亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        丹參多酚保護(hù)線粒體功能減輕H2O2誘導(dǎo)的成年小鼠心肌細(xì)胞損傷*

        2016-05-07 02:36:18冉斌岳榮川胡厚祥張榮驛劉思劉杰陳海燕譚春燕
        西部醫(yī)學(xué) 2016年3期
        關(guān)鍵詞:膜電位培養(yǎng)液丹參

        冉斌 岳榮川 胡厚祥 張榮驛 劉思 劉杰 陳海燕 譚春燕

        丹參多酚保護(hù)線粒體功能減輕H2O2誘導(dǎo)的成年小鼠心肌細(xì)胞損傷*

        冉斌1,2岳榮川1胡厚祥1張榮驛1劉思1劉杰1陳海燕1譚春燕1

        ( 1. 川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科, 四川 南充 637000 ;2. 江油市人民醫(yī)院心內(nèi)科, 四川 江油 621700)

        目的 探討丹參多酚減輕心肌細(xì)胞損傷的作用及機(jī)制。方法 將原代培養(yǎng)的成年小鼠心肌細(xì)胞分為4組:對照組(換MEM細(xì)胞培養(yǎng)液)、丹參多酚組(用含有5g/L丹參多酚的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液處理細(xì)胞3小時)、H2O2組(用含有25 μM H2O2的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液處理細(xì)胞3小時來誘導(dǎo)成年小鼠心肌細(xì)胞的損傷)及丹參多酚+H2O2組(用同時含有5g/L丹參多酚及25 μM H2O2的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液處理細(xì)胞3小時)。檢測4個不同處理組中細(xì)胞活力、細(xì)胞內(nèi)ATP水平、線粒體體膜電位的變化。結(jié)果 與對照組相比,H2O2組中的細(xì)胞存活率明顯下降,細(xì)胞內(nèi)ATP水平顯著降低,線粒體膜電位也明顯下降(均P<0.05)。而丹參多酚能明顯抑制H2O2引起的細(xì)胞存活率下降、細(xì)胞內(nèi)ATP水平的降低以及線粒體膜電位的下降(均P<0.05)。 結(jié)論 丹參多酚可以對心肌細(xì)胞起到保護(hù)作用,其發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制可能與其減輕線粒體功能障礙有關(guān)。

        丹參多酚; 成年小鼠心肌細(xì)胞; 線粒體功能

        心血管疾病已經(jīng)成為影響人類健康的第一位疾病,且其發(fā)病率仍然呈現(xiàn)逐年上升的趨勢[1]。心肌細(xì)胞的凋亡與壞死導(dǎo)致的心肌細(xì)胞丟失是多種心血管疾病發(fā)生的共同病理生理機(jī)制[2]。成年心肌細(xì)胞被認(rèn)為是一種自我再生能力極低的細(xì)胞,一旦丟失往往難以得到有效的補充[3]。因此,如何積極有效地保護(hù)心肌細(xì)胞免于各種病理損傷一直是國內(nèi)外學(xué)者致力于研究的熱點問題。

        傳統(tǒng)的中藥丹參多酚在中國已經(jīng)廣泛而成功地應(yīng)用于治療各種心腦血管疾病[4~6],但其確切機(jī)制仍不清楚,需要進(jìn)一步研究。前期研究發(fā)現(xiàn),線粒體功能障礙是細(xì)胞走向凋亡的重要的共同途徑[7, 8]。因此我們推測,丹參多酚的保護(hù)作用可能與其減輕線粒體功能障礙從而抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。為了驗證這一推測,我們用H2O2處理成年心肌細(xì)胞,造成細(xì)胞損傷,觀察丹參多酚是否對損傷的心肌細(xì)胞具有直接的保護(hù)作用,同時通過檢測細(xì)胞內(nèi)ATP水平及線粒體膜電位等指標(biāo),觀察丹參多酚的保護(hù)作用是否與減輕線粒體功能障礙有關(guān)。

