邱　麗，苗　溫，白　虹（.天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，天津　300070；.天津市濱海新區(qū)塘沽中心血站，天津　300456）

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O型孕婦產(chǎn)前IgG抗－A（B）抗體效價(jià)變化分析

邱麗1，苗溫2，白虹1
（1.天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，天津300070；2.天津市濱海新區(qū)塘沽中心血站，天津300456）

摘要目的：探討O型孕婦產(chǎn)前IgG抗－A（B）抗體效價(jià)的變化及其拐點(diǎn)的出現(xiàn)時(shí)間。方法：使用經(jīng)典抗球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)2 777 名O型孕婦血清中IgG抗－A（B）抗體效價(jià)，并按妊娠次數(shù)、孕周進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)果：隨著妊娠次數(shù)的增加，血清中IgG抗－A （B）抗體水平也不斷增高，首次妊娠與2次及以上妊娠孕婦血清IgG抗－A（B）抗體效價(jià)相比均存在顯著性差異（P＜0．01）；隨著孕周的增加，血清中IgG抗－A（B）抗體水平在16～19周時(shí)緩慢增高，在妊娠20周時(shí)出現(xiàn)一個(gè)明顯增高的拐點(diǎn)，而后繼續(xù)增高并在孕24～28周時(shí)達(dá)到峰值，隨后不再增長(zhǎng)。結(jié)論：O型孕婦在妊娠20周時(shí)應(yīng)進(jìn)行IgG抗－A（B）抗體效價(jià)檢測(cè)，具有多次妊娠史的O型孕婦，體內(nèi)可能存在高效價(jià)的IgG抗－A（B）抗體，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行抗體檢測(cè)。

關(guān)鍵詞IgG抗－A（B）抗體；新生兒溶血?。还拯c(diǎn)

Analysis of IgG anti -A(B)antibody titers in type O pregnant women

QIU Li1，MIAO Wen2，BAI Hong1
（1.Department of Immunology,School of Basic Medical Sciences,Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China；2.Binhai Tanggu Blood Station,Tianjin 300456,China）

Abstract Objective:To investigate the changes and turning point of IgG anti-A(B)antibody titers in type O pregnant women.Methods：IgG anti-A(B)antibody titers of 2 777 type O pregnant women were tested by the classic antiglobulin test and the results were analyzed according to the number of pregnancy and gestational weeks.Results：With the increase of the number of pregnancy,serum IgG anti -A(B)antibody levels were also increased,and significant difference was found in IgG anti -A(B)antibody titers between the first pregnancy and the two or multiple pregnant women（P＜0.01）.With the increase of gestational weeks,serum IgG anti -A(B)antibody level was first increased slowly in 16-19 weeks of pregnancy,with a turning point of marked increase at 20 weeks of pregnancy，after which continued to increase to peak at 24-28 weeks of pregnancy,without any further growth.Conclusion：The type O pregnant women should undergo IgG anti-A(B)antibody titers detection at 20 weeks of pregnancy.The group O pregnant women with multiple pregnancy history should carry out IgG anti -A(B)antibody test in time,because high titer antibodies may exist in their sera.

