代洪波，李 琰，林 艷，江 勇，岳豐雄，徐宏軍

(1.成都天邦生物制品有限公司，四川 成都625014；2.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川 成都610066)

豬藍耳病疫苗現(xiàn)狀及其免疫效果評價方法

代洪波1，李 琰2，林 艷1，江 勇1，岳豐雄1，徐宏軍1

(1.成都天邦生物制品有限公司，四川 成都625014；2.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川 成都610066)

1 豬藍耳病介紹

豬藍耳?。ㄓ址Q豬繁殖與呼吸綜合征）是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病之一，曾經(jīng)給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失，近年來該病的死亡率有所降低，但危害并未隨之下降。目前感染豬藍耳病的豬只主要表現(xiàn)為母豬產(chǎn)后炎癥、少乳、高返情率等癥狀，被感染仔豬通常具有母源抗體保護，發(fā)病死亡率較低，生長豬主要表現(xiàn)為育肥期呼吸道癥狀嚴重[1]。此外，豬藍耳病的免疫抑制危害不容忽視，主要表現(xiàn)為影響豬瘟、豬偽狂犬等疫苗的免疫效果，豬瘟與豬偽狂犬疫苗的免疫效果不理想，將導(dǎo)致整個豬群處于不穩(wěn)定狀態(tài)，甚至導(dǎo)致豬瘟、豬偽狂犬病的感染風(fēng)險加劇[2]。這些間接損失容易被養(yǎng)殖場忽視，但是其危害是巨大的。

我國對豬藍耳病疫苗的使用一直飽受爭議，大多數(shù)養(yǎng)殖企業(yè)感染率高，但是否使用疫苗免疫，選用什么疫苗免疫，常常陷入糾結(jié)。使用疫苗的部分用戶，由于對豬藍耳病疫苗的認識不夠充分，往往存在不少的誤區(qū)，例如：1）在使用劑量上比照豬瘟疫苗，一次免疫4頭份/頭，一年免疫3～5次；2）頻繁地更換疫苗毒株等問題[3]。以下就我國現(xiàn)有豬藍耳病疫苗毒株的現(xiàn)狀以及對豬藍耳病疫苗的效果評價方法等作一簡要分析。

2 豬藍耳病疫苗現(xiàn)狀

目前我國用于豬藍耳病防治的疫苗眾多，分為滅活疫苗與弱毒活疫苗兩大類。目前用于該病防控以使用弱毒活疫苗為主，然而活疫苗又分為變異毒株（高致病力）弱毒活疫苗與經(jīng)典株弱毒活疫苗兩種。經(jīng)典株豬藍耳病弱毒活疫苗包括我國分離致弱的CH-1R毒株、美國VR-2332毒株、以及R98毒株；變異毒株主要包括JXA1-R毒株、TJM-F92毒 株、HuN4-F112毒株。正是由于我國豬蘭耳病疫苗毒株多樣性，給養(yǎng)殖企業(yè)選擇豬藍耳病疫苗造成了極大的困惑，目前關(guān)注的焦點集中在經(jīng)典毒株與變異毒株之間是否具有交叉保護，變異毒株是否安全，變異毒株能否用于緊急接種等問題，養(yǎng)殖戶急切希望能夠?qū)Σ煌局赀M行相應(yīng)的排名以區(qū)分優(yōu)劣，甚至部分企業(yè)開始對自己養(yǎng)殖場內(nèi)的豬藍耳病病毒進行測序分析，期望能夠找到與自身豬場最貼近的疫苗毒株。筆者就目前我國主要的疫苗毒株進行基因序列分析，對比不同毒株之間的主要差異。通過NCBI數(shù)據(jù)庫查詢我國疫苗毒株信息發(fā)現(xiàn)，高致病力江西株提交了原始毒株全基因序列與致弱不同代次的疫苗毒株基因序列信息，湖南株與天津株僅提交了原始毒株的全基因序列；經(jīng)典毒株僅能查到CH-1R與VR-2332毒株的全基因信息?，F(xiàn)就三個變異毒株的原始基因序列信息與兩個經(jīng)典毒株的基因序列信息進行分析，結(jié)果見表1。

從表1可以看出：3個變異毒株的彼此全基因同源性均為99.6%，僅存在部分點突變，未見明顯的區(qū)域性變異；CH-1R與變異株全基因同源性為95.2%左右；VR-2332與變異株全基因同源性為89.7%左右。針對變異集中的NSP2基因與GP5基因進行分析發(fā)現(xiàn)：三個變異株的NSP2基因同源性為99.5%左右，CH-1R與變異株之間同源性為92.6%左右，VR-2332與變異株同源性為83.6%左右。三個變異株的GP5基因同源性為99.8%左右，CH-1R與變異株GP5同源性為94.7%左右，VR-2332與變異株同源性為89.4%左右。

