馬藝杰，李　超，盧成志（.天津醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院心內(nèi)科，天津　300070；.天津市第一中心醫(yī)院心內(nèi)科，天津　3009）

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去腎交感神經(jīng)術(shù)對心梗犬下丘腦Ang(1-7)及酪氨酸羥化酶的影響

馬藝杰1，李超2，盧成志2
（1.天津醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院心內(nèi)科，天津300070；2.天津市第一中心醫(yī)院心內(nèi)科，天津300192）

摘要目的：研究去腎交感神經(jīng)術(shù)（RDN）對心肌梗死（MI）犬下丘腦血管緊張素（1-7）[Ang（1－7）]及酪氨酸羥化酶（TH）的影響。方法:健康雜種犬隨機分為對照組、模型組、去腎交感神經(jīng)術(shù)治療組（RDN組），每組6只。對模型組、RDN組行前降支明膠海綿栓塞構(gòu)建MI模型，對照組只行冠脈造影檢查。建模后1周，RDN組行去腎交感神經(jīng)術(shù)，余兩組只行腎動脈造影檢查。建模后4周行超聲心動圖檢查，分別檢測下丘腦Ang（1－7）含量，TH蛋白表達(dá)及ACE2、MasR mRNA表達(dá)。結(jié)果：模型組心功能降低，下丘腦Ang（1－7）含量、TH蛋白表達(dá)水平升高，ACE2、MasR mRNA表達(dá)增加；行RDN后，心功能較前改善，下丘腦TH蛋白表達(dá)水平明顯降低，Ang（1－7）水平進一步升高，ACE2、MasR mRNA表達(dá)進一步增加，差異均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01）。結(jié)論：去腎交感神經(jīng)術(shù)可以增加MI犬下丘腦ACE2表達(dá)，促進Ang（1－7）生成，降低腎上腺素能神經(jīng)元活性，改善MI后心功能。

關(guān)鍵詞去腎交感神經(jīng)術(shù)；心肌梗死；下丘腦；血管緊張素（1－7）；酪氨酸羥化酶；犬

Effect of renal denervation on hypothalamus angiotensin（1-7）and tyrosine hydroxylase in myocardial infarction dogs

MA Yi-jie1,LI Chao2,LU Cheng-zhi2
（1.Department of Cardiology,The First Clinical College，Tianjin Medical University,Tianjin 300192,China;2.Department of Cardiology,Tianjin Frist Central Hospital,Tianjin 300192,China）

Abstract Objective:To explore the effect of renal denervation（RDN）on hypothalamus angiotensin（1－7）[Ang（1－7）]and tyrosine hydroxylase（TH）in myocardial infarction(MI)dogs.Methods:Eighteen healthy mongrel dogs were randomly divided into control group,model group and RDN group.Myocardial infarction model was made in model group and RDN group by gelatin sponge embolization of the left anterior descending artery.One week after MI,RDN was given to dogs in RDN group.Echocardiography examination was administered four weeks after MI.Levels of hypothalamus angiotensin（1－7）,expression of TH protein,expression of ACE2 and MasR mRNA in each group were detected respectively.Results:Compared with control group,heart function was reduced in model group,levels of hypothalamus Ang（1－7）,TH protein,ACE2 and MasR mRNA were higher in model group and RDN group（P＜0．01）.Heart function was improved in RDN group;relatively expression of TH protein was decreased（P＜0．01）;levels of Ang（1－7）and expression of ACE2,MasR mRNA were remarkablely increased in hypothalamus in RDN group ,as compared to the model group（P＜0．01）.Conclusion:RDN is able to increase the levels of hypothalamus ACE2 and Ang(1-7),inhibit the activity of adrenergic neuron,and improve heart function in MI canine model.

Key words renal denervation ;myocardial infarction ;hypothalamus ;angiotensin(1-7);tyrosine hydroxylase；dog

心肌梗死(myocardial infarction,MI)時，盡管規(guī)律服用腎素-血管緊張素系統(tǒng)、交感神經(jīng)系統(tǒng)拮抗劑等藥物治療，左室重構(gòu)、心衰的發(fā)生率仍居高不下[1]。研究發(fā)現(xiàn)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)除了經(jīng)典的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme,ACE)/血管緊張素II（angiotensin II,Ang II）/AT1受體軸外，亦存在血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（ACE2）/血管緊張素（1－7）[Ang（1－7）]/Mas受體軸，兩者共同參與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展[2]。Ang（1－7）作為Ang II的生理性拮抗劑[3-4]，主要由ACE2降解Ang II生成[5]。下丘腦作為重要的心血管中樞，在整合交感活動及神經(jīng)體液信號中起關(guān)鍵作用[6]。Xiao等[7]在MI致心衰大鼠中發(fā)現(xiàn)，下丘腦內(nèi)ACE2過表達(dá)可以降低外周交感神經(jīng)活性，改善心衰。筆者推測是否有藥物以外的其他治療手段通過影響中樞ACE2/Ang（1-7）的表達(dá)，抑制交感神經(jīng)元活性，用于MI的治療。去腎交感神經(jīng)術(shù)（renal denervation,RDN）通過阻斷腎交感神經(jīng)用于頑固性高血壓、MI后心衰、心室肥厚、惡性心律失常等高交感神經(jīng)活性疾病的治療[8-9]。但是RDN是否可以通過影響下丘腦ACE2/ Ang（1－7）的表達(dá)進而影響中樞神經(jīng)元活性治療MI，目前尚少有報道。本實驗在犬MI模型中，觀察RDN對下丘腦Ang（1－7）及酪氨酸羥化酶（TH）的影響，旨在進一步探討RDN治療MI的可能中樞機制。