Key words IgG anti-A(B)antibody；haemolytic disease of the newborn；turning point

新生兒溶血?。╤aemolytic disease of the newborn,HDN）一般特指母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒同種免疫性溶血性疾病，現(xiàn)已列為孕婦圍產(chǎn)期保健的重要內(nèi)容。新生兒溶血病較多發(fā)生于ABO和Rh血型系統(tǒng)，雖然ABO-HDN的溶血表現(xiàn)相對(duì)于Rh-HDN較溫和[1]，但在我國(guó)的HDN以ABO系統(tǒng)居多（85.3%），Rh系統(tǒng)較少（14.6%），MNSs系統(tǒng)罕見(jiàn)（0.1%）[2]。近年Meta分析顯示隨著孕婦IgG抗-A(B)抗體效價(jià)的升高，發(fā)生HDN的概率也增高[3]。而產(chǎn)前IgG抗－A（B）抗體效價(jià)檢測(cè)可用于判斷ABOHDN發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)，是預(yù)防ABO-HDN發(fā)生的一個(gè)重要參考指標(biāo)[4]。因此對(duì)O型孕婦進(jìn)行血清IgG抗-A （B）抗體效價(jià)的檢測(cè)，了解其上升速度及影響因素，對(duì)于預(yù)防、診斷和治療ABO系統(tǒng)新生兒溶血病有重要意義。本文對(duì)濱海新區(qū)2 777名孕婦產(chǎn)前血清IgG抗－A（B）抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果如下。

1　資料與方法

1.1收集資料天津市濱海新區(qū)2012年7月-2015年5月在我站進(jìn)行ABO系統(tǒng)新生兒溶血病產(chǎn)前血清學(xué)檢測(cè)的2 777名孕婦，血型均為O型RhD陽(yáng)性，孕周16～36周，平均孕周20周，孕產(chǎn)次數(shù)為1～6次。其丈夫血型為A型（1 309例）、B型（1 468例）。2 777名孕婦均身體健康，無(wú)輸血史，血清不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)陰性。采集的血樣為孕婦外周靜脈血，使用4 mL促凝管和2 mL EDTA抗凝管采集。

1.2試劑與儀器單克隆抗-A、抗-B（批號(hào)20130917）、單克隆抗-D（IgM）（批號(hào)20130620）、ABO反定型紅細(xì)胞（批號(hào)20145317）和抗球蛋白試劑（多特異性）（批號(hào)20130904）均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)；二硫蘇糖醇（DTT）（批號(hào)20140621）和抗體篩選細(xì)胞（批號(hào)20140408）均為長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。Coomb’s凝膠卡（批號(hào)14002.01）及配套卡式孵育器和離心機(jī)（戴安娜公司）；細(xì)胞洗滌離心機(jī)（KA-2200型，日本久保田）。

1.3血清學(xué)檢測(cè)

1.3.1 ABO和RhD血型檢測(cè)[5]使用鹽水試管法。

1.3.2孕婦血清抗體篩查試驗(yàn)使用微柱凝膠法。

1.3.3孕婦血清中IgG抗-A（B）抗體效價(jià)檢測(cè)取孕婦待檢血清100 μL，加入二硫蘇糖醇（DTT）試劑100 μL，37℃處理1 h，破壞IgM抗- A（B）；處理后血清用生理鹽水進(jìn)行2倍系列稀釋，然后分別加入對(duì)應(yīng)丈夫血型的紅細(xì)胞，37℃孵育后進(jìn)行試管法間接抗球蛋白試驗(yàn)[6]。試管法間接抗球蛋白試驗(yàn)是檢測(cè)IgG抗-A（B）效價(jià)的經(jīng)典方法，也是中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)輸血科醫(yī)師分會(huì)所推薦的[7]。IgG抗-A（B）抗體效價(jià)以＜64為正常參考值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)數(shù)資料的比較使用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？贵w效價(jià)與妊娠次數(shù)、孕周的圖表分析使用Excel軟件。

2　結(jié)果

2.1 2 777名O型孕婦血清IgG抗-A(B)抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。首次妊娠與2次、3次和4～6次妊娠比較，IgG抗-A（B）抗體效價(jià)存在顯著性差異（χ2=12.1，26.0，10.3，P＜0.01）；2次妊娠與3次妊娠比較，IgG抗-A（B）抗體效價(jià)有差異（χ2=5.92，P=0.015＜0.05），但顯著性水平低于首次妊娠與2次及以上妊娠的比較；3次妊娠與4～6次妊娠比較，IgG抗-A （B）抗體效價(jià)無(wú)顯著性差異（χ2=0.871，P＞0.05）。