        1 材料與方法

        1.1 成年小鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng) 根據(jù)我們之前的方法[9]分離和培養(yǎng)成年小鼠心肌細(xì)胞:取出小鼠心臟后立即采用主動脈逆灌注方法灌流緩沖液,然后灌流消化酶消化分離細(xì)胞,梯度復(fù)鈣,細(xì)胞預(yù)貼壁1小時后,換培養(yǎng)液在37℃ 2%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時換液。

        1.2 細(xì)胞分組 分離的成年小鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分成4組:① 對照組:更換MEM細(xì)胞培養(yǎng)液,3小時(37℃)后檢測相應(yīng)的指標(biāo)。② 丹參多酚組:更換含有5g/L丹參多酚[10]的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液,3小時(37℃)后檢測相應(yīng)的指標(biāo)。③ H2O2組:更換含有25 μM H2O2的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液[9],3小時(37℃)后檢測相應(yīng)的指標(biāo)。 ④ 丹參多酚+H2O2組:更換同時含有5g/L丹參多酚[10]及25 μM H2O2的MEM細(xì)胞培養(yǎng)液,3小時(37℃)后檢測相應(yīng)的指標(biāo)。

        1.3 細(xì)胞中ATP水平檢測 細(xì)胞中ATP水平是反應(yīng)線粒體功能的一項重要指標(biāo)。根據(jù)我們之前實驗方法[11, 12],按ATP檢測試劑盒操作步驟進(jìn)行檢測。以對照組作為標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行相對量的比較。

        1.4 細(xì)胞中線粒體膜電位檢測 根據(jù)我們之前的實驗方法[11, 12],用JC-1探針檢測線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時,JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時,JC-1 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時JC-1為單體,產(chǎn)生綠色熒光。具體步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行,染色結(jié)束立即于激光共聚焦顯微鏡下觀察并拍照,同時通過多功能酶標(biāo)儀檢測綠光(490/530 nm)和紅光(525/590 nm)吸光值進(jìn)行定量比較。

        2 結(jié)果

        2.1 丹參多酚對成年小鼠心肌細(xì)胞存活率的影響 采用H2O2處理成年小鼠心肌細(xì)胞來模擬心肌細(xì)胞損傷的體外模型,可以看到H2O2會引起細(xì)胞死亡(桿狀細(xì)胞為活細(xì)胞,蜷縮成團(tuán)狀細(xì)胞為死細(xì)胞,圖1)。與對照組比較[(87.4±2.6)%],H2O2組細(xì)胞存活率[(46.6±3.6)%]明顯降低(P<0.05),而加入丹參多酚[(68.6±3.2)%]能明顯增加細(xì)胞對H2O2損傷的耐受(P<0.05)。

        圖1 丹參多酚對成年小鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用

        Figure 1 The protective effects of salvianolate on adult mice cardiomyocytes

        注:n=6, 與對照組比較,①P<0.05;與H2O2組比較,②P<0.05

        2.2 丹參多酚對成年小鼠心肌細(xì)胞內(nèi)ATP水平的影響 細(xì)胞內(nèi)ATP水平是反應(yīng)細(xì)胞線粒體功能的重要指標(biāo),用H2O2處理成年小鼠心肌細(xì)胞后,我們可以看到細(xì)胞內(nèi)的ATP水平[(46.5±4.2)%]較對照組(100%)明顯降低(P<0.05),說明氧化應(yīng)激引起了線粒體功能障礙,而加入丹參多酚[(68.7±4.8)%]能明顯抑制H2O2引起ATP水平的下降(P<0.05),圖2。

        圖2 丹參多酚抑制H2O2引起的心肌細(xì)胞內(nèi)ATP水平的下降

        Figure 2 Salvianolate prevented the reduction of ATP in cardiomyocytes induced by H2O2

        注:n=6, 與對照組比較,①P<0.05 ; 與H2O2組比較,②P<0.05

        圖3 丹參多酚抑制H2O2引起的線粒體膜電位下降

        Figure 2 Salvianolate prevented the reduction of mitochondrial membrane potential induced by H2O2

