秦勝萍

廣州市蘿崗區(qū)永和街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，廣東　廣州　511356

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HPLC測定安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量

秦勝萍

廣州市蘿崗區(qū)永和街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，廣東廣州511356

【摘要】目的：研究HPLC測定安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量。方法：色譜柱：Hypersil ODS (250mm×4.6mm，5μm)；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸(黃芩苷、黃芩素流動(dòng)相比例分別為21∶79、35∶65)；波長：277nm，進(jìn)樣前脫氣0.5h。結(jié)果：黃芩苷在80～2400mg、黃芩素在5.10～40.80mg范圍內(nèi)回收效果良好。結(jié)論：本方法可用于安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量測定。

【關(guān)鍵詞】安宮牛黃丸；黃芩苷；黃芩素；

安宮牛黃丸是中醫(yī) “溫病” 范疇的急救藥物，對其質(zhì)量的要求也較高。臨床主要用于病毒性腦炎、胰島素不足型糖尿病、腦中風(fēng)、原發(fā)性高血壓、精神障礙、嬰幼兒肺炎、股血癥、敗血癥和重型顱腦損傷等[1]。安宮牛黃丸的配方包括牛黃、水牛角、麝香、珍珠、雄黃、朱砂、郁金、黃連、黃芩、梔子和冰皮，其中黃芩的主要成分是黃芩苷和黃芩素，其主要活性為抗菌消炎、增加免疫力、保肝利膽、清熱去火等[2]。利用高效液相色譜(HPLC)對安宮牛黃丸中的黃芩苷和黃芩素含量進(jìn)行測定已取得顯著效果[3]。

1儀器與材料

1.1儀器高壓液相色譜儀(美國Agilent 1100型)；精密電子分析天平(AMY 220)；超聲波震蕩儀(KQ-250B)。

1.2材料安宮牛黃丸(國藥準(zhǔn)字Z21020627，沈陽紅藥制藥有限公司)；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品(批號：110715-200413，中國藥品生物制品檢定所)；黃芩素對照品(批號：TCM015080118，南京替斯艾么中藥研究所);乙腈、甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為純凈水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件Hypersil ODS (250mm×4.6mm，5 μm)；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相：乙腈-0.4% H3PO4(黃芩苷與黃芩素分別為21∶79、35∶65)；波長：277nm，進(jìn)樣前脫氣0.5h。

2.2溶液的制備

2.2.1樣品溶液的制備將安宮牛黃丸破碎，準(zhǔn)確稱0.400g，轉(zhuǎn)移至5ml玻璃瓶中，加5ml CH3OH，超聲提取15min，離心后保留上清液，該操作重復(fù)2次。將上述三次收集的上清液合并，定容至25ml。在上樣前，用0.45μm的過濾器去除大的殘?jiān)?/p>

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備分別準(zhǔn)確稱取黃芩苷和黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品5mg與2.5mg，分別用CH3OH稀釋并定容至5ml，濃度為1mg/ml和0.5mg/ml。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線分別精確量取黃芩苷、黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，然后配置系列溶液，并分別吸取20μl進(jìn)樣，根據(jù)色譜峰面積Y對濃度X(μg/ml)做線性分析。黃芩苷的回歸方程為Y=32160X-3.9419 (r=0.9999)，線性范圍為80～2400mg；黃芩素Y=41796X-162.87 (r=0.9999)，線性范圍5.10～40.80mg。

2.4精密度試驗(yàn)精確吸取標(biāo)準(zhǔn)品20μl。連續(xù)重復(fù)6次，測定黃芩苷和黃芩素的峰面積并進(jìn)行精密度計(jì)算，結(jié)果見表1。

表1　精密度試驗(yàn)

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品，分別于0、1、3、5、7、9h分別加樣20μl，測定黃芩苷和黃芩素的峰面積，結(jié)果如表2。

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.6重復(fù)性試驗(yàn)準(zhǔn)確稱取0.6g的安宮牛黃丸，總共6份。按之前的方法制備成溶液并進(jìn)行峰面積分析。黃芩苷和黃芩素的峰面積結(jié)果見表3。

表3　重復(fù)性試驗(yàn)