1　材料和方法

1.1實驗動物分組及處理18只成年雜種犬，體質(zhì)量14～17 kg。隨機分為3組：對照組6只，只行冠脈造影，1周后行腎動脈造影檢查；模型組6只，MI模型建立后1周只行腎動脈造影；RDN組6只，MI模型建立后1周行RDN。

1.2 MI模型建立、去腎交感神經(jīng)術(shù)用6 %戊巴比妥鈉30 mg/kg將犬全麻固定后，氣管插管機械通氣，股動脈穿刺置入6F鞘管，行左冠狀動脈造影，于前降支第一對角支遠(yuǎn)端經(jīng)微導(dǎo)管注射自制直徑約1 mm的明膠海綿顆粒。于栓塞后10 min再次行冠脈造影，以靶血管呈“殘根樣”改變，確認(rèn)血流阻斷，作為判斷構(gòu)建心梗模型成功的標(biāo)準(zhǔn)。犬背部粘貼消融電極板，連接IBI-1500T射頻消融儀(the United States IBI company)，設(shè)定溫度43°C，消融功率10 W，消融時間90 s。行股動脈穿刺送入6F JR4.0造影導(dǎo)管行雙側(cè)腎動脈造影定位后用冷鹽水消融導(dǎo)管（6F，Synaptic Medical,China）由遠(yuǎn)及近沿腎動脈壁行環(huán)形4點消融，術(shù)后再次對腎動脈進行造影檢查。

1.3超聲檢測MI后4周用CS50便攜式彩超（荷蘭Philips公司）行超聲心動圖檢查：左室舒張末期容積（left ventricular end-diastolic volume,LVEDV）、左室收縮末期容積（left ventricular end-systolic volume,LVESV）、左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction,LVEF）。所有參數(shù)區(qū)3個連續(xù)心動周期的均值。

1.4下丘腦Ang（1－7）、TH蛋白的檢測MI后4周處死各組犬開顱器開顱取腦，于灰結(jié)節(jié)和視交叉之間留取下丘腦。下丘腦組織勻漿離心后取上清，ELISA檢測Ang（1－7）含量（試劑盒購自上海博谷生物科技有限公司）：酶標(biāo)儀450 nm波長測量各孔的吸光度，計算樣品Ang（1－7）的含量。Western blot檢測TH蛋白表達(dá)（TH單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司）：采用Image J軟件分析條帶吸光度值，并得出半定量指標(biāo)。

1.5下丘腦ACE2、MasR mRNA的檢測MI后4周處死各組犬取材下丘腦，采用Real-time PCR法。各基因PCR擴增的引物序列見表1。PCR產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠電泳后經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)對ACE2、MasR mRNA進行分析。

表1　ACE2、MasR及內(nèi)參引物序列Tab 1 Primer sequences of ACE2，MasR and actin

1.6統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料采用±s表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組犬存活情況模型組及RDN組分別于第1天、第3天死亡1只，對照組無死亡。

2.2各組犬超聲心動圖檢測結(jié)果與對照組比較，模型組犬LVEF明顯降低（P<0.01），LVEDV和LVESV明顯增加（P<0.01）；RDN組與模型組比較，LVEF有所改善（P=0.028），LVEDV和LVESV明顯降低（P<0.01）。見表2。

表2　各組犬心動圖檢測結(jié)果（±s）Tab 2 Echocardiographic data of dogs（±s）

表2　各組犬心動圖檢測結(jié)果（±s）Tab 2 Echocardiographic data of dogs（±s）

與對照組相比aP<0.01；與模型組相比bP<0.01

組別　　例數(shù)　LVEDV/mL　 LVESV/mL　 LVEF/%對照組　6　 30.75±1.80　 13.72±1.16　 55.37±2.98模型組　5　 41.24±2.56a　25.92±1.38a　37.04±3.05aRDN組　5　 36.96±3.52ab　21.51±1.85ab　41.72±2.91ab

2.3各組犬下丘腦Ang（1－7）含量及TH蛋白表達(dá)MI后4周，與對照組比較，模型組犬下丘腦Ang（1－7）含量及TH蛋白表達(dá)增加（P<0.01）；RDN組與模型組比較，Ang(1-7)含量進一步增加，TH蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.01）。見表3、圖1。

表3　各組犬下丘腦Ang(1-7)含量及TH蛋白的相對表達(dá)Tab 3 The level of Ang(1-7)and relative expression of TH protein in the hypothalamus of each group

