310005浙江省杭州市，浙江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院骨科九病區(qū)

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·論著·

雷公藤內(nèi)酯醇對類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用及其網(wǎng)絡藥理學研究

【摘要】目的評價雷公藤內(nèi)酯醇對類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用，并研究其作用機制的網(wǎng)絡藥理學。方法2014年12月—2015年7月選取SPF級健康Wistar大鼠40只，采用隨機數(shù)字表法分為4組，分別為對照組、模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組，每組10只。采用熱殺死結(jié)核分枝桿菌誘導大鼠構(gòu)建類風濕關(guān)節(jié)炎模型，造模成功后，雙氯芬酸組大鼠給予10 mg/kg雙氯芬酸灌胃,雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠給予6 mg/kg雷公藤內(nèi)酯醇灌胃,對照組和模型組大鼠給予等量0.9%氯化鈉溶液灌胃。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定大鼠血清中炎性細胞因子〔腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-4、IL-6〕表達水平；評價關(guān)節(jié)炎指數(shù)及足體積；利用Chemidraw 2010軟件將雷公藤內(nèi)酯醇轉(zhuǎn)換成3D形式,預測其可能的作用靶點；利用Cytoscape軟件通過BLAST數(shù)據(jù)庫和美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫進行蛋白質(zhì)的功能注釋和分類，得到雷公藤內(nèi)酯醇的網(wǎng)絡藥理圖。結(jié)果模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平較對照組升高(P<0.05)；雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平較模型組降低(P<0.05)；雙氯芬酸組與雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第4、8、12、16、20天雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)較模型組降低(P<0.05)；雙氯芬酸組與雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠足體積較對照組增大(P<0.05)；第4、6、8、10、12、14、16、20天雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠足體積較模型組減小，第18天雙氯芬酸組大鼠足體積較模型組減小(P<0.05)；第2、4、6、8、10、12、14、16、20天雙氯芬酸組與雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠足體積比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第18天雙氯芬酸組大鼠足體積較雷公藤內(nèi)酯醇組減小(P<0.05)。網(wǎng)絡藥理學研究示，6個靶點(MP2K1、ADH5、BACE1、ADK、GLO1、AKR1B1)存在基因-靶點-信號轉(zhuǎn)導通路網(wǎng)絡，9條信號轉(zhuǎn)導通路與免疫和炎癥相關(guān)，包括focal adhesion、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、toll-like receptor、ErbB、促性腺激素釋放激素(GnRH)、NK cell-mediated cytotoxicity、Fc epsilon RI 和B cell receptor信號轉(zhuǎn)導通路。結(jié)論雷公藤內(nèi)酯醇治療類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠可降低TNF-α、IL-4、IL-6表達水平、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足體積，其治療作用主要是通過調(diào)節(jié)MAPK和VEGF等信號轉(zhuǎn)導通路實現(xiàn)。

310005浙江省杭州市，浙江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院骨科九病區(qū)

【關(guān)鍵詞】關(guān)節(jié)炎，類風濕；雷公藤內(nèi)酯；網(wǎng)絡藥理學；腫瘤壞死因子α；白介素4；白介素6

胡偉鋒，王昌興.雷公藤內(nèi)酯醇對類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用及其網(wǎng)絡藥理學研究[J].中國全科醫(yī)學，2016，19(12)：1408-1413.[www.chinagp.net]

Hu WF,Wang CX.Therapeutic effect and network pharmacology of triptolide for rheumatoid arthritis in rats[J].Chinese General Practice，2016，19(12)：1408-1413.

