郭文川 ，楊 杰 ，侯茹平 ，雷凱鵬 ，杜歡歡 ，孟怡璠 ，江 海 ，2，3

（1.陜西理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，陜西漢中 723000；2.陜西省資源生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西漢中 723000；3.陜南秦巴山區(qū)生物資源綜合開(kāi)發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西漢中 723000）

獼猴桃（Actinidia chinensis Planch.），也稱(chēng)奇異果、狐貍桃、藤梨、陽(yáng)桃、木子、毛木果、麻藤果、楊湯梨等，果形一般為橢圓狀，果實(shí)內(nèi)是呈亮綠色的果肉和一排黑色或者紅色的種子，因獼猴喜食，故名獼猴桃，亦有說(shuō)法是因?yàn)楣じ裁?，貌似獼猴而得名，是一種品質(zhì)鮮嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，風(fēng)味鮮美的水果。獼猴桃的質(zhì)地柔軟，口感酸甜。尤其是維生素C的含量極高，因而在世界上有“水果之王”的美譽(yù)[1-2]。

維生素C（Vitamin C）又叫 L-抗壞血酸，是一種水溶性維生素，廣泛存在于新鮮水果中。維生素C具有保持肌膚潤(rùn)滑、防止衰老、抗壞血酸等作用，是人體必需的主要維生素之一，廣泛參與機(jī)體氧化、還原等復(fù)雜代謝過(guò)程，還能促進(jìn)體內(nèi)膠原蛋白和粘多糖的合成，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力[3-5]。

獼猴桃中維生素C的含量是獼猴桃品質(zhì)分析評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)，也是獼猴桃主要營(yíng)養(yǎng)成分之一。準(zhǔn)確測(cè)定獼猴桃中維生素C的含量可指導(dǎo)獼猴桃品質(zhì)分析、種植、生產(chǎn)、育種和精深加工。

維生素C的測(cè)定方法一般有化學(xué)法、比色法、紫外分光光度法、熒光法等，這些方法都存在所需試劑較多、操作繁瑣等不足[6-9]。高效液相色譜法是目前發(fā)展較為迅速的一種方法，具有選擇性好、靈敏度高的特點(diǎn)。本次試驗(yàn)采用高效液相色譜建立了一種測(cè)定獼猴桃中維生素C含量的方法，為獼猴桃的品質(zhì)分析、生產(chǎn)、加工提供實(shí)驗(yàn)分析手段。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

市售獼猴桃；維生素C，純度為99.8%（購(gòu)自天津一方科技有限公司）；分析純乙醇、甲醇、磷酸（天津市登峰化學(xué)試劑廠），色譜純甲醇（Burdick&Jackson）；實(shí)驗(yàn)室自制超純水。

1.2 主要儀器設(shè)備

榨汁機(jī) BM252C（美的家電有限公司）；萬(wàn)分之一電子天平SHI-MADZU AUY220；超聲波清洗機(jī)KQ100-DA（昆山市超聲儀器有限公司）；低速臺(tái)式離心機(jī)TD24（長(zhǎng)沙湘儀器有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱101-3A（滬南電爐烘箱廠）；高效液相色譜儀LC2000（上海天美儀器有限公司）；Milli-Q Academic超純水機(jī)（美國(guó)密理博）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件色譜柱為Diamonsil（鉆石）C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng) 245 nm；以甲醇∶0.5%磷酸=5∶95（V/V）為流動(dòng)相，等梯度洗脫；流速為1 mL/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量10 μL。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取11.80 mg維生素C標(biāo)準(zhǔn)品，用純水溶解，定容至25 mL棕色容量瓶中，制得472 μg/mL維生素C的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照母液。

1.3.3 供試樣品溶液制備 取新鮮市售獼猴桃剝皮于勻漿機(jī)中勻漿，取3.0 g勻漿樣品，加超純水25 mL，超聲震蕩20 min后定容于50 mL棕色容量瓶中，離心后取上清液過(guò)0.25 μm微孔濾膜，得待測(cè)供試樣品溶液。

同時(shí)取勻漿獼猴桃樣品10.0 g于烘箱中烘干至恒重，計(jì)算獼猴桃含水率，折算獼猴桃干物質(zhì)中維生素C的含量。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 分別取維生素C的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照母液 0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL，用純水定溶于 10 mL容量瓶中，得到標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 4.72，9.44，18.88，28.32，37.76 μg/mL。在液相色譜設(shè)定條件下分別進(jìn)樣10 μL，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。

