洪偉鳴+曹飛+徐懿+宋亮+左偉勇

摘要： 根據(jù)《獸藥試驗技術規(guī)范匯編》的要求觀察了自行合成的N-氨甲酰谷氨酸對小白鼠和肉雞的安全性。對小白鼠和肉雞采用經(jīng)口灌胃法進行了急性毒性試驗。試驗結果表明，N-氨甲酰谷氨酸對小鼠和肉雞沒有毒性作用。

關鍵詞： N-氨甲酰谷氨酸；小鼠；肉雞；急性毒性試驗；安全性

中圖分類號：S853.74 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2016）03-0252-02

N-氨甲酰谷氨酸（N-carbamylglutamate，NCG）是N-乙酰谷氨酸（N-acetylglutamate，NAG）的結構類似物，能激活動物體內(nèi)氨甲酰磷酸合成酶-Ⅰ（carbamyl phosphate synthetase Ⅰ，CPS-Ⅰ）和二氫吡咯-5-羧酸合成酶（pyrroline-5-carboxylate synthetase，P5CS），促進動物內(nèi)源精氨酸的生成[1-2]。NCG作為精氨酸內(nèi)源激活劑以提高機體精氨酸含量和改善動物生產(chǎn)與健康為目的，作為飼料添加劑加入日糧中對哺乳動物機體內(nèi)源性氨基酸的調(diào)控具有明顯的效果[3]。為全面了解NGG安全性和為臨床安全科學飼喂家禽提供依據(jù)，根據(jù)《獸藥試驗技術規(guī)范匯編》的要求[4]，以靶動物小白鼠和肉雞為對象進行了急性毒性試驗；同時也為后續(xù)深入探討N-氨甲酰谷氨酸對家禽的作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

健康清潔級昆明系小白鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，購自揚州大學比較醫(yī)學中心，預飼3 d后開展試驗；1日齡京海黃肉仔雞30羽，公、母各半，購自江蘇省家禽研究所，預飼20 d后開展試驗。

1.2 試驗藥物

N-氨甲酰谷氨酸（純度≥95%）由江蘇省獸用生物制藥高技術研究重點實驗室自行研制合成。臨用前用純水將其配制成0.15%（稱取150 mg定容至100 mL）的溶液后按劑量灌胃。

1.3 小鼠灌胃

選取50只精神狀態(tài)良好的小白鼠，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半，其中第Ⅰ～Ⅳ組為試驗組，第Ⅴ組為空白對 照組，正式給藥前禁食12 h，不禁水。根據(jù)預試驗的劑量，分別按小白鼠體質(zhì)量以0.015、0.020、0.030、0.040 mL/g等4個不同劑量組進行灌胃，空白對照組按0.040 mL/g灌服生理鹽水。一次劑量直接灌入，灌胃后每天觀察小鼠的精神狀況和死亡情況，并及時記錄。7 d時剖檢存活小鼠，觀察主要臟器是否有病變[4-6]。

1.4 肉雞灌胃

選取精神狀態(tài)良好的肉雞30羽，隨機分為5組，每組6羽，公母各半，其中第Ⅰ～Ⅳ組為試驗組，第Ⅴ組為空白對照組，正式給藥前禁食12 h，不禁水。根據(jù)預試驗的劑量，分別按小白鼠體質(zhì)量以0.02、0.03、0.04、0.05 mL/g等4個不同劑量組進行灌胃，空白對照組按0.05 mL/g灌服生理鹽水。一次劑量直接灌入，灌胃后每天觀察肉雞的外觀、行為活動、呼吸、分泌物、排便、死亡和出現(xiàn)的癥狀，并及時記錄。觀察 7 d 后剖檢存活肉雞，觀察主要臟器是否有病變[4，7-8]。

2 結果與分析

2.1 小鼠灌胃試驗結果

經(jīng)一次劑量直接灌服不同濃度的藥液后，各組小鼠未見死亡。小劑量組灌胃后小鼠采食和精神狀態(tài)良好，最大劑量組灌胃后小鼠經(jīng)短暫休息和調(diào)整，均能恢復正?；顒?，次日觀察采食量和精神狀態(tài)均正常。整個試驗過程中未見小鼠出現(xiàn)明顯的中毒癥狀，7 d時剖檢存活小鼠，主要內(nèi)臟器官均未出現(xiàn)肉眼可見的明顯病變。試驗結果詳見表1。