2.7回收率試驗(yàn)準(zhǔn)確稱取0.2g的已知樣品，總共5份，分別加入黃芩苷和黃芩素的標(biāo)準(zhǔn)品，制備成溶液，測定黃芩苷和黃芩素的含量，計(jì)算兩者的加樣回收率分別為100.02%和98.823%，RSD%分別為0.63和1.29，結(jié)果見表4。

表4　回收率試驗(yàn)　(mg)

2.8樣品含量測定依次取3顆安宮牛黃丸，按上述條件進(jìn)行制備樣品，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃芩苷和黃芩素的含量。結(jié)果見表5。

表5　樣品含量測定　(mg)

3討論

中藥制劑成分復(fù)雜，且各組分的預(yù)處理方式不同，加工方式不同，單純的將組方藥摻雜在一起很難發(fā)揮藥效[4]。鑒于中藥制劑各組分之間的協(xié)調(diào)性、互補(bǔ)性和相互制約性，必須建立一種檢測方法可以對中藥組方中的活性物質(zhì)含量進(jìn)行測定[5]。尤其是多指標(biāo)成分的定量分析，可保證臨床用藥的安全性、有效性和可靠性。目前使用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)都是以生化藥物為基礎(chǔ)的化學(xué)成分分析和測定，與中藥的臨床療效的相關(guān)性不高，不能完整的反應(yīng)中藥中有效成分的含量[6]。且復(fù)方藥的成分極為復(fù)雜，其有效成分的含量測定會(huì)因提取和測定方法的不同而出現(xiàn)差異。安宮牛黃丸由11種藥物組合而成，其藥理作用機(jī)制復(fù)雜，藥物與藥物之間的作用目前還不能得到科學(xué)的解釋，而黃芩苷和黃芩素是該藥的有效成分，必須對兩者的含量進(jìn)行嚴(yán)格的檢測，保證藥品的質(zhì)量[7-8]。

研究采用HPLC法對安宮牛黃丸中的有效成分黃芩苷和黃芩素的含量進(jìn)行分析，確定最佳的優(yōu)化條件，并對影響HPLC結(jié)果的各方面因素進(jìn)行考察，結(jié)果表明HPLC的檢測結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)性高。利用分光光度計(jì)對標(biāo)準(zhǔn)品溶液在200～400nm波長內(nèi)掃描檢測，結(jié)果在280nm處有最大吸收峰。研究嘗試多種提取方法以尋求更適合的提取方式，結(jié)果表明超聲波和加熱回流提取兩種方式的回收效果最高，而超聲提取的雜質(zhì)更少，因此選擇超聲提取，時(shí)間選為15min。分別用甲醇和乙醇進(jìn)行提取，根據(jù)過濾時(shí)的難易程度及回收率結(jié)果，甲醇的效果更好。流動(dòng)相經(jīng)過探索確定為乙腈-0.4%磷酸。綜上所述，本法具有精密性、穩(wěn)定性和重復(fù)性好的特點(diǎn)，可用于安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量測定。

參考文獻(xiàn)

[1] 厙宇，郜巒.安宮牛黃丸在中風(fēng)陽閉證中的應(yīng)用[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012，7(2):155．

[2] 崔愛瑛.安宮牛黃丸的藥理及臨床研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，8(20):342-343.

[3] 郜清.HPLC法測定安宮牛黃丸中黃芩苷含量[J].安徽醫(yī)藥，2013，17(5):766-767.

[4] 李文烈，曹海芳，魏剛.中藥制劑質(zhì)量控制的研究進(jìn)展[J].中國執(zhí)業(yè)藥師，2012，9(7):32-35.

[5] 林輝.HPLC 法測定梔子金花丸中黃芩苷的含量[J].海峽藥，2012，24(11):79-80．

[6] 楊華，李希，高華娟，等.中藥質(zhì)量生物活性檢測的發(fā)展現(xiàn)狀及思考[J].中藥與臨床，2014，5(1):50-53.

[7] 葉世龍，劉愛芹.安宮牛黃丸的實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29(9):1954-1957.

[8] 楊仕珉，詹雪艷，馮欣，等.基于牛黃特征峰的安宮牛黃丸特征指紋圖譜研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2014，29(9):2923-2926.

(收稿日期：2016.01.07)

【中圖分類號】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)06-0026-02

作者簡介：秦勝萍，女，主管藥師，主要從事藥學(xué)研究。