王新莉

(青海省黃南州藏醫(yī)院檢驗科，青海黃南 811399)

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·臨床研究·

酶聯(lián)免疫吸附試驗與化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測乙型肝炎5項血清標(biāo)志物的對比分析

王新莉

(青海省黃南州藏醫(yī)院檢驗科，青海黃南 811399)

摘要:目的對酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA) 檢測乙型肝炎5項血清標(biāo)志物的結(jié)果和重復(fù)性進(jìn)行比較和分析。方法分別用ELISA和CLIA檢測了500份臨床血清標(biāo)本，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb各100例，對兩種方法的陽性率和符合率進(jìn)行了統(tǒng)計分析，對CLIA與ELISA結(jié)果不符的標(biāo)本用第三種方法進(jìn)行了復(fù)測；另用60例HBsAb標(biāo)本對兩種方法的重復(fù)性進(jìn)行了比較。結(jié)果CLIA檢測HBsAg和HBcAb的陽性率高于ELISA的檢測結(jié)果，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.308、5.637，P<0.05)；而HBsAb、HBeAg、HBeAb的陽性率與ELISA的檢測結(jié)果相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.361、0.785、0.180，P>0.05)。重復(fù)性試驗表明CLIA的批內(nèi)CV(1.04%～2.8%)、批間CV(4.19%～8.19%)都明顯優(yōu)于ELISA的批內(nèi)CV(3.81%～12.56%)、批間CV(10.31%～18.90%)。結(jié)論CLIA檢測乙型肝炎5項血清標(biāo)志物比ELISA重復(fù)性好，HBsAg和HBcAb項目的靈敏度更高，總體結(jié)果更準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞:乙型肝炎；化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附試驗；血清標(biāo)志物

我國是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，1992年全國血清流行病學(xué)調(diào)查顯示人群乙型肝炎病毒(HBV)感染率達(dá)60%[1]，近年來有所下降。提高乙型肝炎的診治水平，對保障我國人民健康具有重要意義。過去，我國中、基層醫(yī)院做乙型肝炎5項血清標(biāo)志物的主要方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。進(jìn)入21世紀(jì)后，以化學(xué)發(fā)光為主的自動化檢測系統(tǒng)逐漸興起，且以國外進(jìn)口的設(shè)備和試劑居多。近年來，國產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光儀器和配套試劑也開始使用，它在我國中、基層醫(yī)院的推廣價值較高。本文的目的是對一種國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光儀及配套乙型肝炎5項血清標(biāo)志物試劑與傳統(tǒng)ELISA進(jìn)行對比，就陽性率、符合率、準(zhǔn)確性、重復(fù)性等主要指標(biāo)進(jìn)行比較。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源收集檢測了HBV標(biāo)志物[HBV表面抗原(HBsAg)、HBV表面抗體(HBsAb)、HBV核心抗體(HBcAb)、HBVe抗原(HBeAg)、HBVe抗體(HBeAb)]血清標(biāo)本各100例，用ELISA測定陰、陽性各50例。所有標(biāo)本都來自本院2014年1～12月住院部和門診部的患者。其中男312例、女188例，年齡10～75歲、中位年齡42歲。

1.2儀器與試劑MA-96A型酶標(biāo)儀為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)，ELISA試劑及陰陽性對照品均為英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司生產(chǎn)；IS1200化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、一次性槍頭/反應(yīng)杯等，均為四川邁克生物科技股份有限公司生產(chǎn)；復(fù)測用雅培Architect I2000SR及配套乙型肝炎5項血清標(biāo)志物試劑盒。

1.3方法收集的臨床標(biāo)本分別用ELISA及化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)進(jìn)行檢測，兩種方法檢測間隔的時間不超過24 h。ELISA法嚴(yán)格按照試劑說明書操作，用450/630 nm測定各孔OD值，陰性對照孔OD平均值×2.1作為臨界值(CO)；HBsAg、HBsAb、HBeAg標(biāo)本S/CO≥1者為陽性(+)，S/CO<1者為陰性(-)，HBeAb和HBcAb標(biāo)本S/CO≤1者為陽性(+)，S/CO>1者為陰性(-)。CLIA法按儀器說明書嚴(yán)格操作，儀器根據(jù)校準(zhǔn)品的發(fā)光值自動計算CO值，自動輸出標(biāo)本的COI或濃度值及陰陽性；HBsAg、HBeAg標(biāo)本COI≥1者為陽性(+)，否則為陰性(-)，HBeAb、HBcAb標(biāo)本COI≤1者為陽性(+)，否則為陰性(-)；HBsAb檢測值>10 mIU/mL為陽性(+)，否則為陰性(-)。雅培Architect I2000SR復(fù)測在青海省人民醫(yī)院檢驗科測定。重復(fù)性試驗：用HBsAb項目進(jìn)行重復(fù)性評價，選擇3份不同濃度的血清標(biāo)本，連續(xù)測定20次，計算批內(nèi)CV；另外3份不同濃度血清標(biāo)本分裝凍存，每天測定1次，共20 d，計算批間變異系數(shù)(CV)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理使用MedCalc(V14.8.1)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩種方法的檢測結(jié)果見表1。CLIA檢測HBsAg陽性率為64%，ELISA的陽性率為36%；CLIA檢測HBcAb的陽性率為67%，ELISA陽性率為33%：CLIA檢測這2個項目的陽性率結(jié)果明顯高于ELISA的檢測結(jié)果，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.308、5.637，P<0.05)。而CLIA檢測HBsAb陽性率為54%，ELISA檢測陽性率為46%；CLIA檢測HBeAg陽性率為46%，ELISA檢測陽性率為54%；CLIA檢測HBeAb的陽性率為47%，ELISA陽性率為53%：兩種方法檢測結(jié)果相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.361、0.785、0.180，P>0.05)。

