涂業(yè)桃，溫先勇，黃　麗

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院:1.輸血科；2.檢驗(yàn)科，四川瀘州 646000)

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·臨床研究·

HCV RNA、HCVAb及HCVcAg對丙型肝炎的診斷價(jià)值

涂業(yè)桃1，溫先勇2，黃麗2

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院:1.輸血科；2.檢驗(yàn)科，四川瀘州 646000)

摘要:目的通過檢測丙型肝炎(丙肝)患者丙肝病毒(HCV) RNA、HCVAb及HCVcAg 3項(xiàng)指標(biāo)，評估三者在丙肝診斷中的價(jià)值。方法對臨床診斷為丙肝的80例患者以及50例非丙肝感染者的血清進(jìn)行HCV RNA、HCVAb以及HCVcAg檢測。結(jié)果80例丙肝患者中，HCV RNA、HCVAb、HCVcAg 陽性率分別為87.5%、81.3%、30.0%；試驗(yàn)組中，HCV RNA、HCVAb以及HCVcAg三種檢測項(xiàng)目之間檢測結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HCV RNA、HCVAb、HCVcAg三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)敏感性分別是87.5%、81.3%、30.0%，特異性分別是98.0%、92.0%、96%，陽性預(yù)測值分別是98.6%、94.2%、93.2%。結(jié)論在診斷丙肝的三項(xiàng)檢測指標(biāo)中，HCV RNA 檢測對丙肝診斷的敏感性、特異性及準(zhǔn)確度最好；HCVAb檢測次之，HCVcAg檢測較差。

關(guān)鍵詞:丙型肝炎；HCV RNA；HCVAb；HCVcAg

據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，自1989年丙型肝炎(丙肝)被發(fā)現(xiàn)以來，全球約1.7億至2.0億人感染丙肝病毒(HCV)，感染率為3%[1]。丙肝是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一，主要經(jīng)血或血制品傳播，與乙型肝炎相比早期的臨床癥狀較輕，但是其較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化，導(dǎo)致肝癌，病死率高，預(yù)后不良，目前尚無理想的特效藥物和治療措施，因此HCV的檢測對HCV感染的早期診斷和臨床治療顯得尤為重要。同時(shí)HCV作為獻(xiàn)血篩查的主要項(xiàng)目，在保證臨床輸血和血液制品安全方面有著重要作用。本文旨在通過對HCV抗體(HCVAb)、HCV RNA以及HCV核心抗原(HCVcAg)的評估，為丙肝的臨床診治提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2014年4月瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診及住院部通過HCV RNA、HCVcAg或HCVAb檢測陽性確診為丙肝的患者80例(試驗(yàn)組)，年齡18～80歲，其中男57例、女23例，排除甲、乙、丁、戊等其他病毒性肝炎及其他免疫性疾病。50例健康對照(健康對照組)來自同期體檢人員，其中男27例、女23例，年齡18～80歲，體檢生化指標(biāo)無明顯異常，無其他感染或免疫性疾病。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器DR-200BS酶標(biāo)儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)，CFX960熒光定量分析系統(tǒng)(美國 BIO RAD)。

1.2.2試劑HCVcAg試劑盒(山東萊博)，HCVAb試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè))，HCV RNA試劑盒(深圳凱杰生物工程公司)。具體操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

1.3方法分別檢測各組血清HCV RNA、HCVAb及HCVcAg。HCVAb及HCVcAg采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測，HCV RNA采用PCR檢測。

1.4統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS20.0軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，兩兩比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.180例丙肝患者中，HCV RNA、HCVAb、HCVcAg陽性率分別為87.5%、81.3%、30.0%。80例患者及50例健康對照HCVcAg、HCVAb、HCV RNA檢測結(jié)果見表1。

表1　　HCVcAg、HCVAb、HCV RNA檢測結(jié)果

表2　　試驗(yàn)組HCVcAg與HCVAb檢測結(jié)果分析比較*1(n)