2.2 肉雞灌胃試驗結果

經(jīng)一次劑量直接灌服不同濃度藥液后，各組肉雞未見死亡（表2）。給藥后雞的精神狀態(tài)稍顯萎靡、喜臥，糞便顏色正常。經(jīng)過3～5 h休息后均能恢復正常，次日觀察采食量和活動均良好，眼、鼻和口腔均無異常分泌物，未出現(xiàn)任何不良狀況。7 d時處死存活肉雞后剖檢觀察內(nèi)臟未發(fā)現(xiàn)病變。

3 討論

灌胃劑量較大時易造成小鼠的胃腸道功能發(fā)生紊亂，故小鼠易出現(xiàn)采食量和精神狀態(tài)下降等癥狀。伴隨時間的推移，上述情況逐漸好轉，并在隔日后均能恢復正常。剖檢存活小鼠后未見心、肝、脾、肺、腎等主要內(nèi)臟器官出現(xiàn)肉眼可見的病變，由此證明N-氨甲酰谷氨酸短期內(nèi)對小鼠安全。

對肉雞灌服N-氨甲酰谷氨酸溶液后，由于應激導致肉雞出現(xiàn)了短暫的精神沉郁和不愛活動，經(jīng)數(shù)小時休息后很快恢復正常。剖檢后觀察各試驗組雞的肝、腎、胸腺、脾、法氏囊等主要器官的形態(tài)、質(zhì)地和色澤均無異常，經(jīng)HE切片鏡檢后仍未見異常病理組織學變化。

急性毒性試驗研究是評價藥物安全性的一項重要指標，本試驗通過經(jīng)口灌服給藥的急性毒性試驗觀察了N-氨甲酰谷氨酸的急性毒性。對小鼠的灌胃最大劑量達到 0.040 mL/g，對肉雞的灌胃最大劑量達到0.05 mL/g，試驗結果表明沒有對小鼠和肉雞造成任何可見的毒性反應。根據(jù)我國農(nóng)業(yè)部《獸藥試驗技術規(guī)范匯編》中結果評定標準應判定為實際無毒[4]。因此，在肉雞養(yǎng)殖過程中將N-氨甲酰谷氨酸作為飼料添加劑是安全可靠的。

根據(jù)現(xiàn)有文獻報道[1-3]，目前對于N-氨甲酰谷氨酸作為飼料添加劑的研究主要以哺乳類動物為主，在家禽上未見報道。通過本試驗的研究，旨在為下一步將N-氨甲酰谷氨酸作為飼料添加劑應用到家禽生產(chǎn)過程中提供理論依據(jù)。

參考文獻：

[1]彭 瑛，楊煥勝，吳 信，等. N-氨甲酰谷氨酸在豬營養(yǎng)中應用的研究進展[J]. 動物營養(yǎng)學報，2013（6）：1131-1136.

[2]Wu G Y，Knabe D A，Kim S W. Arginine nutrition in neonatal pigs[J]. The Journal of Nutrition，2004，134（10）：2783-2790.

[3]吳 信，高運苓，伍國耀，等. N-甲酰谷氨酸對仔豬內(nèi)源性精氨酸的合成調(diào)控[J]. 飼料工業(yè)，2009，37（4）：56-58.

[4]農(nóng)業(yè)部獸藥審評委員會辦公室.獸藥試驗技術規(guī)范匯編[S]. 2001.

[5]郁 杰，洪偉鳴，王妲妲，等. 仔豬痢清口服液的急性毒性和抗炎活性研究[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學，2010（1）：115-116，123.

[6]郁 杰，葛竹興，邢曉玲，等. 仔豬痢清口服液的急性毒性實驗研究[J]. 中國獸藥雜志，2009，43（3）：29-30.

[7]徐麗蘭，單安山，陳志輝，等. 女貞子萃取物對肉雞的急性毒性試驗[J]. 中國獸醫(yī)科學，2010，40（12）：1312-1315.

[8]蘇 強，朱連勤，朱風華，等. 三聚氰胺對肉雞的急性口服毒性和蓄積毒性[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2012，48（9）：61-63.