        注:n=6, 與對照組比較,①P<0.05; 與H2O2組比較,②P<0.05

        2.3 丹參多酚對成年小鼠心肌細(xì)胞線粒體膜電位的影響 線粒體膜電位是反應(yīng)線粒體功能的重要指標(biāo),我們通過JC-1探針來檢測線粒體膜電位的變化。激光共聚焦顯微鏡下可以看到H2O2處理組中成年心肌細(xì)胞的紅色熒光減弱,綠色熒光增強(qiáng);用酶標(biāo)儀測各組紅光與綠光比值并與對照組比較也明顯降低,說明H2O2處理組細(xì)胞中線粒體膜電位[(35.6±5.1)%]與對照組(100%)相比明顯降低(P<0.05)。而加入丹參多酚后通過激光共聚焦顯微鏡可以看到細(xì)胞的紅色熒光較雙氧水組增強(qiáng),綠色熒光較H2O2組減弱。用酶標(biāo)儀檢測各組紅光與綠光比值發(fā)現(xiàn),加入丹參多酚后線粒體膜電位[(60.0±7.2)%]較H2O2組[(35.6±5.1)%]明顯升高(P<0.05)。

        3 討論

        傳統(tǒng)中藥丹參多酚在中國被廣泛應(yīng)用于治療各種心腦血管疾病,如冠心病[4]、腦梗死[13]等。多項實驗研究也證實其在心血管疾病中的保護(hù)作用。Han B等的研究結(jié)果表明,丹參多酚能夠減輕豬心肌的缺血/再灌注損傷[14]。Meng C等的研究結(jié)果表明,丹參多酚能夠通過調(diào)節(jié)炎癥減輕大鼠的動脈粥樣硬化[15]。另有研究表明,丹參多酚能夠減輕豬急性心肌梗死后氧化應(yīng)激指標(biāo),降低腦鈉肽的水平[16]。這些數(shù)據(jù)充分證明丹參多酚對心臟的保護(hù)作用,但其具體的保護(hù)機(jī)制仍不是很清楚。

        線粒體功能障礙引起的心肌細(xì)胞凋亡是心血管疾病中多種病理生理變化的共同途徑[17~19]。心肌細(xì)胞再生能力極低,心肌細(xì)胞凋亡導(dǎo)致有效的心肌細(xì)胞丟失,最終會導(dǎo)致心臟重塑及心衰的發(fā)生[3, 20]。因此如何有效保護(hù)線粒體功能,減少心肌細(xì)胞凋亡,從而最大限度地減少心肌細(xì)胞的丟失,對于延緩心衰的進(jìn)展具有重要意義。有研究表明,丹參多酚具有抗氧作用[10, 16, 21],因此它可能會通過減輕氧化應(yīng)激對線粒體功能起到保護(hù)作用。

        在本實驗中,我們通過H2O2刺激對體外培養(yǎng)的成年小鼠心肌細(xì)胞造成損傷,觀察丹參多酚的保護(hù)作用,發(fā)現(xiàn)丹參多酚可以有效減少H2O2引起的成年小鼠心肌細(xì)胞的死亡。說明丹參多酚可以直接對心肌細(xì)胞起到保護(hù)作用。同時為了進(jìn)一步探討丹參多酚的保護(hù)機(jī)制,我們同時對各組心肌細(xì)胞中的ATP水平及線粒體膜電位進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)丹參多酚可以抑制H2O2引起的心肌細(xì)胞內(nèi)ATP水平的下降以及線粒體膜電位的降低,說明丹參多酚可以減輕H2O2引起的線粒體功能障礙,其對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用與其減輕線粒功能障礙有關(guān)。但其保護(hù)線粒體功能的具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步深入研究。

        4 結(jié)論與啟示

        丹參多酚可以減輕H2O2引起的成年小鼠心肌細(xì)胞損傷,說明丹參多酚可以直接對心肌細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用,其保護(hù)心肌細(xì)胞的作用與其能夠減輕線粒體功能障礙有關(guān)。

        [1]Moran A, Gu D, Zhao D,etal. Future cardiovascular disease in china: markov model and risk factor scenario projections from the coronary heart disease policy model-china[J]. Circulation Cardiovascular quality and outcomes, 2010, 3(3):243-252.

        [2]Christoffels V. Regenerative medicine: Muscle for a damaged heart[J]. Nature, 2011, 474(7353):585-586.

        [3]Bergmann O, Bhardwaj RD, Bernard S,etal. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans[J]. Science, 2009, 324(5923):98-102.

