孫文霞， 田　媛， 卞其龍， 程　強(qiáng)

(成都大學(xué) 四川抗菌素工業(yè)研究所， 四川 成都　610052)

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注射用頭孢他美鈉在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布

孫文霞， 田媛， 卞其龍， 程強(qiáng)

(成都大學(xué) 四川抗菌素工業(yè)研究所， 四川 成都610052)

摘要：為了研究注射用頭孢他美鈉在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布特點(diǎn)，將180只SD大鼠隨機(jī)分為36組，分別靜脈注射50、100、1 000 mg·kg(-1)頭孢他美鈉，于不同時(shí)間點(diǎn)采血，分離血清；另將36只大鼠隨機(jī)分成3組，分別靜脈注射100 mg·kg(-1)頭孢他美鈉，于不同時(shí)間點(diǎn)取各組織制成勻漿.采用HPLC法測(cè)定血清及各組織中頭孢他美的濃度，用3p97軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).頭孢他美在SD大鼠血清中的藥代動(dòng)力學(xué)特征符合二室模型，低、中、高劑量下的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)：C(max)為(66.70±21.59)、(216.90±43.22)和(1 972.70±125.54)μg·mL(-1)，t(1/2β)為(1.49±0.20)、(1.36±0.20)和(1.27±0.16)h，AUC((0～12))為(139.05±27.93)、(293.01±65.55)和(2 627.32±134.92)μg·h·mL(-1)；靜脈注射頭孢他美鈉1 h時(shí)大鼠組織中頭孢他美濃度最高，此時(shí)頭孢他美在各組織中的濃度從高到低依次為腎、肝、肺、胃、心、骨骼肌、脾、小腸、脂肪、腦、卵巢和睪丸.結(jié)果表明，靜脈注射頭孢他美在大鼠血清和部分組織中濃度較高，無(wú)蓄積.

關(guān)鍵詞：頭孢他美鈉；藥動(dòng)學(xué)；組織分布；HPLC

0引言

頭孢他美酯為半合成第三代口服頭孢菌素，口服后經(jīng)腸壁酯酶作用水解成為有抗菌活性的頭孢他美而發(fā)揮藥效.研究發(fā)現(xiàn)，頭孢他美對(duì)多數(shù)革蘭氏陰性菌及部分革蘭氏陽(yáng)性菌表現(xiàn)出良好的抗菌活性[1-3]，對(duì)β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定，對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株仍有殺菌作用[4-5]，其不良反應(yīng)少，在體內(nèi)無(wú)蓄積，臨床應(yīng)用廣，主要用于治療敏感菌所致的肺炎、急性支氣管炎、咽喉炎、扁桃體炎等感染.頭孢他美鈉是對(duì)頭孢他美酯進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾而改成的注射劑，能夠快速發(fā)揮藥效，而且耐藥性大幅下降，具有較好的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值.本研究利用HPLC-UV方法，測(cè)定大鼠血清中頭孢他美含量及在各組織中的分布，獲得了頭孢他美鈉的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，為臨床合理用藥及進(jìn)一步研究提供了參考依據(jù).

1材料與方法

1.1試藥、儀器與動(dòng)物

1.1.1試藥.

實(shí)驗(yàn)所用的試藥包括：注射用頭孢他美鈉(規(guī)格，2 g，批號(hào)，150101)、頭孢他美鈉對(duì)照品(含量，90.9%)、頭孢唑啉鈉對(duì)照品(含量，95.2%)，四川抗菌素工業(yè)研究所；乙腈(色譜純)，F(xiàn)isher公司；雙蒸水，本實(shí)驗(yàn)室自制；滅菌注射用水，天津藥業(yè)焦作有限公司.

1.1.2儀器.

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括：LC-10A型高效液相色譜儀系統(tǒng)，日本島津公司；N2000色譜工作站，浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司；TGL-16B型臺(tái)式高速離心沉淀器，上海安亭科學(xué)儀器廠；XW-80型旋渦混合器，上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器廠；低溫冰箱，日本索尼公司.

1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物.

實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物為健康合格SD大鼠216只，SPF級(jí)，體重185～225 g，雌雄各半，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供.

1.2方法與結(jié)果

1.2.1色譜條件.

實(shí)驗(yàn)的色譜條件為：Hypersil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm id，5 μm，柱號(hào)E1514928)；流動(dòng)相為乙腈-4 mmol·L-1高氯酸(15∶85，V/V)； 檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm；柱溫35 ℃；流速1 mL·min-1；內(nèi)標(biāo)為頭孢唑啉鈉.

