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        Kindlin—2與VEGF—C蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及意義

        2016-04-26 12:13:04劉鑫辛瑞劉魯英
        科技視界 2016年9期
        關(guān)鍵詞:組織化學(xué)染色胃癌

        劉鑫 辛瑞 劉魯英

        【摘 要】目的:檢測胃癌組織中Kindlin-2與VEGF-C蛋白的表達(dá),探討二者在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:選取109例胃癌組織標(biāo)本為研究對象,采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測Kindlin-2與VEGF-C的表達(dá)。結(jié)果:Kindlin-2在54.1%的胃癌組織中表達(dá),與腫瘤TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),并發(fā)現(xiàn)Kindlin-2表達(dá)與VEGF-C表達(dá)在胃癌組織中呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論:Kindlin-2和VEGF-C可能在胃癌細(xì)胞侵襲過程中協(xié)同發(fā)揮作用。

        【關(guān)鍵詞】胃癌;Kindlin-2;VEGF-C;免疫組織化學(xué)染色

        The expression and significance of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric carcinoma

        LIU Xin XIN Rui LIU Lu-ying

        (Department of Pathology, Binzhou Medical University, Yantai Shandong 264003, China)

        【Abstract】Objective:to detect the expression of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric cancinoma and explore the role of the two proteins in the progression of gastric cancer. Methods: 109 cases of gastric carcinoma were selected as the research object. The expression of Kindlin-2 and VEGF-C were detected by immunohistochemical staining. Result: Kindlin-2 expressed in 54.1% of gastric cancer tissue, and it is closely related to the tumor TNM stage and lymph node metastasis。We also found that Kindlin-2 expression were positively correlated with the expression of VEGF-C in the tissue of gastric cancer(P<0.05). Kindlin-2 and VEGF-C may have coordinated role in the procession of gastric cancer cell invasion.

        【Key words】Gastric cancer; Kindlin-2; VEGF-C; Immunohistochemistry

        胃癌起病隱匿,診斷時往往已經(jīng)是晚期,因此,5年生存率較低,是危害人類健康的重要疾病。Kindlin-2屬于黏著斑蛋白(vinculin),在人類乳腺癌、前列腺癌中發(fā)現(xiàn)Kindlin-2與腫瘤的侵襲有關(guān)[1-2]。VEGF-C是VEGF家族成員之一,因其能調(diào)節(jié)淋巴管的發(fā)育、參與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移、促進(jìn)新生血管生成而備受關(guān)注。本研究通過免疫組織化學(xué)染色檢測Kindlin-2與VEGF-C在胃癌組織中表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系,探討Kindlin-2在胃癌侵襲等生物學(xué)行為中的作用及機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        收集109例在我院接受胃癌根治手術(shù)并有完善病理資料的病例,其中,男性76例、女性33例,男女比例為2.3:1;年齡<60歲的58例,≥60歲的51例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期,I期18例、II期20例、III期38例、IV期33例;所選擇的患者術(shù)前均未行任何形式的輔助治療。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實,采用10%福爾馬林液固定,石蠟包埋切片備用。

        1.2 主要試劑及方法

        兔抗人Kindlin-2多克隆抗體購自Abcam公司,兔抗人VEGF-C多克隆抗體購自Zymed公司,EnVision免疫染色試劑盒購自Dako公司。

        切片常規(guī)脫蠟水化,封閉內(nèi)源性過氧化物酶,抗原修復(fù),加入一抗工作液,加入二抗,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,脫水、透明、封片。PBS取代一抗作空白對照。

        1.3 結(jié)果判讀

        細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色細(xì)顆粒、棕黃色顆?;蜃睾稚诸w粒即判斷為陽性表達(dá)。顯色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)的染色特征為標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)著色(顏色)無、弱(淡黃)、中(棕黃)、強(qiáng)(棕褐)分別計分為0、1、2、3分;陽性細(xì)胞數(shù)≤5%、6%-25%、26%-50%、51%-75%、≥75%分別計分0、1、2、3、4分。免疫反應(yīng)評分=顯色強(qiáng)度×陽性細(xì)胞百分率。判定陽性結(jié)果:得分0~4分為低表達(dá),5~12分為高表達(dá)。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

        采用SPSS19.0數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,樣本率之間比較采用χ2檢驗,相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析進(jìn)行,P<0.05代表檢驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 Kindlin-2蛋白在胃癌組織中的表達(dá)

        Kindlin-2蛋白免疫組化顯色為黃色或棕黃色,彌漫分布于細(xì)胞質(zhì)中。Kindlin-2高表達(dá)者59例(54.1%)、低表達(dá)者50例(45.9%)。

        2.2 VEGF-C蛋白在胃癌組織中的表達(dá)

        VEGF-C蛋白免疫組化染色呈棕黃色或棕褐色,分布于胃癌細(xì)胞胞漿內(nèi),腫瘤間質(zhì)中少量存在。109例胃癌標(biāo)本中,42例表達(dá)(38.5%)、67例不表達(dá)(61.5%)。

