于　翔，陳文霏，余小六，江　明，李　可，余枝廣

(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司免疫試劑開發(fā)部，廣東深圳 518057)

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IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究(二)

于翔，陳文霏#，余小六，江明，李可，余枝廣△

(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司免疫試劑開發(fā)部，廣東深圳 518057)

摘要:目的通過參與國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(IFCC)甲狀腺功能檢測標(biāo)準(zhǔn)化委員會(C-STFT)一致性研究方案，初步實現(xiàn)邁瑞檢測系統(tǒng)促甲狀腺激素(TSH)檢測結(jié)果的一致性。方法使用不同批次試劑和校準(zhǔn)品搭配構(gòu)成的3種組合，分別檢測發(fā)放的20例健康者標(biāo)本，評估檢測結(jié)果的批內(nèi)不精密度和批間差異。與C-STFT提供的所有測量程序修剪均值(APTM)比對，評估一致性，并修正校準(zhǔn)曲線進行重校準(zhǔn)。結(jié)果檢測結(jié)果的批內(nèi)不精密度為1.95%，批間差異范圍為0.47%～1.15%；與APTM存在正偏差，修正校準(zhǔn)曲線重校準(zhǔn)后，檢測結(jié)果Passing & Bablok回歸線斜率為1.0，相關(guān)系數(shù)大于0.975。結(jié)論通過檢測IFCC統(tǒng)一發(fā)放的血清盤和參考提供的APTM值，修正校準(zhǔn)曲線重校準(zhǔn)，實現(xiàn)了該檢測系統(tǒng)與其他廠家檢測系統(tǒng)TSH檢測結(jié)果的一致性。

關(guān)鍵詞:促甲狀腺激素；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；國際臨床化學(xué)聯(lián)合會甲狀腺功能檢測標(biāo)準(zhǔn)化委員會；測量程序修剪均值

促甲狀腺激素(TSH)檢測具有世界衛(wèi)生組織國際標(biāo)準(zhǔn)品(NIBSC 81/565)，但由于存在基質(zhì)效應(yīng)、分析物差異性等問題，不能保證可溯源至標(biāo)準(zhǔn)品的所有檢測系統(tǒng)對實際標(biāo)本檢測結(jié)果的一致性[1]。自2010年開始，國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(IFCC)甲狀腺功能檢測標(biāo)準(zhǔn)化委員會(C-STFT)嘗試推出特定的血清盤及所有測量程序修剪均值(APTM)的概念，在全球范圍征集了具有代表性的十余個廠家檢測系統(tǒng)，包括羅氏、雅培、貝克曼、西門子、邁瑞等，分階段進行TSH檢測結(jié)果一致性的可行性研究[2-3]。邁瑞公司采用CL2000i免疫檢測系統(tǒng)和配套TSH試劑盒，檢測了C-STFT提供的首期20份血清標(biāo)本。C-STFT結(jié)合所有參與廠家的檢測結(jié)果，對CL2000i系統(tǒng)TSH檢測結(jié)果的可靠性和一致性進行了客觀評估。邁瑞公司則結(jié)合C-STFT反饋結(jié)果，根據(jù)20份標(biāo)本的APTM數(shù)值修正校準(zhǔn)曲線，并對檢測系統(tǒng)進行了重校準(zhǔn)，初步實現(xiàn)了與國際主流廠家TSH檢測結(jié)果的一致性。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源IFCC第1期20例標(biāo)本來自Solomon Park Research Laboratories收集的自愿獻血者，均為表觀健康者，涵蓋有代表性的年齡段。嚴(yán)格按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)C37-A程序文件的要求采集血液標(biāo)本，未進行抗甲狀腺球蛋白抗體(Anti-Tg)和抗甲狀腺過氧化物酶抗體(Anti-TPO)檢測。標(biāo)本長期凍存，運送過程中溫度控制在-20 ℃以下。血清標(biāo)本TSH濃度根據(jù)已完成一致性研究的數(shù)個國際性生產(chǎn)廠家分析系統(tǒng)的檢測結(jié)果確定[4]。C-STFT通過因子分析(FA)模型對廠家檢測結(jié)果進行統(tǒng)計處理，剔除明顯離群值，以模擬數(shù)值代替，最終獲得各標(biāo)本的APTM，見表1[5-6]。

