閻納新　郭云　劉洪德　戴二黑　張巍　楊莉

050021　河北省石家莊市第五醫(yī)院

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·論著·

烏丹降脂膠囊對(duì)SD大鼠非酒精性脂肪肝體內(nèi)FGF-21和TNF-α的調(diào)節(jié)作用

閻納新郭云劉洪德戴二黑張巍楊莉

050021河北省石家莊市第五醫(yī)院

【摘要】目的探討烏丹降脂膠囊對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝(NASH)模型外周血中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-21(FGF-21)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的調(diào)節(jié)作用。方法40只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、易善復(fù)組、烏丹降脂膠囊組，正常對(duì)照組以基礎(chǔ)飼料喂飼，其他3組連續(xù)16周通過(guò)高脂飼料喂飼，建立非酒精性脂肪肝病模型，同時(shí)正常對(duì)照組、模型組，以0.9%氯化鈉溶液10 ml·kg(-1)·d(-1)灌胃；易善復(fù)組以易善復(fù)溶液灌胃10 ml·kg(-1)·d(-1)；烏丹降脂膠囊組以烏丹降脂膠囊灌胃10 ml·kg(-1)·d(-1)；連續(xù)灌胃14周后，檢測(cè)血清生化指標(biāo)[谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、超敏C-反應(yīng)蛋白(CRP)]及FGF-21、胰島素、TNF-α的含量。結(jié)果與模型組相比，烏丹降脂膠囊組及易復(fù)善組FGF-21、胰島素、TNF-α的含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，血液生化ALT、AST、CHOL、TG、LDL-C、CRP各指標(biāo)水平明顯下降，HDL-C水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論烏丹降脂膠囊可能通過(guò)抑制FGF-21和TNF-α的生成，抑制脂肪合成及減輕肝臟的炎癥，這可能是烏丹降脂膠囊治療非酒精性脂肪肝的機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】烏丹降脂膠囊；非酒精性脂肪肝；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-21；腫瘤壞死因子-α

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liverdisease NAFLD)是一組無(wú)過(guò)量飲酒史，肝組織學(xué)改變與酒精性肝病相類似，以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征[1]。目前隨經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，NAFLD的患病率迅猛增高，現(xiàn)已成為危害人類健康的三大肝病之一，烏丹降脂膠囊(冀藥制字Z20051051)是石家莊市第五醫(yī)院自行研制的用于脂肪肝的治療藥物，經(jīng)多年臨床觀察療效顯著。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alph，TNF-α)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(fibmblast growth factor 21，F(xiàn)GF-21)是近年發(fā)現(xiàn)與脂肪肝密切相關(guān)的脂肪細(xì)胞因子，本研究通過(guò)大鼠非酒精性脂肪肝模型研究烏丹降脂膠囊在非酒精性脂肪肝形成中對(duì)FGF-21及TNF-α的調(diào)節(jié)作用，探討其治療脂肪肝的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠40只，雄性，無(wú)特定病原體級(jí)(SPF)，體重(200±20)g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2飼料與藥物基礎(chǔ)飼料：由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工生產(chǎn)；高脂飼料配方：膽固醇2%,豬油10%,基礎(chǔ)飼料88%；烏丹降脂膠囊：石家莊市第五醫(yī)院臨床治療脂肪肝的經(jīng)驗(yàn)方，由石家莊市第五醫(yī)院制劑室提供，冀藥制字：Z20051051；易善復(fù)由賽諾菲安萬(wàn)特公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：HZ20109010。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑及主要儀器檢測(cè)血清胰島素(Insulin)、TNF-α和FGF-21的ELISA試劑盒由R&D公司生產(chǎn)，主要檢測(cè)儀器為芬蘭Thermo公司產(chǎn)MK3型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，檢測(cè)生化指標(biāo)所采用儀器為美國(guó)雅培C8000全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑購(gòu)自日本積水株式會(huì)社，總膽固醇(CHOL)，三酰甘油(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-C)，超敏C-反應(yīng)蛋白(CRP)試劑購(gòu)于日本協(xié)和醫(yī)藥。