        [4]樊秀紅, 牟娜, 王玉龍. 丹參多酚酸鹽治療冠心病心絞痛的療效與安全性評價[J]. 西部醫(yī)學(xué), 2014, 26(3):328-330.

        [5]張濤, 張娟紅, 徐麗婷. 中藥丹參類制劑臨床研究及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 實用藥物與臨床, 2015, 18(3):330-334.

        [6]Lin TH, Hsieh CL. Pharmacological effects of Salvia miltiorrhiza (Danshen) on cerebral infarction[J]. Chinese medicine, 2010, 5:22.

        [7]Smith MA, Schnellmann RG. Calpains mitochondria, and apoptosis[J]. Cardiovascular research, 2012, 96(1):32-37.

        [8]Chen M, Zhang Y, Yu VC,etal. Isthmin targets cell-surface GRP78 and triggers apoptosis via induction of mitochondrial dysfunction[J]. Cell death and differentiation, 2014, 21(5):797-810.

        [9]岳榮川,胡厚祥,羅濤,等. Calpain活化在H2O2誘導(dǎo)的成年小鼠心肌細(xì)胞損傷中的作用[J]. 西部醫(yī)學(xué), 2012, 24(3):426-429.

        [10] Fei AH, Cao Q, Chen SY,etal. Salvianolate inhibits reactive oxygen species production in H(2)O(2)-treated mouse cardiomyocytes in vitro via the TGFbeta pathway[J]. Acta pharmacologica Sinica, 2013, 34(4):496-500.

        [11] Yue R, Hu H, Yiu KH,etal. Lycopene protects against hypoxia/reoxygenation-induced apoptosis by preventing mitochondrial dysfunction in primary neonatal mouse cardiomyocytes[J]. PloS one, 2012, 7(11):e50778.

        [12] Yue R, Xia X, Jiang J,etal. Mitochondrial DNA oxidative damage contributes to cardiomyocyte ischemia/reperfusion-injury in rats: cardioprotective role of lycopene[J]. Journal of cellular physiology, 2015, 230(9):2128-2141.

        [13] 郝紹江, 安慧娟. 丹參多酚酸鹽治療急性腦梗死的療效觀察[J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2012, 10(9):1076-1077.

        [14] Han B, Zhang X, Zhang Q,etal. Protective effects of salvianolate on microvascular flow in a porcine model of myocardial ischaemia and reperfusion[J]. Archives of cardiovascular diseases, 2011, 104(5):313-324.

        [15] Meng C, Zhuo XQ, Xu GH,etal. Protection of salvianolate against atherosclerosis via regulating the inflammation in rats[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology Medical sciences,2014, 34(5):646-651.

        [16] 張殿福,王明偉,王連生,等. 丹參多酚酸鹽對豬急性心肌梗死后氧化應(yīng)激指標(biāo)和腦鈉肽的影響[J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2008, 6(11):1304-1306.

        [17] Yin H, Zhu M. Free radical oxidation of cardiolipin: chemical mechanisms, detection and implication in apoptosis, mitochondrial dysfunction and human diseases[J]. Free radical research, 2012, 46(8):959-974.

        [18] Wang Y,Liu J,Ma A,etal. Cardioprotective effect of berberine against myocardial ischemia/reperfusion injury via attenuating mitochondrial dysfunction and apoptosis[J]. International journal of clinical and experimental medicine, 2015, 8(8):14513-14519.

        [19] Shen L, Chen C, Wei X,etal. Overexpression of ankyrin repeat domain 1 enhances cardiomyocyte apoptosis by promoting p53 activation and mitochondrial dysfunction in rodents[J]. Clinical science, 2015, 128(10):665-678.

        [20] Lee CS. Mechanisms of Cardiotoxicity and the Development of Heart Failure[J]. Critical care nursing clinics of North America, 2015, 27(4):469-481.

        [21] You H, Li T, Zhang J,etal. Reduction in ischemic cerebral infarction is mediated through golgi phosphoprotein 3 and Akt/mTOR signaling following salvianolate administration[J]. Current neurovascular research, 2014, 11(2):107-113.