表1　2 777名O型孕婦血清IgG抗-A(B)效價(jià)檢測(cè)結(jié)果Tab 1 The test result of IgG anti-A(B)antibody titers of 2 777 type O pregnant women

2.2孕婦血清中IgG抗-A（B）抗體水平隨孕周增高變化隨著孕周的增加，血清中IgG抗-A（B）抗體水平在16～19周時(shí)緩慢增高，在妊娠20周時(shí)出現(xiàn)一個(gè)明顯增高的拐點(diǎn)，而后繼續(xù)增高并在孕24～28周時(shí)達(dá)到頂峰，隨后不再增長(zhǎng)，并且抗-A抗體效價(jià)水平要高于抗-B抗體，見(jiàn)圖1。

圖1　IgG抗-A（B）抗體水平與孕周的關(guān)系Fig 1 The relationship between IgG anti-A(B)antibody titers and the gestational weeks

2.3孕婦血清中IgG抗-A（B）抗體水平隨妊娠次數(shù)增多變化從圖1中發(fā)現(xiàn)孕16～19周期間孕婦IgG抗-A（B）抗體效價(jià)未出現(xiàn)明顯增高的拐點(diǎn)，增長(zhǎng)緩慢，因此選取1 692名孕16～19周孕婦按妊娠次數(shù)為1、2、3和4～6次進(jìn)行分組，計(jì)算每組抗體效價(jià)的對(duì)數(shù)平均值，繪制成趨勢(shì)圖。結(jié)果顯示隨著妊娠次數(shù)的增多，抗體效價(jià)水平也不斷增高，抗-A抗體效價(jià)水平要高于抗-B抗體，見(jiàn)圖2。

圖2　IgG抗-A（B）抗體水平與妊娠次數(shù)的關(guān)系Fig 2 The relationship between IgG anti-A(B)antibody titers and the times of pregnancy

3　討論

HDN是由母親經(jīng)胎盤(pán)傳送給胎兒的抗體引起的，其基本原因是免疫性溶血反應(yīng)，在此反應(yīng)中靶細(xì)胞為胎兒紅細(xì)胞，致敏紅細(xì)胞外覆蓋有母親的IgG抗體，溶血是通過(guò)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。胎盤(pán)對(duì)抗體的吸收是選擇性的，IgG是唯一能穿過(guò)胎盤(pán)的免疫球蛋白。O型人血液中可天然地存在IgG抗-A（B）抗體[8]，因此不同于Rh-HDN，需要通過(guò)輸血或妊娠，經(jīng)同種異體紅細(xì)胞抗原刺激產(chǎn)生抗體導(dǎo)致HDN，ABO-HDN在第一胎即可發(fā)生。圖1和2均顯示，IgG抗-A抗體效價(jià)略高于抗-B抗體效價(jià)，這符合抗-A和抗-B抗體血清學(xué)特點(diǎn)，抗-A比抗-B有相對(duì)較大的變化范圍（抗-A：8-2 048/ 抗-B：8-256）[9]。