豬藍耳病病毒為單鏈RNA病毒，病毒本身容易產(chǎn)生變異，就豬藍耳病病毒而言，經(jīng)典毒株與變異毒株之間存在較大的差異，主要體現(xiàn)在NSP2基因的區(qū)域性缺失，改變了豬藍耳病病毒聚合酶的活性；以及GP5基因上有5%左右的變異。而三個變異毒株的原始毒株之間，無論是全基因序列還是NSP2基因與GP5基因上的變異均小于0.5%，因此，期望通過基因序列分析尋找與自己養(yǎng)殖場內(nèi)最貼近的疫苗毒株是不現(xiàn)實的。此外，就疫苗毒株在致弱過程中是否產(chǎn)生了明顯的基因突變的問題，筆者分析了江西株致弱過程中不同代次的基因同源性分析，分析結(jié)果見表2。

從表2可以看出，第10代毒與致弱到170代弱毒的全基因序列同源性為99.6%，從10代到70代的變異僅為0.03%，70代到100代的變異僅為0.01%，80代到170代僅變異0.02%。通過以上數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在疫苗毒株致弱過程中主要改變了病毒的生物學(xué)特性，但并未對基因造成明顯的改變，特別是對病毒蛋白序列的改變微乎其微。用于JXA1-R株疫苗生產(chǎn)的82代至95代，變異小于0.01%。用于活疫苗生產(chǎn)的毒株對其遺傳穩(wěn)定性是有較高要求的，必須保證在使用代次內(nèi)的遺傳性狀相對穩(wěn)定，因此只要嚴格控制疫苗毒株的生產(chǎn)代次，根本不用擔(dān)心疫苗毒株本身的基因變異，要明白對現(xiàn)有疫苗毒株進行排名是不切實際的。

在豬藍耳病疫苗的選擇過程中，我們首先明確的是變異毒株與經(jīng)典毒株在抗原性與生物學(xué)活性上都存在一定的差異，但經(jīng)典毒株與變異毒株之間仍然存在較好的交叉保護效果。變異毒株由于其生物學(xué)活性的改變，在接種動物后起效更快[4]，同時從抗原性上也更接近我國目前普遍流行的變異毒株。然而3個變異毒株之間的差異，目前尚難以區(qū)分伯仲，只能從產(chǎn)品生產(chǎn)工藝以及質(zhì)量控制等要素進行篩選。

表1 不同疫苗毒株基因同源性分析結(jié)果

表2 江西株不同致弱代次全基因同源性分析

3 豬藍耳病疫苗效果評價方法

選擇豬藍耳病疫苗時不得不提到疫苗免疫效果評估，豬藍耳病疫苗免疫效果評價不像豬瘟疫苗那樣簡便，豬瘟疫苗可以通過抗體檢測直接評價疫苗免疫效果。常用的豬藍耳病抗體ELISA檢測方法，難以對疫苗的免疫保護效果做出準確評估，體液免疫中僅中和抗體能用于免疫保護效果評價，但是中和抗體的檢測費時費力。筆者通過多次試驗證明豬藍耳病ELISA檢測抗體水平的高低與攻毒保護之間無明顯的正相關(guān)關(guān)系，無論是IDEXX的抗體檢測試劑盒還是LSI的豬藍耳病抗體檢測試劑盒，即使兩項抗體檢測均為陽性的豬群，攻毒后仍然會出現(xiàn)發(fā)病甚至死亡；相反通過CH-1R株免疫后，無法通過這兩種試劑盒檢測到抗體的豬群，進行攻毒試驗后，仍然可以提供有效保護。因此，我們在臨床上并未將豬藍耳病ELISA抗體檢測作為是否提供有效保護的依據(jù)，而是通過ELISA抗體水平對豬群的感染狀況進行評估，進行豬藍耳病疫苗免疫前的評估。在免疫豬群中可以通過抗體水平的離散度，抗體值的高低等間接評價疫苗的免疫效果。