類風濕關(guān)節(jié)炎是一種臨床多發(fā)的自身免疫性疾病，以關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周圍組織慢性炎癥為主要表現(xiàn)[1]。其臨床癥狀具有反復性，一般病程較長、預后差、治療效果不明顯、致殘率高，嚴重危害患者健康[2]。近年來，在類風濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制及病理變化等研究領(lǐng)域取得了長足的進步，但是患者需要長期服用非甾體類抗炎藥和糖皮質(zhì)激素等西藥治療，不良反應較大[3]。中藥治療具有與西藥治療效果相似、不良反應小等特點，因此近年來越來越引起醫(yī)藥界的關(guān)注[4]。對類風濕關(guān)節(jié)炎療效最為突出的中藥首推雷公藤，其可以祛風除濕、通絡止痛、消腫止痛、解毒殺蟲，用于濕熱結(jié)節(jié)、癌瘤積毒等病癥的治療，臨床上用其治療麻風反應、類風濕關(guān)節(jié)炎等，有抗腫瘤、抗炎等作用。其中的環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物-雷公藤內(nèi)酯醇，被廣泛認為是最主要的抗炎和免疫抑制成分[5]。臨床試驗表明，雷公藤內(nèi)酯醇具有抗氧化、抗風濕、抗癌等功效，為常用的抗風濕藥物，能顯著緩解類風濕關(guān)節(jié)炎癥狀[6]，然而，關(guān)于其治療機制的研究仍處于起始階段，詳細作用機制仍需深入研究。本研究構(gòu)建大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型，并對大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型以及雷公藤內(nèi)酯醇的治療作用進行評價，然后利用藥效物質(zhì)來虛擬篩選靶點，并結(jié)合網(wǎng)絡藥理學的研究思路，在基因、靶點、信號轉(zhuǎn)導通路層面上研究雷公藤內(nèi)酯醇作用的分子機制，明確其抗風濕的治療效果，為其臨床治療提供候選靶點，有助于臨床療效的判定及新藥研發(fā)。

本研究背景和創(chuàng)新點：

類風濕關(guān)節(jié)炎是一種臨床多發(fā)的自身免疫性疾病，病程長，長期服用非甾體類抗炎藥和糖皮質(zhì)激素的治療效果不理想。中藥提取物-雷公藤內(nèi)酯醇具有顯著的抗風濕作用，但其作用機制一直未明。本研究利用熱殺死結(jié)核分枝桿菌構(gòu)建大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型，并對大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型以及雷公藤內(nèi)酯醇的治療作用進行評價，然后利用反向?qū)觼硖摂M篩選靶點，并結(jié)合網(wǎng)絡藥理學的研究思路，在基因、靶點、信號轉(zhuǎn)導通路層面上研究雷公藤內(nèi)酯醇作用的分子機制，明確其抗風濕作用的靶點為絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)信號轉(zhuǎn)導通路，有助于新藥的研發(fā)。

1材料與方法

1.1藥品與試劑熱殺死結(jié)核分枝桿菌(heat killed mycobacteriumtubercuolsis)購自 Difco實驗室(Detroit，MI，USA)；雷公藤內(nèi)酯醇、雙氯芬酸購自中國藥品生物制品鑒定所；二甲基亞砜(DMSO)購自阿法埃莎(中國)化學有限公司；大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-4、IL-6酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測試劑盒購自瑞士Roche 公司。

1.2主要儀器Milli-Q超純水儀購自美國Millipore 公司；酶標儀購自美國Bio-Rad 公司。

1.3試劑制備取熱殺死結(jié)核分枝桿菌5 mg，粉碎后置于1 ml甘油中，研磨使其混勻用于動物給藥。另取雙氯芬酸、雷公藤內(nèi)酯醇適量分別溶于少量DMSO中，然后用超純水分別稀釋至1 mg/ml、2 mg/ml，超聲分散均勻后用于動物給藥。

1.4動物2014年12月—2015年7月選取SPF級健康Wistar大鼠40只，雄性；體質(zhì)量170～200 g，平均體質(zhì)量180 g；購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，合格證號：SCXK(京) 2009-0012。飼養(yǎng)于23～26 ℃的標準動物房中，飼養(yǎng)用具均進行高壓滅菌和紫外除菌處理，每 12 h自動熄燈，給予自由飲水和飲食。

1.5大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型的建立[6]大鼠采用10%水合氯醛麻醉后，仰臥位固定到手術(shù)臺上，將頭部及四肢固定。采用75%乙醇溶液對尾根部消毒，然后在尾根部皮下注射0.2 ml熱殺死結(jié)核分枝桿菌(5 mg/ml)，然后立即用消毒棉球壓住注射部位，防止液體溢出。1 min后，松開固定繩，放于籠中讓其自然蘇醒。

1.6大鼠分組及給藥采用隨機數(shù)字表法分為4組，分別為對照組、模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組，每組10只。模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠建立類風濕關(guān)節(jié)炎模型，造模成功后，雙氯芬酸組大鼠給予10 mg/kg雙氯芬酸灌胃，1次/d，共3周；雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠給予6 mg/kg雷公藤內(nèi)酯醇灌胃，1次/d，共3周；對照組和模型組大鼠給予等量0.9%氯化鈉溶液灌胃，1次/d，共3周。