1.2方法采用邁瑞公司CL2000i全自動化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)及配套TSH試劑盒、校準(zhǔn)品和甲狀腺功能復(fù)合質(zhì)控品進行C-STFT標(biāo)本檢測。

1.2.1儀器維護與基礎(chǔ)性能測試按維護規(guī)程對CL2000i檢測系統(tǒng)進行維護，并作基礎(chǔ)性能測試，確保所有基礎(chǔ)性能滿足要求。

1.2.2校準(zhǔn)與質(zhì)控儀器裝載試劑盒，使用匹配的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，檢測甲狀腺功能復(fù)合定值質(zhì)控品，確定質(zhì)控品檢測結(jié)果在(靶值±2s)范圍內(nèi)后檢測C-STFT標(biāo)本。根據(jù)實驗室內(nèi)長期質(zhì)控結(jié)果，質(zhì)控靶值與范圍見表2。

表1　　C-STFT標(biāo)本APTM(mIU/L)

表2　　TSH質(zhì)控品靶值和允許偏差(mIU/L)

1.2.3試劑性能評估為滿足一致性研究的要求，對CL2000i檢測系統(tǒng)TSH試劑盒進行全面的基本性能研究，包括最低檢測限、功能靈敏度、線性范圍、分析特異性、抗內(nèi)源性干擾、不精密度及校準(zhǔn)一致性等，要求各性能指標(biāo)符合文獻[7]的要求。

1.2.4C-STFT標(biāo)本檢測采用2批試劑和2批校準(zhǔn)品隨機搭配成3種組合(見表3)進行第1批IFCC標(biāo)本檢測。每批標(biāo)本檢測開始前和結(jié)束后檢測質(zhì)控品。每批檢測將C-STFT標(biāo)本按編號順序檢測1次，再逆序檢測1次。

表3　　TSH檢測試劑和校準(zhǔn)品批號組合

表4　　標(biāo)本檢測前、后質(zhì)控品檢測結(jié)果(mIU/L)

2結(jié)果

3種組合在C-STFT標(biāo)本檢測前、后的質(zhì)控品檢測結(jié)果均在(靶值±2s)范圍內(nèi)，系統(tǒng)均在控(見表4)。試劑各性能指標(biāo)均符合要求。方差成分分析結(jié)果顯示，20個C-STFT標(biāo)本檢測結(jié)果批內(nèi)不精密度為1.95%。采用Passing & Bablok回歸分析進行方法學(xué)比對，結(jié)果顯示，采用3種試劑與校準(zhǔn)品組合進行C-STFT標(biāo)本檢測，結(jié)果間的總偏差范圍為0.47%～1.15%，見圖1。試劑與校準(zhǔn)品3種組合的正向和反向檢測結(jié)果的偏差分析見圖2，偏差在±10%范圍內(nèi)，測試結(jié)果穩(wěn)定，無明顯的漂移。3批檢測結(jié)果均值與APTM存在一定的正偏差。根據(jù)APTM反向擬合，修正校準(zhǔn)曲線，重新校準(zhǔn)檢測系統(tǒng)，可使檢測結(jié)果與APTM具有一致性。重校準(zhǔn)后的均值偏差分布見圖3。對重校準(zhǔn)后的檢測結(jié)果進行殘差分析，僅有1份標(biāo)本超出+1.96s上限。殘差分布分析見圖4。重校準(zhǔn)后的檢測結(jié)果相對APTM的平均偏差為2.09%，相關(guān)系數(shù)大于0.975，Passing & Bablok回歸線斜率約為1.0，見圖5。