*1:χ2=28.07,P<0.05,試驗(yàn)組與HCVcAg與HCVcAb檢測結(jié)果比較。

表3　　試驗(yàn)組HCVcAg與HCV RNA檢測結(jié)果分析比較*1(n)

*1:χ2=43.58，P<0.05,試驗(yàn)組與HCVcAg與HCVcRNA檢測結(jié)果比較。

表4　　試驗(yàn)組HCV RNA與HCVAb 檢測結(jié)果分析比較*1(n)

*1:χ2=10.45，P<0.05,試驗(yàn)組與HCV RNA與HCV Ab檢測結(jié)果比較。

2.280例丙肝患者中HCVcAg、HCVAb、HCV RNA三種檢測項(xiàng)目之間檢測結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中，HCVcAg與HCVAb比較，χ2=28.07，P<0.05；HCVcAg與HCV RNA比較，χ2=43.58，P<0.05；HCVAb與HCV RNA比較，χ2=10.45，P<0.05。見表2～4。

2.33項(xiàng)試驗(yàn)的方法學(xué)評價(jià)見表5。

表5　　3項(xiàng)試驗(yàn)方法學(xué)評價(jià)

3討論

HCV是多變異病毒，在同型各株間，甚至同一患者不同時(shí)期分離的克隆之間亦有差異，基因序列的差異將導(dǎo)致編碼產(chǎn)物抗原的不同[2-4]。目前臨床用于檢測HCV感染的指標(biāo)主要有HCVAb、HCVcAg及HCV RNA檢測。這3種指標(biāo)在HCV感染的臨床診斷、指導(dǎo)治療和療效監(jiān)測等方面起到關(guān)鍵作用，但都存在一定的局限性。目前，各研究結(jié)果表明，HCVcAg與HCVAb、HCV RNA在聯(lián)合診斷丙肝上有互補(bǔ)作用[5]。

HCVAb檢測是目前各級醫(yī)院最早、最常用的檢測方法，HCVAb檢測篩查和對疾病的診斷，使輸血后丙肝的發(fā)生率大大降低。本研究表明：在HCVAb陽性的患者中，具有病毒復(fù)制(病毒RNA陽性)的約為55/65(84.6%)，部分并沒有病毒血癥的存在，同時(shí)，在HCVAb陽性的人群中其HCVcAg檢測陽性的比例為24/65(36.9%)，表明在抗體檢測陽性的人群中全部進(jìn)行核酸定量檢測可能會(huì)浪費(fèi)大量的醫(yī)療資源。因此，對于HCVAb陽性的人群，可以選擇先進(jìn)行HCVcAg的檢測，在有必要的基礎(chǔ)上再進(jìn)行核酸的定量分析[6]。本試驗(yàn)檢測結(jié)果分析顯示：HCV RNA、HCVAb陽性率分別為87.5%、81.3%，說明有6.25%的HCV感染者為HCV RNA陽性，HCVAb陰性。對于這種情況，分析其可能原因如下：(1)HCV感染后，HCVAb產(chǎn)生前存在一個(gè)較長的窗口期，如果檢測在窗口期的話，則可能為HCV RNA陽性，HCVAb陰性。(2)在一些免疫缺陷患者或在使用免疫抑制劑治療的患者則不能檢測出HCVAb[7]。(3)在某些HCV感染恢復(fù)期的患者或者免疫功能低下的HCV感染者中，HCVAb可能會(huì)逐漸下降到檢測限以下或持續(xù)陰性，這時(shí)HCV RNA的檢測是感染HCV的唯一證據(jù)[8]。(4)由于HCV具有高度的變異性，加上我國應(yīng)用ELISA進(jìn)行HCV檢測的試劑盒及試劑抗原來源各異，致使HCVAb陽性率有較大差別[6]。