1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模方法及標(biāo)本留取40只SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型組、易善復(fù)組和烏丹降脂膠囊組。正常對(duì)照組以基礎(chǔ)飼料喂食，而模型組、易善復(fù)組和烏丹降脂膠囊組則以高脂飼料喂飼，連續(xù)喂養(yǎng)2周后，正常對(duì)照組、模型組以0.9%氯化鈉溶液10 ml·kg-1·d-1灌胃；易善復(fù)組以易善復(fù)溶液(將易善復(fù)用雙蒸水配制成8.523 g/L的溶液)10 ml·kg-1·d-1灌胃；烏丹降脂膠囊組以烏丹降脂膠囊溶液(將烏丹降脂膠囊用雙蒸水配置成41.667 g/L的溶液)10 ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)灌胃14周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，3%戊巴比妥鈉(0.15 ml/100 g)腹腔注射麻醉，無(wú)菌采集外周靜脈血，凝固后2 000 r/min離心10 min，分離血清備用。

1.5生化指標(biāo)檢測(cè)將4組大鼠的血清標(biāo)本采用美國(guó)雅培C8000全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中ALT、AST、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C、CRP的含量。

1.6血清Insulin、TNF-α和FGF-21的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定血清中Insulin、TNF-α和FGF-21的含量，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。

2結(jié)果

2.14組大鼠血清生化指標(biāo)比較與正常對(duì)照組相比，模型組ALT、AST、CHOL、TG、LDL-C、CRP各指標(biāo)水平明顯升高，HDL-C水平下降，易善復(fù)組與烏丹降脂膠囊組LDL-C明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，易善復(fù)組與烏丹降脂膠囊組ALT、AST、CHOL、TG、LDL-C各指標(biāo)水平明顯下降，HDL-C水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與易善復(fù)組相比，烏丹降脂膠囊組LDL-C水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1，圖1。

表14組大鼠血清生化指標(biāo)比較

組別ALTASTCHOLTGHDL-CLDL-C正常對(duì)照組41.27±3.51242.80±23.421.44±0.180.352±0.100.79±0.070.24±0.09模型組95.2±56.62*361.01±172.58*2.12±0.29*0.51±0.14*0.76±0.14*0.99±0.37*易善復(fù)組43.20±10.39#243.33±31.40#1.63±0.33#0.37±0.06#0.79±0.08#0.73±0.28*#烏丹降脂膠囊組42.87±9.25#242.93±35.32#1.50±0.29#0.36±0.04#0.80±0.14#0.50±0.15*#△

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與易善復(fù)組比較，△P<0.05

圖1　4組大鼠血清生化指標(biāo)的結(jié)果

2.24組大鼠血清細(xì)胞因子相關(guān)指標(biāo)結(jié)果與正常對(duì)照組相比，模型組FGF-21、TNF-α、Insulin、CRP各指標(biāo)水平明顯升高，易善復(fù)組與烏丹降脂膠囊組CRP明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，易善復(fù)組與烏丹降脂膠囊組FGF-21、FINS、CRP各指標(biāo)水平明顯下降，烏丹降脂膠囊組TNF-α明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與易善復(fù)組相比，烏丹降脂膠囊組TNF-α、CRP 明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2，圖2。

表2　4組大鼠血清細(xì)胞因子相關(guān)指標(biāo)比較　±s

注：與正常對(duì)照組比較,*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與易善復(fù)組比較，△P<0.05