圖1　　3種試劑與校準(zhǔn)品組合檢測結(jié)果比較

圖2　　穩(wěn)定性與漂移分析

圖3　　重校準(zhǔn)后標(biāo)本檢測結(jié)果均值與APTM的偏差

圖4　　殘差分布

圖5　　Passing & Bablok回歸線

3討論

IFCC下屬機構(gòu)C-STFT希望通過頒布統(tǒng)一的血清盤，采用APTM作為血清盤標(biāo)定值，同時執(zhí)行分階段遞進的實驗方案，實現(xiàn)TSH檢測結(jié)果的一致性。邁瑞公司參與C-STFT一致性研究計劃的流程包括3個階段。第一階段：測試C-STFT第一部分血清盤(健康者標(biāo)本)，上報檢測結(jié)果后，C-STFT結(jié)合參與研究的各廠家系統(tǒng)檢測結(jié)果，對檢測結(jié)果可靠性和一致性進行評估。第二階段：結(jié)合第一部分血清盤檢測結(jié)果，修正主校準(zhǔn)曲線，檢測C-STFT第二部分血清盤(全范圍標(biāo)本)，上報檢測結(jié)果后，C-STFT結(jié)合參與研究的各廠家系統(tǒng)檢測結(jié)果，對系統(tǒng)修正后的檢測結(jié)果一致性進行再評估。第三階段：在第一階段和第二階段檢測結(jié)果通過的情況下，檢測第三部分血清盤(患者標(biāo)本)，C-STFT結(jié)合參與研究的各廠家系統(tǒng)檢測結(jié)果，評估TSH測試結(jié)果一致性程度，證實概念的可行性。第四階段，檢測C-STFT在北美收集的120例表觀正常者標(biāo)本，對參考范圍進行研究。C-STFT如果對各廠家參考范圍比對結(jié)果滿意，有望在2018年實現(xiàn)全球范圍TSH檢測系統(tǒng)一致性。大分子蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性使檢測結(jié)果很難實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，而由于生產(chǎn)廠家普遍采用的國際標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品往往存在基質(zhì)效應(yīng)、分析物差異等問題，使得檢測結(jié)果的一致性很難達(dá)到預(yù)期水平。C-STFT推出包含健康者標(biāo)本和病理標(biāo)本的全范圍真實臨床血清盤[8]，作為溯源鏈中的一個等級，解決了標(biāo)準(zhǔn)品的“人造性”；同時采用APTM作為血清盤的定值，既建立了統(tǒng)一的溯源標(biāo)準(zhǔn)，又直接保證了各生產(chǎn)廠家檢測系統(tǒng)對臨床標(biāo)本檢測結(jié)果的可比性。分階段遞進實驗方案(Step-Up approach)的貫徹，進一步加強了一致性結(jié)果的可靠性[2]。當(dāng)然，檢測結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化/一致性實驗計劃的成功執(zhí)行，離不開權(quán)威機構(gòu)，如IFCC的支持和推進，也離不開各主要生產(chǎn)廠家的支持與合作。這些都是可供國內(nèi)相關(guān)機構(gòu)和體外診斷系統(tǒng)生產(chǎn)廠家借鑒的寶貴經(jīng)驗。

目前，邁瑞公司檢測系統(tǒng)已順利通過IFCC首期標(biāo)本檢測結(jié)果一致性要求，為進入下一步C-STFT全范圍臨床標(biāo)本檢測奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻

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Serial research of traceability and harmonization of thyroid-stimulating hormone detection approved by IFCC

YuXiang,ChenWenfei#,YuXiaoliu,JiangMing,LiKe,YuZhiguang△

(ShenzhenMindrayBio-MedicalElectronicsCO.,LTD,Shenzhen,Guangdong518057,China)

Abstract:ObjectiveTo implement the harmonization of thyroid-stimulating hormone(TSH) of Mindray assay system by participating in harmonization research program of International Federation of Clinical Chemistry(IFCC)-Standardization of Thyroid Function Tests(C-STFT).MethodsA total of three combinations of TSH reagents and calibrators were used to measure 20 serum samples of healthy human.Within-run precision and batch-to-batch variation were assessed.The concept of harmonization was demonstrated by comparing our test results with All Procedure Trimmed Mean(APTM) provided by IFCC and recalibrating with Mater Calibrators.ResultsThe within-run precision was 1.96%,batch-to-batch variation was 0.47%-1.15%,depending on the level of TSH analyte.There existed a positive bias compared to APTM values.After recalibration with Mater Calibrators and Passing & Bablok regression,the slope of method comparison was 1.0,and correlation coefficient was more than 0.975.ConclusionBy using a panel of real human specimen and recalibration based on APTM,the test results of Mindray assay system could be harmonized with mainstream manufacturers globally.

Key words:thyroid-stimulating hormone;chemiluminescent immunoassay;international federation of clinical chemistry-committee of standardization of thyroid functional tests;all procedure trimed mean

(收稿日期：2015-12-16)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.013

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)06-0751-03

#共同第一作者。

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