1.2.2溶液的配制.

取30.0 mg頭孢他美鈉對(duì)照品，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，用蒸餾水配制成濃度為3.0 mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液.臨用時(shí)，用蒸餾水稀釋成系列濃度的頭孢他美對(duì)照品工作溶液.精密稱取25.0 mg頭孢唑啉鈉對(duì)照品，置于25 mL容量瓶中，用蒸餾水配制成濃度為1.0 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液.

1.2.3樣品采集.

180只SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為3個(gè)劑量組，每劑量組60只，分12個(gè)采血時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只.實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，各劑量組分別尾靜脈注射50、100、1000 mg·kg-1注射用頭孢他美鈉，于0.083、0.17、0.33、0.66、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h時(shí)分別心臟采血3 mL，離心分離血清，置-20 ℃冰箱保存，待測(cè).

取健康SD大鼠36只，雌雄各半，隨機(jī)均分成3組，每組12只.實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，分別尾靜脈注射100 mg·kg-1頭孢他美鈉，于1.0、2.0、6.0 h時(shí)各取一組大鼠斷髓處死，分別取心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、脂肪、骨骼肌、腦及生殖腺(睪丸或卵巢)，用濾紙吸干水分后稱重.取適量，用生理鹽水清洗后置勻漿器中并加入2 mL生理鹽水勻漿、離心，取上清液，置-20 ℃冰箱保存，待測(cè).

1.2.4樣品預(yù)處理.

取血清或組織勻漿1.0 mL，加入內(nèi)標(biāo)溶液10 μL，漩渦混勻，加入0.5 mol·L-1高氯酸0.4 mL，旋渦沉淀蛋白1 min，15 000 r·min-1離心10 min，血清取上清液進(jìn)樣20 μL，組織勻漿取上清液進(jìn)樣80 μL.

1.2.5專屬性.

在“1.2.1”項(xiàng)色譜條件下，頭孢他美的保留時(shí)間為6.6 min左右，內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間為5.5 min左右，二者能夠分離完全，峰形良好，無(wú)內(nèi)源性物質(zhì)干擾，結(jié)果見圖1.結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)專屬性良好.

1.2.6線性關(guān)系及范圍.

取空白基質(zhì)1.0 mL，加入頭孢他美對(duì)照品工作液10 μL，制成系列濃度的血清及組織勻漿樣品，按“1.2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定.以頭孢他美濃度為Y、頭孢他美與內(nèi)標(biāo)峰面積比為X，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線見表1.結(jié)果顯示，頭孢他美在不同基質(zhì)中的定量限為0.05～0.29 μg·mL-1.

1.2.7精密度與方法回收率.

取空白基質(zhì)1.0 mL，按“1.2.2”項(xiàng)下方法，加入適量頭孢他美對(duì)照品工作液10 μL，制成高、中、低3個(gè)濃度的血清及組織樣品，按“1.2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果見表2.數(shù)據(jù)表明，各基質(zhì)的批內(nèi)和批間精密度RSD均小于13%，本方法回收率在93%～112%之間，符合生物樣本測(cè)定要求.

1：內(nèi)標(biāo),2：頭孢他美

A.空白血清；B.空白血清+頭孢他美+內(nèi)標(biāo)；C.給藥后血清+內(nèi)標(biāo)；D.空白腎組織勻漿；E.空白腎組織勻漿+頭孢他美+內(nèi)標(biāo)；F.給藥后腎組織勻漿+內(nèi)標(biāo)

圖1　血清與組織樣品色譜圖

1.2.8藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).

將大鼠血清藥濃度—時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)3p97程序擬合計(jì)算，得藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(見圖2、表3).結(jié)果顯示，頭孢他美藥代動(dòng)力學(xué)特征符合二室模型.

1.2.9藥物的組織分布.

給大鼠靜脈注射100 mg·kg-1頭孢他美鈉1 h時(shí)，組織中頭孢他美濃度最高，2 h時(shí)次之，6 h最低.1 h時(shí)頭孢他美在各組織中的濃度從高到低依次為腎、肝、肺、胃、心、骨骼肌、脾、小腸、脂肪、腦、睪丸和卵巢(見圖3).