1.3.5 供試樣品的測(cè)定 按照供試樣品處理方法平行制備樣品5份，在色譜條件下，測(cè)定供試樣品獼猴桃中維生素C的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 線(xiàn)性范圍考察 按照試驗(yàn)方法中的色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為：y=2780.1799x+146.4，r=0.999856，結(jié)果表明，進(jìn)樣量在 47.2～377.6 ng范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量線(xiàn)性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見(jiàn)圖1。

2.1.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試樣品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定維生素C峰面積，結(jié)果分別為55426、54280、52359、52153、54361，RSD 為 2.62%（n=5）。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%，表明精密度良好。

2.1.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將制備的樣品用棕色容量瓶保存于 4 ℃冰箱中，分別在 1，2，4，8，12 h精密吸取溶液10 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，測(cè)得結(jié)果分別為54653、54106、53829、53687、52989，RSD 為1.13%（n=5）。供試溶液中的維生素C峰面積隨時(shí)間延長(zhǎng)有下降趨勢(shì)，這與維生素C在空氣中易分解氧化有關(guān)，但在12 h內(nèi)穩(wěn)定性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%。

2.1.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一材料，按制備方法平行制備5份供試溶液，依液相色譜設(shè)定條件測(cè)定維生素C的峰面積，測(cè)得結(jié)果分別為53270、54241、52796、53984、55203，計(jì)算得 RSD 值為1.72%（n=5）。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%，表明重復(fù)性良好。

2.1.5 回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收實(shí)驗(yàn)。按維生素C分析供試樣品溶液制備方法，取同一已測(cè)定的維生素C獼猴桃樣品，加入維生素C標(biāo)準(zhǔn)品240.00 μg，測(cè)定其加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 獼猴桃中維生素C回收率測(cè)定結(jié)果

2.2 維生素C測(cè)定結(jié)果

按照實(shí)驗(yàn)條件，上機(jī)檢測(cè)其中維生素C含量，平行測(cè)定5次，最后測(cè)得新鮮市售獼猴桃勻漿汁液100 g含維生素C 97.35±3.35 mg，獼猴桃樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

稱(chēng)取10.1570 g獼猴桃勻漿，60℃烘干至恒重，質(zhì)量為1.6590 g，獼猴桃含水量為83.7%。由此計(jì)算出獼猴桃干物質(zhì)中100 g維生素C含量為597.23±20.55 mg。

3 結(jié)論與討論

維生素C具有多種生理功能，是維持機(jī)體正常生理功能的重要維生素之一，廣泛參與機(jī)體氧化、還原等復(fù)雜代謝過(guò)程，促進(jìn)機(jī)體內(nèi)膠原蛋白和粘多糖的合成，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力[10]，如保持含硫基的物質(zhì)的還原型，參與造血、促進(jìn)膠原蛋白的合成，解毒作用，參與體內(nèi)兒茶酚胺生成，幫助膽固醇轉(zhuǎn)化為皮質(zhì)激素的作用等等[5，11]。維生素C廣泛存在于植物組織中，不同植物中維生素C含量各不相同，但獼猴桃是所有蔬菜水果中維生素C含量最高的水果。

本次實(shí)驗(yàn)所用的獼猴桃為非當(dāng)季的市售獼猴桃，測(cè)得的鮮果汁中100 g維生素C含量為97.35±3.35 mg，較趙昕梅等[8]、董珊等[9]報(bào)道的獼猴桃中維生素C總體含量略低，但在正常范圍之內(nèi)。主要原因可能是實(shí)驗(yàn)的時(shí)間是5、6月份，不是獼猴桃成熟季節(jié)，獼猴桃中的維生素C會(huì)隨儲(chǔ)藏時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低。另外，通過(guò)實(shí)驗(yàn)計(jì)算獼猴桃干物質(zhì)中維生素C含量，表明獼猴桃干品中維生素C含量會(huì)更高，后續(xù)可以考慮以獼猴桃為原料，生產(chǎn)獼猴桃果干，使其成為一種補(bǔ)充維生素C的有益水果加工品。

維生素C見(jiàn)光易分解，在穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中其峰面積也有隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減小的趨勢(shì)。因此，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)盡量避光，采用棕色玻璃儀器可有效避免見(jiàn)光分解。同時(shí)，分析實(shí)驗(yàn)需在短時(shí)間內(nèi)完成（12 h內(nèi)）。維生素C同樣具有熱不穩(wěn)定性，因此，實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品最好存放在4℃冰箱中，以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)一性。

參考文獻(xiàn)：

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