        2.3 Kindlin-2在胃癌組織中表達(dá)的臨床意義及其與CTGF表達(dá)的相關(guān)性

        Kindlin-2在胃癌組織中的表達(dá)隨著TNM分期的升高明顯增強(qiáng)(P=0.014),并且在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中胃癌組織表達(dá)Kindlin-2顯著強(qiáng)于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例(P=0.014)。Kindlin-2在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、Lauren分型、脈管癌栓和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等都沒有顯著相關(guān)性。見表1。

        胃癌組織中Kindlin-2蛋白表達(dá)與CTGF蛋白表達(dá)顯著相關(guān)(P=0.004)。見表2。

        表1 Kindlin-2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系

        表2 Kindlin-2蛋白表達(dá)與VEGF-C表達(dá)之間的關(guān)系

        3 討論

        Kindlin-2是新近發(fā)現(xiàn)的黏著斑蛋白,通過與整合素β亞基胞質(zhì)尾區(qū)高親和力的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合,調(diào)控整合素活化與細(xì)胞骨架重排,參與機(jī)體多種重要的生理功能和病理過程。目前,Kindlin-2與臨床疾病的關(guān)系認(rèn)知較少,Kindlin-2異常不直接導(dǎo)致特定的遺傳性疾病可能與其具有胚胎致死性有關(guān)。但Kindlin-2在心血管系統(tǒng)的發(fā)育及新生血管的形成[2]及腫瘤的侵襲[3]過程中有著潛在且不可忽視的重要性。Kindlin-2在惡性黑色素瘤和胸膜肺癌轉(zhuǎn)移瘤中高表達(dá)并參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[4]。本研究通過免疫組織化學(xué)染色方法檢測Kindlin-2蛋白在胃癌組織中的表達(dá),Kindlin-2高表達(dá)者59例(54.1%),Kindlin-2在胃癌組織中的表達(dá)隨著TNM分期的升高明顯增強(qiáng)(P=0.014),并且在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中胃癌組織表達(dá)Kindlin-2顯著強(qiáng)于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例(P=0.014)。

        VEGF-C屬于血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)家族[5],Cao[6]等測定VEGF-C對血管和淋巴管的誘導(dǎo)情況,結(jié)果表明VEGF-C能誘導(dǎo)幾乎等量的血管和淋巴管生成。Kindlin-2是細(xì)胞間緊密連接的重要組成部分,作為一種信號銜接蛋白參與VEGF-C對血管通透性的調(diào)節(jié)作用。作用機(jī)制可能為:VEGF-C可以促進(jìn)Kindlin-2的酪氨酸磷酸化,加強(qiáng)腫瘤血管對大分子物質(zhì)的滲透作用。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌中Kindlin-2的表達(dá)與VEGF-C呈正相關(guān),表明Kindlin-2與VEGF-C相互作用,共同參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。

        目前,胃癌的臨床治療方式單一,生物治療現(xiàn)狀也不令人滿意,由于缺乏特異及高效的生物治療靶點(diǎn),現(xiàn)有的臨床病理指標(biāo)不足以支持胃癌的個體化治療。高表達(dá)的Kindlin-2和VEGF-C可能與胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為相關(guān)。深入研究胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中可能涉及的分子機(jī)制將有助于我們發(fā)現(xiàn)胃癌轉(zhuǎn)移的診斷標(biāo)志物,對設(shè)計新的治療胃癌的方法和尋求治療靶點(diǎn)有重要的意義。

        【參考文獻(xiàn)】

        [1]Sin S,Bonin F, Petit V, et al. Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis[J].J Natl Cancer Inst,2011,103(17):1323-1337.

        [2]Gong X, An Z, Wang Y, et al. Kindlin-2 controls sensitivity of prostate cancer cells to cisplatin-induced cell death[J].Cancer Lett,2010,299(1):54-62.

        [3]Shen Z, Ye Y, Dong L, et al. Kindlin-2:a noval adhesion protein related to tumor invasion, lymph node metastasis, and patient outcome in gastric cancer[J].Am J Surg,2012,203(2):222-9.

        [4]An Z, Dobra K, Lock J G, et al. Kindlin-2 is expressed in malignant mesothelioma and is requiret for tumor cell adhesion and migration[J].Int J Cancer,2010,127(9):1999-2008.

        [5]段澤星,謝立群,等.VEGF在腫瘤生長和血管生成中的作用[J].世界華人消化雜志,2010,18(27):2894-2900.

        [6]Cao R, Eriksson A, Kubo H, Alitalo K, Cao Y, Thyberg J. Comparative evaluation of FGF-2, VEGF-A, and VEGF-C-induced angiogenesis, lymphangiogenesis, vascular fenestrations, and permeability[J].Circ Res,2004,94:664-670.

        [責(zé)任編輯:王楠]

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