1.7血清炎性細胞因子表達水平測定[7]灌胃3周后，取大鼠眼底靜脈叢血漿1 ml，4 ℃ 10 000 r/min離心10 min(離心半徑為10 cm)，取上清液。應用大鼠TNF-α、IL-4、IL-6 ELISA法檢測試劑盒，將標準品用稀釋液作倍比稀釋，酶標儀測定450 nm波長處吸光度(OD值)。以標準品濃度的對數(shù)為橫坐標、測定的OD值為縱坐標做出標準曲線，計算血清TNF-α、IL-4、IL-6表達水平。

1.8類風濕關(guān)節(jié)炎模型的評價全身病變按5級評分法評價，根據(jù)四肢的病變程度累積計分，計算出關(guān)節(jié)炎指數(shù)。標準如下：0分，無紅腫；1分，小趾關(guān)節(jié)輕度紅腫；2分，小趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹；3分，踝關(guān)節(jié)以下的趾甲腫脹；4分，包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部趾甲、關(guān)節(jié)腫脹[8]。每4 d評價1次。采用足趾容積測量儀測量大鼠的足體積，每2 d測量1次。共觀察20 d。評估大鼠病情嚴重程度及藥物的治療作用。

名詞解釋：

網(wǎng)絡藥理學是基于系統(tǒng)生物學的理論，對生物系統(tǒng)的網(wǎng)絡分析，選取特定信號節(jié)點(Nodes)進行多靶點藥物分子設計的新學科。網(wǎng)絡藥理學強調(diào)對信號轉(zhuǎn)導通路的多途徑調(diào)節(jié)，提高藥物的治療效果，降低不良反應，從而提高新藥臨床試驗的成功率，節(jié)省藥物的研發(fā)費用。

1.10雷公藤內(nèi)酯醇靶點預測利用Chemidraw2010軟件將雷公藤內(nèi)酯醇轉(zhuǎn)換成3D形式(見圖1)，然后導入到藥效團靶標數(shù)據(jù)庫進行反向?qū)樱A測其可能的作用靶點。

圖1　雷公藤內(nèi)酯醇3D結(jié)構(gòu)圖

1.11雷公藤內(nèi)酯醇網(wǎng)絡藥理學研究利用Cytoscape軟件，對雷公藤內(nèi)酯醇、靶點蛋白與信號轉(zhuǎn)導通路進行一一對應，然后通過BLAST(TheBasicLocalAlignmentSearchTool)數(shù)據(jù)庫和美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫進行蛋白質(zhì)的功能注釋和分類，得到雷公藤內(nèi)酯醇的網(wǎng)絡藥理圖[7]。

2結(jié)果

2.1大鼠血清中炎性細胞因子表達水平比較4組大鼠血清中炎性細胞因子表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平較對照組升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平較模型組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；雙氯芬酸組與雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05，見表1)。

2.2大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較皮下注射熱殺死結(jié)核分枝桿菌后，大鼠的關(guān)節(jié)逐漸出現(xiàn)腫脹，組織浸潤，顏色發(fā)紅，透明度提高。隨著時間的延長，踝關(guān)節(jié)部位開始出現(xiàn)硬化，足體積增大。第4、8、12、16、20天模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)較模型組降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；雙氯芬酸組與雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05，見表2)。

2.3大鼠足體積比較第0天4組大鼠足體積比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天4組大鼠足體積比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠足體積較對照組增大，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；第4、6、8、10、12、14、16、20天雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠足體積較模型組減小，第18天雙氯芬酸組大鼠足體積較模型組減小，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；第2、4、6、8、10、12、14、16、20天雙氯芬酸組與雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠足體積比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第18天雙氯芬酸組大鼠足體積較雷公藤內(nèi)酯醇組減小，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表3)。

Table1Comparisonofexpressionlevelsofinflammatorycytokinesinserumamongthe4groups

組別只數(shù)TNF-αIL-4IL-6對照組1031.22±1.8728.13±1.0645.38±2.69模型組10517.35±36.76a735.51±41.63a496.21±25.41a雙氯芬酸組10286.36±42.56ab389.47±97.36ab235.14±41.66ab雷公藤內(nèi)酯醇組10312.28±28.97ab425.27±26.79ab289.76±45.22abF值264.58357.26268.34P值<0.001<0.001<0.001

注：TNF-α=腫瘤壞死因子α，IL-4=白介素4，IL-6=白介素6；與對照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05

表2　3組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較±s)