機(jī)體接受抗原刺激后,B淋巴細(xì)胞活化增殖，進(jìn)一步分化成熟為漿細(xì)胞和記憶性B細(xì)胞，漿細(xì)胞合成和分泌特異性抗體，參與體液免疫應(yīng)答；記憶性B細(xì)胞不產(chǎn)生免疫球蛋白，但再次與同一抗原相遇時(shí)可迅速活化，產(chǎn)生大量抗原特異性的免疫球蛋白。妊娠過(guò)程中的胎盤(pán)局部破裂造成“經(jīng)胎盤(pán)出血”，使得胎兒紅細(xì)胞進(jìn)入母親體內(nèi)刺激母體產(chǎn)生抗體，而隨著母親的再次妊娠，胎兒紅細(xì)胞會(huì)再次進(jìn)入母體刺激其產(chǎn)生大量的IgG抗體。有文獻(xiàn)報(bào)道[10-11]，多次妊娠的O型孕婦較初次妊娠的O型孕婦更易產(chǎn)生高效價(jià)的IgG抗體，但文獻(xiàn)僅分析了首次妊娠與2次及以上妊娠史孕婦之間的顯著性差異。本次研究按首次、2次、3次、4～6次妊娠劃分4組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)和趨勢(shì)分析，結(jié)果顯示首次妊娠與妊娠2次及以上的孕婦血清IgG抗-A（B）抗體效價(jià)相比均存在顯著性差異，證明隨著妊娠次數(shù)的增加，孕婦抗體效價(jià)增高；而2次妊娠與3次妊娠比較，其顯著性水平低于首次妊娠與2次及以上妊娠的比較，3次妊娠與4～6次妊娠比較，抗體效價(jià)已無(wú)顯著性差異，從中推測(cè)ABO糖類抗原多次刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG抗體，在3次妊娠后將進(jìn)入抗體增長(zhǎng)的平臺(tái)期。

本次研究顯示隨著孕婦孕周的增加，血清中IgG抗-A（B）抗體水平在16～19周時(shí)緩慢增高，在妊娠20周時(shí)出現(xiàn)一個(gè)明顯增高的拐點(diǎn)，而后繼續(xù)增高并在孕24～28周時(shí)達(dá)到峰值，隨后不再增高，抗-A和抗-B抗體變化趨勢(shì)基本一致。IgG通過(guò)胎盤(pán)是一個(gè)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程且不可逆，這個(gè)過(guò)程需要胎盤(pán)上的特異性受體（FcR）介導(dǎo)，在最初妊娠的12周內(nèi)，只有少量IgG抗體被轉(zhuǎn)運(yùn)[12]，妊娠20周后，胎盤(pán)細(xì)胞膜特異性蛋白受體選擇運(yùn)轉(zhuǎn)系統(tǒng)成熟[13]，在妊娠24周時(shí)胎兒體內(nèi)的IgG濃度開(kāi)始呈指數(shù)式的增高直至妊娠期末[12]，妊娠期末母體向胎兒轉(zhuǎn)運(yùn)IgG抗體的速度相對(duì)緩慢，這也許和胎盤(pán)功能的衰退有關(guān)。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)[14-16]支持本文隨著孕周增加抗體效價(jià)增高的結(jié)論，但此類報(bào)道篇數(shù)少，且以往研究選取的孕周觀測(cè)點(diǎn)少、時(shí)間跨度大，不能形成完整的趨勢(shì)圖進(jìn)行拐點(diǎn)分析。本文通過(guò)較大樣本量對(duì)孕周抗體效價(jià)變化趨勢(shì)進(jìn)行了直觀的整體分析，發(fā)現(xiàn)妊娠20周為抗體效價(jià)變化的拐點(diǎn)，妊娠24～28周逐步達(dá)到抗體水平峰值，有利于臨床選擇ABOHDN產(chǎn)前抗體效價(jià)的最佳檢測(cè)和復(fù)查時(shí)間。

隨著我國(guó)計(jì)劃生育政策的放開(kāi)，未來(lái)2次或2次以上妊娠史的孕婦將逐漸增多。通過(guò)本文研究，建議有多次妊娠史的O型孕婦，由于其體內(nèi)可能存在高效價(jià)的IgG抗-A（B）抗體，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行產(chǎn)前抗體效價(jià)檢測(cè)；建議妊娠20周作為ABO-HDN產(chǎn)前檢查最佳的初次檢測(cè)時(shí)間。

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（2015-06-23收稿）

作者簡(jiǎn)介邱麗（1982-），女，碩士在讀，研究方向：免疫學(xué)；通信作者：白虹，E- mail：hongbai25@163.com。

文章編號(hào)1006－8147（2016）01-0031-03

中圖分類號(hào)R722.18

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A