表1　　ELISA和CLIA檢測乙型肝炎5項血清

+：陽性，-：陰性。

2.2ELISA與CLIA不符標(biāo)本用雅培Architect I2000SR復(fù)測結(jié)果見表2。結(jié)果顯示CLIA在HBsAg和HBcAb項目的靈敏性要明顯高于ELISA。

表2　　ELISA與CLIA不符標(biāo)本用雅培Architect

+：陽性，-：陰性。

2.3兩種方法重復(fù)性試驗結(jié)果見表3。試驗結(jié)果表明CLIA的批內(nèi)CV(1.04%～2.8%)、批間CV(4.19%～8.19%)都明顯優(yōu)于ELISA的批內(nèi)CV(3.81%～12.56%)、批間CV(10.31%～18.90%)。

表3　　ELISA與CLIA重復(fù)性試驗結(jié)果

3討論

目前國內(nèi)普遍采用ELISA檢測乙型肝炎5項血清標(biāo)志物，作為臨床診斷HBV感染和觀察療效的重要依據(jù)。近年來自動化化學(xué)發(fā)光檢測也進(jìn)入了基層醫(yī)院，但很多醫(yī)檢人員對這兩種技術(shù)的異同還不很了解。本研究中HBsAg和HBcAb的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，在50例ELISA陰性標(biāo)本中CLIA分別檢出了14例HBsAg陽性和17例HBcAb陽性，而ELISA陽性標(biāo)本CLIA也全部為陽性；經(jīng)雅培Architect I2000SR復(fù)測，這14例HBsAg均為陽性，17例HBcAb中16例都為陽性；證明CLIA的靈敏度顯著高于ELISA，這與以前的文獻(xiàn)報道基本一致[2-3]。CLIA的HBsAg靈敏度達(dá)到了0.13 IU/mL,普遍認(rèn)為要比ELISA高4～10倍[3]，而且CLIA的清洗效率高、人為誤差小，這可能是其陽性檢出率高的原因；因為這些有差異的標(biāo)本ELISA很多都在灰區(qū)，標(biāo)本多有高膽紅素、高血脂、溶血現(xiàn)象，有報道認(rèn)為這些因素可能干擾ELISA的結(jié)果[4]。

本研究中HBsAb、HBeAg、HBeAb的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這與以前的有些文獻(xiàn)報道略有不同[2-3]，可能是因為ELISA檢測這些年也在不斷地改良提高。但ELISA檢測中HBsAb仍然存在少量假陰性，HBeAg、HBeAb也存在少量假陽性；ELISA檢測的假陽性問題與其抗體來源、純化工藝有關(guān)[3，5]。本研究中的這些假陽或假陰大多都在臨界值附近，因此也可能與ELISA方法學(xué)的局限性、重復(fù)性較差有關(guān)。

ELISA雖然成本低廉，但由于靈敏度低、需要反復(fù)洗板、孔間差異、孔間污染、結(jié)果判定有主觀性等原因，容易出現(xiàn)較多的假陽性及假陰性[6-9]，因此不適用于低濃度標(biāo)本和窗口期標(biāo)本的檢測。CLIA全面實現(xiàn)了自動化和標(biāo)準(zhǔn)化，HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb 4項檢測結(jié)果以COI指數(shù)來量化，HBsAb結(jié)果是溯源至國際單位的定量結(jié)果，質(zhì)控采用廠家的原裝配套質(zhì)控品[10-11]。全程自動化加樣，減少了人為誤差，本研究也證明了CLIA的批內(nèi)CV和批間CV都要優(yōu)于ELISA。CLIA的高靈敏度和高特異性對于低濃度標(biāo)本和窗口期標(biāo)本不容易漏檢，也可降低少見模式[4-5]，其量化結(jié)果方便患者的追蹤治療。隨著國家對醫(yī)療行業(yè)的投入不斷加大，CLIA可為基層醫(yī)院提供更準(zhǔn)確、可靠的依據(jù)[12-14]。

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(收稿日期：2015-12-23)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.039

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)06-0807-02