注：與模型組比較，aP<0.01

表3　4組大鼠足體積比較

注：與對照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與雙氯芬酸組比較，cP<0.05

2.4雷公藤內(nèi)酯醇靶點預測結(jié)果對雷公藤內(nèi)酯醇進行虛擬的靶點和信號轉(zhuǎn)導通路預測，通過PharmMapper數(shù)據(jù)庫，共預測出99個靶點，選擇得分較高的10個靶點再通過KEGG反向?qū)樱渲?個靶點(MP2K1、ADH5、BACE1、ADK、GLO1、AKR1B1)存在基因-靶點-信號轉(zhuǎn)導通路網(wǎng)絡(見圖2)。在6個靶點對應的44條信號轉(zhuǎn)導通路中，9條信號轉(zhuǎn)導通路與免疫和炎癥相關(guān)，包括focal adhesion、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、toll-like receptor、ErbB、促性腺激素釋放激素(GnRH)、NK cell-mediated cytotoxicity、Fc epsilon RI 和B cell receptor信號轉(zhuǎn)導通路。

3討論

本研究通過構(gòu)建大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型，證實了雷公藤內(nèi)酯醇對大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎的療效，并對其治療的機制進行了網(wǎng)絡藥理學研究，研究結(jié)果表明，模型組、雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平、足體積較對照組升高；雙氯芬酸組、雷公藤內(nèi)酯醇組大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-6表達水平、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足體積較模型組降低，證明了模型組造模成功，雷公藤內(nèi)酯醇對于類風濕關(guān)節(jié)炎有顯著療效，與臨床常用的雙氯芬酸較為接近。本研究提示，雷公藤內(nèi)酯醇治療類風濕關(guān)節(jié)炎是一個非常復雜的藥理網(wǎng)絡體系，包含9條信號轉(zhuǎn)導通路。在這9條信號轉(zhuǎn)導通路中，有7條信號轉(zhuǎn)導通路現(xiàn)在未見其與類風濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)的報道，因此本研究不再進行討論，但其是今后藥理學研究的重點。另外有2條信號轉(zhuǎn)導通路，MAPK信號轉(zhuǎn)導通路和VEGF信號轉(zhuǎn)導通路，分別為與炎癥和膠原形成相關(guān)，是抗風濕活性化合物起效的必要通路，在風濕性關(guān)節(jié)炎和類風濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展中均起著非常重要的調(diào)節(jié)作用[9]。本研究所發(fā)現(xiàn)的這2條信號轉(zhuǎn)導通路很好地詮釋了雷公藤內(nèi)酯醇的抗炎作用，彌補了以前的動物和細胞層面的藥理學研究的不足。

既往研究結(jié)果表明，類風濕關(guān)節(jié)炎形成過程中JAK-STAT、蛋白酪氨酸激酶(PTKs)、MAPK、VEGF信號轉(zhuǎn)導通路均被激活，其中MAPK信號轉(zhuǎn)導通路還包括了細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、p38、JNK 3條重要的與關(guān)節(jié)炎癥相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導通路[10]。雷公藤內(nèi)酯醇能夠下調(diào)ERK1/2和p38磷酸化，抑制ERK和p38 MAPK信號轉(zhuǎn)導通路；同樣，還可以顯著抑制TNF-α刺激引起的誘導型一氧化氮合酶(iNOS)和環(huán)氧合酶2(COX-2)的表達，并且減少一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的生成，而且抑制作用與濃度呈正相關(guān)[11]。另外，VEGF是參與調(diào)控血管發(fā)生和血管新生的關(guān)鍵分子，幾乎參與了類風濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病全過程[12-13]。因此，本研究從網(wǎng)絡藥理學角度對雷公藤內(nèi)酯醇的抗風濕藥理作用的闡釋，可以進一步闡明其作用機制為通過調(diào)節(jié)MAPK信號轉(zhuǎn)導通路來抑制炎性細胞因子的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)VEGF信號轉(zhuǎn)導通路在關(guān)節(jié)抑制細胞因子的表達，來減少膠原蛋白的產(chǎn)生、抑制滑膜細胞增殖、減弱侵襲能力等。二者相互配合，從兩個方面起到對類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠的治療作用。

圖2　雷公藤內(nèi)酯醇的網(wǎng)絡藥理圖

近些年來，國內(nèi)外研究人員對雷公藤內(nèi)酯醇做了大量研究，提示雷公藤內(nèi)酯醇具有較為顯著的抗炎作用，尤其是對類風濕關(guān)節(jié)炎有非常好的功效，能顯著減輕骨關(guān)節(jié)疼痛、恢復關(guān)節(jié)功能、改善關(guān)節(jié)部位的組織液滲出性[11,14]。然而，未見從網(wǎng)絡藥理學層面研究雷公藤內(nèi)酯醇抗風濕作用的相關(guān)報道。

