【摘 要】采用烘干法和凍干法對細(xì)菌進行干燥至恒重，測定細(xì)菌濃度，比較兩者差異，篩選出適合不同實驗需要的理想方法。

【關(guān)鍵詞】干燥失重；細(xì)菌濃度；冷凍干燥

細(xì)菌的基本形態(tài)有球形、桿形、螺旋形等，大小以微米計，直徑一般為0.5～1微米。細(xì)菌濃度在細(xì)菌的研究和生產(chǎn)中，經(jīng)常需要測定培養(yǎng)液的細(xì)菌濃度，測定細(xì)菌濃度的方法有很多，比如重量法、平板計數(shù)法、比濁法、電導(dǎo)率法等。其中重量法精確度高，重現(xiàn)性好，是精確分析細(xì)菌濃度的經(jīng)典方法。而測定菌體重量又可以使用烘干法干燥和低溫冷凍干燥兩種方法，二者主要是干燥菌體的溫度不同。文章著重分析在液體培養(yǎng)基中細(xì)菌用兩種方法測定的菌體濃度是否有所差別，以及哪種方法更適合我們研究需要。

一、實驗材料

（一）實驗儀器及材料

電子天平：MS205，METTLER TQLEDO

真空冷凍干燥機：minifast04，MBE5070，東富龍

離心機：低速自動平衡型，LDZ4-1.2

電熱恒溫干燥箱：GZX-DH202，上海精密儀器儀表廠

發(fā)酵液：流行性腦膜炎球菌

以上材料均由成都康華生物制品有限公司提供

（二）菌液的制備

由于流行性腦膜炎球菌屬于乙類傳染病原，所以使用之前需要先做滅活處理。取流行性腦膜炎球菌發(fā)酵液200ml，加入甲醛溶液2ml，混合攪拌三十分鐘殺菌。

二、實驗方法

（一）烘干法測菌濃

將五只離心試管置于干燥箱中烘干至恒重，自然冷卻后用電子天平稱其重量。分別準(zhǔn)確量取10ml制備好的發(fā)酵液，分別加入準(zhǔn)備好的五支離心試管中，送入離心機進行離心（3500rpm，10min），倒去上清液，加入無菌注射用水，再次離心，倒去上清液，將菌體送至電熱恒溫干燥箱烘干至恒重（105℃，12h），自然冷卻后取出稱重，利用差量法求得發(fā)酵液中菌體濃度。

（二）低溫冷凍干燥法測菌濃

將五只離心試管置于干燥箱中烘干至恒重，自然冷卻后用電子天平稱其重量。分別準(zhǔn)確量取10ml制備好的發(fā)酵液，分別加入準(zhǔn)備好的五支離心試管中，送入離心機進行離心（3500rpm，10min），倒去上清液，加入無菌注射用水，再次離心，倒去上清液，將菌體送至真空冷凍干燥機干燥至恒重（-70℃～30℃，40h），取出稱重，利用差量法求得發(fā)酵液中菌體濃度。

三、結(jié)果

四、結(jié)語

從實驗結(jié)果不難看出，用真空冷凍干燥法和烘干法測得的同一批菌體濃度，偏差達(dá)到了15﹪，而且真空冷凍干燥法測得的菌濃要明顯高于用烘干法測得的菌濃。這是因為細(xì)胞的含水量包括了自由水和結(jié)合水，烘干法使兩者都得到蒸發(fā)，細(xì)胞活性喪失；而真空冷凍干燥，只使細(xì)菌失去細(xì)胞內(nèi)的自由水，可以完整的保存細(xì)胞的生物活性，所以使用真空冷凍干燥法測量細(xì)菌的濃度要高于烘干法測量的細(xì)菌濃度。那么我們在科研和生產(chǎn)中應(yīng)該使用這兩種方法中的哪一種更科學(xué)呢？我們可以看到用真空冷凍干燥法測得的菌體濃度標(biāo)準(zhǔn)偏差要小于用烘干法測得的菌體濃度偏差，這說明真空冷凍干燥法的穩(wěn)定性高于烘干法，但兩者相差不大。但是我們在平時的科研和生產(chǎn)中，特別是細(xì)菌的發(fā)酵過程中需要檢測活菌的生長情況，其中的菌體濃度又是重要指標(biāo)之一，那么我們用真空冷凍干燥法測得的菌體濃度，更接近于活菌的實際濃度值，而用烘干法測得的菌體濃度值是菌體干重，肯定會低于活菌的實際濃度值。并且，微生物細(xì)菌大多為活性物質(zhì)，高溫下會降解。所以作者認(rèn)為，在實際的科研和生產(chǎn)中，如果條件允許的話，真空冷凍干燥法測定菌體濃度較烘干法更加科學(xué)、精確。

參考文獻

[1] 孫悅迎.食品微生物[M].北京：中國商業(yè)出版社，1991.

[2] 牛天貴.食品微生物學(xué)實驗技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[3] 范秀容，微生物學(xué)實驗[M].北京：人民教育出版社， 1980：65-67.

[4] 周德慶，微生物學(xué)實驗手冊[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986：85-86.