目前在豬藍耳病活疫苗研制新獸藥注冊過程中，效力檢驗的主要方法是通過免疫攻毒效力檢驗試驗評估，將待檢疫苗免疫健康易感豬群后一段時間，以檢驗用強毒進行攻毒保護試驗，對照組應(yīng)5/5發(fā)病，并有2/5以上死亡，試驗成立，疫苗免疫豬群應(yīng)4/5以上保護。發(fā)病試驗豬的判定要求為：1）至少3 d體溫在41 ℃以上；或出現(xiàn)精神委靡、食欲下降，眼結(jié)膜炎，咳嗽、喘等呼吸道癥狀；2）剖檢肺部出現(xiàn)片狀實變。符合以上2條即可判定為發(fā)病。豬藍耳病活疫苗的每頭份疫苗的病毒含量與免疫攻毒保護之間為正相關(guān)關(guān)系，因此疫苗攻毒效力檢驗評價方法的替代方法為病毒含量測定。然而無論是病毒含量測定，還是免疫攻毒保護試驗，都不太適用于豬藍耳病疫苗臨床使用效果評估。目前大型養(yǎng)殖企業(yè)可以通過公司的技術(shù)部門完成病毒含量測定，來評定不同生產(chǎn)廠家豬藍耳病活疫苗的質(zhì)量以及產(chǎn)品穩(wěn)定性，但是我國廣泛存在的中小規(guī)模養(yǎng)殖企業(yè)無法進行相應(yīng)評估，豬藍耳病疫苗的實際使用效果難以評價就成為事實，同時也為豬藍耳病活疫苗的推廣增加了難度。豬群免疫以后豬藍耳病ELISA抗體水平的高低與攻毒保護之間無明顯的正相關(guān)，同時感染豬群也可能存在高水平的抗體，我們急需更為直觀，更為客觀的豬藍耳病活疫苗使用效果評價體系。當(dāng)建立起切實可行的豬藍耳病活疫苗臨床使用免疫效果評價體系后，將會進一步規(guī)范豬藍耳病活疫苗的臨床使用。

目前，針對豬藍耳病陰性豬場，專家都建議做好生物安全，不使用豬藍耳病疫苗。針對豬藍耳病感染的穩(wěn)定豬場，需要針對豬藍耳病引起的實際問題進行免疫效果評估。如果豬場表現(xiàn)為豬藍耳病感染后使豬瘟、豬偽狂犬病等其他疫苗的免疫效果不佳，此時加入豬藍耳病疫苗免疫，通過對其他疫苗免疫效果的改善，來評價豬藍耳病疫苗的實際使用效果，此方法較為可行。針對豬藍耳病感染的不穩(wěn)定豬場，首先關(guān)注豬藍耳病導(dǎo)致豬場不穩(wěn)定的主要體現(xiàn)，是表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、返情，還是表現(xiàn)為育肥豬呼吸道癥狀等。通過使用豬藍耳病疫苗免疫一段時間后，針對性驗收相應(yīng)癥狀是否得到改善，以此來判定豬藍耳病疫苗的免疫效果。

豬藍耳病在豬群的持續(xù)存在，勢必會對豬群的生產(chǎn)成績造成一定的影響，豬場如果診斷出存在豬藍耳病感染，需要對生產(chǎn)數(shù)據(jù)進行分析，尋找豬藍耳病對豬群生產(chǎn)成績的影響，找到評價豬藍耳病疫苗免疫效果的評價標準，再使用豬藍耳病疫苗免疫來解決生產(chǎn)中實際存在的問題，是現(xiàn)行豬藍耳病疫苗在中小規(guī)模豬場使用的有效評價方式。一旦豬群藍耳病疫苗使用產(chǎn)生效果，需要繼續(xù)使用該疫苗以維持豬群健康，我國想在短期內(nèi)實現(xiàn)該病的凈化是有一定困難的，因此我們只能通過目前可行的方式來為我國的養(yǎng)豬生產(chǎn)保駕護航。

[1] 李少麗，李艷麗，王斌卿，等. 豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的應(yīng)用[J]. 今日養(yǎng)豬業(yè)，2016(4)：72-73.

[2] 敬曉棋，孟建斌，高曉陽，等. 豬繁殖與呼吸綜合征免疫抑制研究進展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展，2012，33(10)：75-78.

[3] 趙明禮. 豬藍耳病活疫苗的使用誤區(qū)及正確方法[J]. 豬業(yè)科學(xué)，2016，33(4)：139.

[4] 戴火林，華威，畢淑珍. 豬藍耳病滅活苗與弱毒苗免疫效價試驗[J]. 中國畜禽種業(yè)，2014(11)：87-88.

2016-10-19）

代洪波（1988-），男（漢），四川德陽人，碩士研究生，從事動物傳染病病原分子生物學(xué)研究