表2　各組織及血清樣品的批內(nèi)、批間精密度和回收率(n=5)

圖2　大鼠靜脈注射不同劑量頭孢他美鈉后的

參 數(shù)劑 量/mg·kg-1501001000Cmax/μg·mL-166.70±21.59216.90±43.221972.70±125.54V/L·kg-10.61±0.380.45±0.100.47±0.03CL/F/L·kg-1·h-10.41±0.080.41±0.100.40±0.02t1/2β/h1.49±0.201.36±0.201.27±0.16AUC(0～12)/μg·h·mL-1139.05±27.93293.01±65.552627.32±134.92AUC(0～∞)/μg·h·mL-1139.28±27.95293.33±65.392629.57±135.19

圖3大鼠靜脈注射100 mg·kg-1頭孢他美鈉后的

組織分布(n=6,x±s)

2討論

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，口服鹽酸頭孢他美酯后，藥物經(jīng)腸道吸收并很快被腸壁的酯酶水解為頭孢他美而顯示出抗菌活性[6]，在體內(nèi)90%的頭孢他美以原形從尿中排出，并于24 h內(nèi)排出完畢，頭孢他美的血清蛋白結(jié)合率為22%[7].

本實(shí)驗(yàn)中，大鼠靜脈注射50 mg·kg-1與100 mg·kg-1的Cmax與劑量不呈線性關(guān)系，這可能與第一個(gè)取血點(diǎn)的操作時(shí)間有關(guān).大鼠靜脈注射50、100、1 000 mg·kg-1注射用頭孢他美鈉，在50、100 mg·kg-1劑量下呈線性關(guān)系，分別相當(dāng)于人體擬用劑量10、20 mg·kg-1.靜脈注射起效較快，血清濃度水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于口服鹽酸頭孢他美酯；大鼠靜脈注射100 mg·kg-1頭孢他美鈉1 h時(shí)，各組織中的濃度從高到低依次為腎、肝、肺、胃、心、骨骼肌、脾、小腸、脂肪、腦、卵巢和睪丸，其中頭孢他美在腎、肝、肺中的濃度較高，與鹽酸頭孢他美酯臨床適應(yīng)癥一致；6 h時(shí)幾乎從組織中完全清除，在組織中無(wú)蓄積.

參考文獻(xiàn)：

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Pharmacokinetics and Tissues Distribution of Cefetamet Sodium for Injection in Rats

SUNWenxia,TIANYuan,BIANQilong,CHENGQiang

(Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu University, Chengdu 610052, China)

Abstract:The paper investigates the pharmacokinetics and tissues distribution of cefetamet sodium for injection in rats,and provides evidence for clinical rational drug use.180 SD rats were randomly divided into 36 groups,and received IV cefetamet sodium at the dose levels of 50,100,1 000 mg·kg(-1),respectively.Their blood was drawn at different time with the serum being isolated.The other 36 SD rats were randomly divided into 3 groups,and were intravenously injected 100 mg·kg(-1) cefetamet sodium respectively and then various tissues were collected at different time,which were further made into homogenate.The concentration of cefetamet in serum and various tissues were analyzed by HPLC method.The pharmacokinetic parameters were calculated by 3p97 software.The results showed that the pharmacokinetic parameters demonstrated in cefetamet in SD rats were consistent with two-compartment model.The main pharmacokinetic parameters of cefetamet at different dose levels(low,medium,high) were listed as follows:C(max)(66.70±21.59),(216.90±43.22) and (1 972.70±125.54) μg·mL(-1), t(1/2β)(1.49±0.20),(1.36±0.20) and (1.27±0.16) h,AUC((0～12))(139.05±27.93),(293.01±65.55) and (2 627.32±134.92) μg·h·mL(-1).After being intravenously injected,the concentration of cefetamet sodium in tissues reached the highest after an hour,which was indicated from high to low successively in kidney,liver，lungs,stomach,heart,skeletal muscle,spleen,intestine,brain,ovary and testicle.A conclusion is drawn that the concentration of cefetamet after IV injection of cefetamet sodium is higher in rat’s serum and partial tissues without accumulation.

Key words:cefetamet sodium;pharmacokinetics;tissues distribution;HPLC

中圖分類號(hào)：R969.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

作者簡(jiǎn)介：孫文霞(1980 — )， 女， 碩士， 助理研究員， 從事藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究.

基金項(xiàng)目：成都大學(xué)校青年基金(2014XQCKS10)資助項(xiàng)目.

收稿日期：2015-11-24.

文章編號(hào)：1004-5422(2016)01-0005-04