圖2　4組大鼠血清細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果

3討論

近年對(duì)NAFLD發(fā)病機(jī)制的研究中Day等[2]提出的“二次打擊”學(xué)說(shuō)是目前被學(xué)界廣泛接受的假說(shuō)，第一次打擊主要是指各種原因?qū)е碌母渭?xì)胞內(nèi)TG沉積，其中最主要的原因是胰島素抵抗(Insulin resistance，IR)，第二次打擊是指各種原因?qū)е碌难装Y和纖維化的形成，其中最主要的原因是氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過(guò)氧化。近年研究顯示脂肪細(xì)胞因子FGF-21，主要表達(dá)在肝臟、胰腺、肌肉及脂肪細(xì)胞等高代謝狀態(tài)的組織中[3-6]，它是一種類胰島素的細(xì)胞因子，主要功能是可以增加胰島素的敏感性、降低胰島素抵抗、減輕脂肪變性、增加能量消耗。周婷婷等[7]通過(guò)在臨床上實(shí)驗(yàn)研究表明非酒精性脂肪肝患者和脂肪肝合并糖尿病患者FGF-21水平均顯著高于正常對(duì)照組，也有報(bào)道稱敲出FGF-21基因小鼠出現(xiàn)了脂肪肝，由此顯示FGF-21可作為脂肪肝治療的一個(gè)新的生物標(biāo)記物和指示指標(biāo)[8]。亦有研究顯示刻意使健康機(jī)體發(fā)生高胰島素血癥的同時(shí)可伴有FGF-21的升高[9]。本研究結(jié)果顯示模型對(duì)照組血清中胰島素、FGF-21含量均明顯增高，而易善復(fù)組與烏丹降脂膠囊組與模型對(duì)照組相比則明顯降低，甚至有低于正常對(duì)照組的趨勢(shì)，可見(jiàn)烏丹降脂膠囊可以有效減少胰島素和FGF-21的產(chǎn)生。在烏丹降脂膠囊的構(gòu)成成分中，生山楂、草決明、丹參、澤瀉、黃芪等均是現(xiàn)代藥理證明具有降脂作用的中藥，而在本研究中顯示模型對(duì)照組的CHOL、TG、LDL-C明顯升高，HDL-C明顯降低，而烏丹降脂膠囊組與模型對(duì)照組相比CHOL、TG、LDL-C明顯降低，HDL-C明顯升高，達(dá)到正常對(duì)照組水平，甚至LDL-C低于正常對(duì)照組，由此可見(jiàn)降低脂肪的合成和儲(chǔ)存是烏丹降脂膠囊治療脂肪肝的機(jī)制之一，即抑制第一次打擊的作用來(lái)抑制脂肪肝的形成。

TNF-α是主要由活化的單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的、能殺傷和抑制腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞因子[10]。在NAFLD的發(fā)病中，TNF-α是參與“二次打擊”的重要炎性因子，同時(shí)還在IR的形成中起著重要作用[11,12]，本研究顯示模型對(duì)照組血清中TNF-α、CRP均比正常對(duì)照組明顯升高，且ALT、AST的含量亦明顯升高，表明所造動(dòng)物模型確實(shí)形成了肝臟的炎癥，形成肝臟損傷，而烏丹降脂膠囊組的TNF-α、CRP比模型對(duì)照組明顯降低，甚至明顯低于易善復(fù)組，AST、ALT則恢復(fù)至正常對(duì)照組水平，表明烏丹降脂膠囊可以抑制TNF-α的產(chǎn)生，使肝臟的炎癥減弱，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，即烏丹降脂膠囊可以降低“第二次打擊”的作用抑制脂肪肝的形成。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，有關(guān)NAFLD的記載早已有之，多屬“肝癖”、“脅痛掣、積聚”等范疇[13]。其病因可由痰濕之體，肝、脾、胃、腎等臟腑失養(yǎng)或虛損，氣血虧虛為內(nèi)因，以及過(guò)食肥甘、膏粱、感受濕毒或情志失調(diào)等外因而致本病[14,15]。但是中藥復(fù)方由于具有多靶點(diǎn)作用機(jī)制，且不良反應(yīng)少，近年日益受到人們的關(guān)注。烏丹降脂膠囊的生山楂可消食導(dǎo)滯，化痰消積，陳皮可以健脾燥濕化痰，半夏可以燥濕化痰，消痞散結(jié)，丹參可活血祛瘀的作用，從中醫(yī)的角度來(lái)看具有健脾化痰、活血化瘀的功效，有利于脂肪肝的治療，而本研究進(jìn)一步證實(shí)烏丹降脂膠囊對(duì)NAFLD形成的兩次打擊的階段均有一定的抑制作用，可見(jiàn)其作用是多靶點(diǎn)的，甚至在改善肝臟炎癥方面優(yōu)于易善復(fù)，但是它的價(jià)錢(qián)明顯低于易善復(fù)，所以是值得推廣的一種用于治療非酒精性脂肪肝的復(fù)方中藥。

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(收稿日期：2015-10-27)

【中圖分類號(hào)】R 575

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-7386(2016)06-0918-03

通訊作者：楊莉，050021河北省石家莊市第五醫(yī)院；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.06.041

項(xiàng)目來(lái)源：河北省中醫(yī)藥管理局科學(xué)技術(shù)研究計(jì)劃基金項(xiàng)目(編號(hào)：2012166);河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：14277753D)

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