［J］.J Neurosci Methods，1993，50（3）：301－307.

［12］CHUNG YH，JOO KM，LEE YJ，et al.Reactive astrocytes express PARP in the central nervous system of SOD（G93A）transgenic mice［J］.Brain Res，2004，1003（1－2）：199－204.

［13］KAUPPINEN TM.Multiple roles for poly（ADP－ribose）polymerase－1 in neurological disease［J］.Neurochem Int，2007，50 （7－8）：954－958.

［14］CHIARUGI A，MOSKOWITZ MA.Poly（ADP－ribose）polymerase－1 activity promotes NF－kappaB－driven transcription and microglial activation：implication for neurodegenerative disorders［J］.J Neurochem，2003，85（2）：306－317.

［15］HASSA PO，COVIC M，HASAN S，et al.The enzymatic and DNA binding activity of PARP－1 are not required for NF－kappa B coactivator function［J］.J Biol Chem，2001，276（49）：45588－45597.

［16］AOKI T，KATAOKA H，SHIMAMURA M，et al.NF－kappaB is a key mediator of cerebral aneurysm formation［J］.Circulation，2007，116（24）：2830－2840.

［17］KOH SH，CHANG DI，KIM HT，et al.Effect of 3－aminobenzamide，PARP inhibitor，on matrix metalloproteinase－9 level in plasma and brain of ischemic stroke model［J］.Toxicology，2005，214（1－2）：131－139.

［18］SATOH M，DATE I，NAKAJIMA M，et al.Inhibition of poly （ADP－ribose）polymerase attenuates cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage in rabbits［J］.Stroke，2001，32（1）：225－231.

（編輯 邱 芬）

The effect of PARP inhibitor on the delayed development cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage and inflammatory factors

YAN Ge1，YU Yan2，WANG Mao－de1
（1.Department of Neurosurgery，the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061；2.School of Public Health，Xi’an Jiaotong University Health Science Center，Xi’an 710061，China）

Objective To investigate the effects of poly ADP－ribose polymerase（PARP）inhibitor 3－aminobenzene（3－AB）on the delayed development cerebral vasospasm（DCVS）after subarachnoid hemorrhage （SAH）and on the inflammatory factors，namely monocyte chemotactic protein 1（MCP－1）and hypersensitive c－reactive protein（hsCRP），and to explore the relationship between these and the signaling pathway of NF－kappa B （NF－κB）.Methods Eighty male Sprague－Dawley rats were randomly divided into four groups：normal group（n＝8），sham－operation group（n＝8），SAH model group（n＝32）and 3－AB group（n＝32）.We established 64 SAH model animals by double injection of blood into the cisterna magna.Half of the SAH model animals were treated with3－AB by intraperitoneal injection（30 mg/kg）.These rats were killed to obtain specimens respectively at days 3，5，7 and 14 after the second blood injection.The morphological changes of basilar arteries were observed under the light microscope.The contents of PARP，MCP－1 and hsCRP in brain tissues were detected with enzyme－linked immunosorbent assay（ELISA）.The expression of NF－κB in basilar arteries was determined by immunohistochemistry. Results Compared with those in the sham－operation group，the degree of basilar artery spasm reached the peak［（30.47±3.89）％］at day 5 after established SAH model；the thickness and diameter of basilar artery were（16.44 ±1.32）μm and（178.21±11.13）μm，respectively.Cerebral blood flow was reduced by nearly 60％（P＜0.01）.The expression of NF－κB in the cytoplasm and nucleus and PARP content in brain tissue were both increased significantly（P＜0.01）.MCP－1［（365.29±28.08）pg/mL］and hsCRP［（402.16±48.99）ng/mL］were significantly enhanced（P＜0.01）.Compared with the SAH group，after 5 days’intervention with3－AB，there was obvious alleviation in the spasm degree of basilar artery［（22.65±3.21）％］，the thickness［（14.89±1.27）μm］and diameter［（198.56±10.91）μm］，respectively（P＜0.01）.Cerebral blood flow was significantly enhanced，but the expression of NF－κB in the cytoplasm and nucleus was decreased and PARP in brain tissue was significantly decreased （P＜0.01）.MCP－1［（126.51±18.67）pg/mL］and hsCRP［（285.39±39.07）ng/mL］in brain tissue were significantly declined，respectively（P＜0.01）.Conclusion PARP inhibitor 3－AB can alleviate DCVS and inhibit the inflammatory response in brain tissue after SAH.The mechanism may be related to NF－κB signaling pathway.

subarachnoid hemorrhage；PARP；inflammatory response；NF－κB signaling pathway

R743.35

A

10.7652/jdyxb201602021

2015－07－24

2015－11－12

王茂德.E－mail：maodewang@163.com

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160124.1228.004.html（2016－01－24）

◇臨床研究◇