        Salvianolate protects against H2O2-induced adult mice cardiomyocytes injury by precenting mitochondrial dysfunction

        RAN Bin,YUE Rongchuan,HU Houxiang,etal

        (DepartmentofCardiology,NorthSichuanMedicalCollegeAffiliatedHospital,Nanchong637000,Sichuan,China;DepartmentofCardiology,JiangyouPeople’sHospital,Jiangyou621700,Sichuan,China)

        Objective To investigate the protective role and mechanism of salvianolate on cardiac myocytes injury. Methods The primary cultured adult mouse cardiomyocytes were divided into control group, salvianolate group, cardiomyocytes exposed to MEM containing 5g/L salvianolate for 3 hours. H2O2group, cardiomyocytes exposed to MEM with 25μM H2O2for 3 hours and the salvianolate + H2O2group, cardiomyocytes were treated with MEM containing 5g/L salvianolate and 25μM H2O2. Then, the survival of cardiomyocytes was counted. The intracellular ATP and the mitochondrial membrane potential were determined in these groups. Results Compared with control, the survival of cardiomyocytes was significantly decreased and the intracellular ATP and mitochondrial membrane potential were also significantly decreased in the H2O2group(P<0.05). However, these effects of H2O2on cardiomyocytes were abolished by salvianolate (P<0.05). Conclusion Salvianolate could alleviate adult mice cardiomyocytes injury by preventing mitochondrial dysfunction.

        Salvianolate; Adult mice cardiomyocytes; Mitochondrial function

        國家自然科學(xué)基金(81070101)

        胡厚祥,教授,本刊編委,E-mail:hhxiang17@163.com

        R-33

        A

        10.3969/j.issn.1672-3511.2016.03.006

        2015-12-01; 編輯: 母存培)

        猜你喜歡
        膜電位培養(yǎng)液丹參
        丹參“收獲神器”效率高
        有關(guān)動作電位的“4坐標(biāo)2比較”
        參芪復(fù)方對GK大鼠骨骼肌線粒體膜電位及相關(guān)促凋亡蛋白的影響研究
        從一道試題再說血細(xì)胞計數(shù)板的使用
        丹參葉干燥過程中化學(xué)成分的動態(tài)變化
        中成藥(2019年12期)2020-01-04 02:02:46
        調(diào)整蔗糖、硼酸和pH值可優(yōu)化甜櫻桃花粉萌發(fā)培養(yǎng)液
        丹參葉片在快速生長期對短期UV-B輻射的敏感性
        中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:12
        不同培養(yǎng)液對大草履蟲生長與形態(tài)的影響研究
        超級培養(yǎng)液
        魚藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡及線粒體膜電位變化
        美利坚合众国亚洲视频| 欧美三级不卡视频| 亚洲欧美在线视频| 国产av三级精品车模| 99精品久久99久久久久| 高潮迭起av乳颜射后入| 中文字幕久无码免费久久| 国产内射视频免费观看| 日韩精品人妻久久久一二三 | 国产视频激情在线观看| 国内女人喷潮完整视频| 国偷自产av一区二区三区| 经典女同一区二区三区| 伊人久久大香线蕉av色婷婷色| 亚洲精品久久久久成人2007| 成年视频国产免费观看| 看全色黄大黄大色免费久久| 极品粉嫩小仙女高潮喷水操av| 中文在线8资源库| 91老司机精品视频| 精品亚亚洲成av人片在线观看 | 伊人狼人影院在线视频| 成年女人免费v片| 国产无遮挡裸体免费视频| 无码人妻中文中字幕一区二区| 国产黄色一区二区三区av| 深夜福利啪啪片| 国产精品久久久久久久久鸭| 久久av一区二区三区下| 成人国产精品一区二区八戒网| 中文字幕天天躁日日躁狠狠躁免费 | 男女爱爱好爽视频免费看| 综合91在线精品| 经典黄色一区二区三区| 性无码专区无码| 日韩国产欧美| 国产av一区二区三区狼人香蕉| 一本久道综合色婷婷五月 | 久久国产欧美日韩高清专区| 亚洲精彩av大片在线观看| 日韩国产精品无码一区二区三区|