HCVcAg是HCV感染后最早出現(xiàn)在血清中的，它的檢測能更早地發(fā)現(xiàn)HCV的感染，為患者爭取更早的診斷和治療時(shí)間[6]。部分文獻(xiàn)結(jié)果顯示HCVcAg檢測與HCV RNA符合率為92.85%[2]，說明了HCVcAg檢測間接反映了HCV復(fù)制，可有效預(yù)防窗口期感染。本試驗(yàn)HCVcAg陽性率較低，為30.0%，HCVcAg與HCV RNA檢測經(jīng)χ2檢驗(yàn)其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與國外的報(bào)道結(jié)果稍有差異。其可能原因分析如下：(1)HCV感染后患者體內(nèi)產(chǎn)生的抗體可與游離的HCVcAg形成抗原抗體復(fù)合物，HCV核心抗原抗體復(fù)合物在預(yù)處理時(shí)解離不完全可影響HCVcAg的檢出[4]。(2)由于HCV在機(jī)體復(fù)制增殖時(shí)，存在HCVcAg和HCVAb濃度相互主導(dǎo)轉(zhuǎn)換的一個(gè)過程。感染初期，機(jī)體內(nèi)存在一定濃度的HCVcAg，刺激機(jī)體產(chǎn)生HCVAb，幾乎所有的游離HCVAb與HCVcAg結(jié)合成免疫復(fù)合物，此時(shí)抗原過量，而酶聯(lián)免疫法只能檢測游離狀態(tài)的HCVAb或HCVcAg，因此HCVAb檢測為陰性，HCVcAg為陽性。隨著病程的進(jìn)展HCVAb濃度增高，游離HCVcAg濃度下降，抗體和抗原結(jié)合，機(jī)體內(nèi)仍存在一定濃度游離的HCVAb，可被酶聯(lián)免疫法檢測出來，此時(shí)HCVAb和HCVcAg的檢測均為弱陽性。隨著病程的進(jìn)一步發(fā)展，HCVAb繼續(xù)升高，體內(nèi)的絕大部分HCVcAg與HCVAb結(jié)合形成免疫復(fù)合物，游離的HCVcAg低于檢測下限轉(zhuǎn)為陰性，而HCVAb的濃度進(jìn)一步升高，HCVAb檢測才為陽性[7]。(3)抗原出現(xiàn)較早者或與抗體結(jié)合而檢測不出抗原存在。抗體出現(xiàn)及消失均晚，恢復(fù)期患者抗原消失而抗體仍然存在[8]。(4)HCV是一種極易發(fā)生突變的RNA病毒，由于其基因突變率高，導(dǎo)致丙肝的抗原變異性大[7]。5) HCV RNA陽性血清中還有髙滴度的HCV抗體，干擾HCVcAg的檢測而導(dǎo)致假陰性結(jié)果[5]。

HCV RNA檢測可以反映病毒的復(fù)制和傳染性，是診斷HCV的“金標(biāo)準(zhǔn)”，可以縮短感染后血清陽轉(zhuǎn)前的檢測窗口期，以實(shí)現(xiàn)HCV感染的早期診斷。對于本研究中的80例丙肝患者，有12.5%的患者為HCV RNA陰性。分析其可能原因如下：(1)部分患者在進(jìn)行抗病毒治療時(shí)，干擾和抑制了HCV RNA的復(fù)制。(2)HCV RNA易被血細(xì)胞中的RNA酶降解，降低檢出率[4]。(3)部分標(biāo)本中HCV RNA水平低于試劑盒的檢出限。(4)血液中存在高濃度的蛋白酶和RNA酶，可能引起標(biāo)本RNA有降解。

本次研究中，HCV RNA的特異性和敏感性均好，已能夠滿足臨床對丙肝的診斷要求；HCVcAg檢測敏感性稍差，并且在體內(nèi)存在的時(shí)間較短，單項(xiàng)檢測對于非早期HCV感染者的漏診率較高。因此HCVAb、HCVcAg兩者聯(lián)合檢測對于丙肝診斷的價(jià)值更大。

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(收稿日期：2016-01-20)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.038

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)06-0805-02