本研究證實，雷公藤內(nèi)酯醇可以通過藥理學網(wǎng)絡，對類風濕關(guān)節(jié)炎大鼠起到顯著的治療作用，為臨床指導用藥提供了理論依據(jù)。但是，大鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型的構(gòu)建和評價還較為主觀，缺乏與實際患者貼切的客觀實驗依據(jù)，后續(xù)的研究中應該在模型建立和評價方面進一步展開。

作者貢獻：胡偉鋒進行實驗設計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文；王昌興進行質(zhì)量控制及審校,并對文章負責。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：陳素芳)

Therapeutic Effect and Network Pharmacology of Triptolide for Rheumatoid Arthritis in Rats

HUWei-feng,WANGChang-xing.TheNinthWard,DepartmentofOrthopedics,theSecondAffiliatedHospitalofZhejiangChineseMedicineUniversity,Hangzhou310005,China

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the therapeutic effect of triptolide on rheumatoid arthritis(RA) in rats,and study its network pharmacology.MethodsFrom December 2014 to July 2015,we selected 40 healthy Wistar rats of SPF grade and randomly divided them into 4 groups,which were control group,model group,diclofenac group,triptolide group,with 10 rats in each group.Heat-killed mycobacterium tuberculosis was used to induce RA models of rats.After model building,the rats of diclofenac group were given 10 mg/kg diclofenac by gavage;the rats of triptolide group were given 6 mg/kg triptolide by gavage;the rats of control group and model group were given the same amount of 0.9% sodium chloride solution by gavage.By enzyme linked immunosorbent assay,the expression levels of inflammatory cytokines in serum〔tumor necrosis factor alpha(TNF-α) and interleukin(IL)-4,IL-6〕 were determined;evaluated the arthritis index and feet volume;Chemidraw 2010 software was employed to convert triptolide into 3D form and predict its possible target proteins and pathways;Cytoscape software was employed to make annotation and classification of protein function by BLAST database and NCBI database,and the network pharmacology of triptolide was obtained.ResultsModel group,diclofenac group and triptolide group were higher than control group in the expression of TNF-α,IL-4 and IL-6(P<0.05);diclofenac group and triptolide group were lower than model group in the expression of TNF-α,IL-4 and IL-6(P<0.05);diclofenac group and triptolide group were not significantly different in the expression of TNF-α,IL-4 and IL-6(P<0.05).Diclofenac group and triptolide group were lower than model group in arthritis index on day 4,day 8,day 12,day 16 and day 20(P<0.05),and diclofenac group and triptolide group were not significantly different in arthritis index(P>0.05).Model group,diclofenac group and triptolide group were larger than control group in feet volume on day 2,day 4,day 6,day 8,day 10,day 12,day 14,day 16,day 18 and day 20(P<0.05);diclofenac group and triptolide group were smaller than model group in feet volume on day 4,day 6,day 8,day 10,day 12,day 14,day 16 and day 20,and were smaller than model group in feet volume on day 18(P<0.05);diclofenac group and triptolide group were not significantly different in feet volume on day 2,day 4,day 6,day 8,day 10,day 12,day 14,day 16 and day 20(P>0.05);diclofenac group was smaller than triptolide group in feet volume on day 18(P<0.05).The study of network pharmacology of triptolide showed that gene-target-signal transduction network existed among 6 targets(MP2K1,ADH5,BACE1,ADK,GLO1 and AKR1B1),and 9 signal transduction pathways were related with immunity and inflammation,including focal adhesion,MAPK,VEGF,toll-like receptor,ErbB,GnRH,NK cell-mediated cytotoxicity,Fc epsilon RI and B cell receptor.ConclusionTriptolide for treatment of rheumatoid arthritis can decrease the expression levels of TNF-α,IL-4 and IL-6,arthritis index and feet volume.Its therapeutic effect is mainly realized by regulating signal transduction pathways of MAPK and VEGF.

【Key words】Arthritis,rheumatoid；Triptolide；Network pharmacology；Tumor necrosis factor-alpha；Interleukin-4；Interleukin-6

(收稿日期：2015-10-20；修回日期：2016-02-24)

【中圖分類號】R 593.22

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.12.011

通信作者：王昌興，310005浙江省杭州市，浙江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院骨科九病區(qū)；E-mail:hwfhwf6768@163.com

基金項目：浙江省自然科學基金資助項目(LY14H060005)

胡偉鋒，王昌興