圖1　各組犬下丘腦TH蛋白表達(dá)Fig 1 Theexpressionof THproteininthehypothalamusofeachgroup

2.4各組犬下丘腦ACE2、MasR mRNA表達(dá)MI后4周，模型組犬下丘腦ACE2、MasR mRNA表達(dá)增加（分別為1.42±0.13比1.04±0.03，P<0.01；1.33±0.03比1.04±0.04，P<0.01）；RDN組與模型組比較，ACE2、MasR基因表達(dá)進一步增加（分別為2.07±0.02比1.42±0.13，P<0.01；2.09±0.04比1.33±0.03，P <0.01）。見圖2。

圖2　各組犬下丘腦ACE2、MasR mRNA表達(dá)Fig 2 The expression of ACE2，MasR mRNA in the hypothalamus of dogs

3　討論

ACE2是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的負(fù)向調(diào)節(jié)酶，也是體內(nèi)Ang II降解的主要途徑，其產(chǎn)物Ang(1-7)通過作用于G蛋白偶聯(lián)Mas受體產(chǎn)生擴血管、降壓、抑制心肌重構(gòu)等與Ang II相反的作用[4-5]。在MI患者及心衰大鼠中發(fā)現(xiàn)血清、心肌ACE2基因及蛋白表達(dá)增加[10-11]，外源性予以Ang（1-7）或ACE2過表達(dá)可以抑制心肌纖維化、抑制心臟重構(gòu)[4,12]、改善心功能。Xiao等[7]在MI致心衰大鼠腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)，ACE2過表達(dá)可以抑制交感神經(jīng)流出，降低尿去甲腎上腺素排泄，改善心功能，予以Mas受體阻斷劑可以部分消除上述作用。盡管動物及臨床試驗證實ACE2/ Ang（1-7）可以降低交感神經(jīng)活性，發(fā)揮心梗、心衰保護作用，但關(guān)于心梗后中樞ACE2/Ang（1－7）表達(dá)變化的研究甚少。本實驗在MI犬模型中發(fā)現(xiàn)，模型組下丘腦Ang（1－7）含量、ACE2及MasR mRNA表達(dá)增加,表明MI犬下丘腦內(nèi)存在ACE2/Ang（1－7）/ MasR軸的激活。RDN后下丘腦Ang(1-7)含量、ACE 2及MasR mRNA表達(dá)進一步增加，心功能較前改善,表明RDN可以通過進一步促進MI犬下丘腦內(nèi)ACE2/Ang（1-7）/MasR軸的表達(dá)，改善MI后心功能。

腦內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)相互作用共同調(diào)節(jié)交感神經(jīng)活性。酪氨酸羥化酶（TH）是催化去甲腎上腺素（NE）合成的限速酶，是腎上腺素能神經(jīng)元活性的標(biāo)志物[13]。本實驗結(jié)果顯示，模型組下丘腦內(nèi)TH蛋白表達(dá)增加，說明MI后下丘腦內(nèi)腎上腺素能神經(jīng)元活性增加；行RDN后，TH蛋白表達(dá)顯著減少，說明RDN能降低心梗后下丘腦內(nèi)增加的腎上腺素能神經(jīng)元活性。Yu等[14]發(fā)現(xiàn)，中樞應(yīng)用Ang II可以增加下丘腦NE釋放，增加下丘腦及腦干TH mRNA表達(dá)；而中樞Ang（1－7）可以通過抑制TH磷酸化，或通過促進泛素、蛋白酶體結(jié)合至TH增加TH分解降低大鼠下丘腦及腦干TH的活性及表達(dá)[15]。研究證實，中樞Ang（1－7）除通過抑制TH活性及表達(dá)進而抑制NE合成外，尚可以通過抑制NE的釋放及重吸收降低中樞NE濃度[16]，進而參與交感神經(jīng)活性的負(fù)性調(diào)節(jié)。實驗在MI犬模型中初次發(fā)現(xiàn)，MI犬下丘腦內(nèi)存在ACE2/Ang（1-7）/MasR軸的激活及腎上腺素能神經(jīng)元活性的增加。考慮MI后，機體通過代償機制上調(diào)ACE2的表達(dá)，降解下丘腦中過度增加的Ang II并且催化Ang（1－7）的生成，降低增加的腎上腺素能神經(jīng)元活性；RDN可以通過進一步促進MI犬下丘腦ACE2的表達(dá)及Ang（1－7）的生成，降低下丘腦腎上腺素能神經(jīng)元活性，改善MI后心功能。

綜上所述，去腎交感神經(jīng)術(shù)可以增加MI犬下丘腦ACE2表達(dá)，促進Ang（1－7）生成，抑制MI犬下丘腦腎上腺素能神經(jīng)元活性，改善犬MI后心功能。

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（2015-09-15收稿）

醫(yī)學(xué)論文中被誤用為單位符號的“ppm、ppb、ppt”英文縮寫的換算

在醫(yī)學(xué)論文中，“ppm、ppb、ppt”這類英文縮寫常常被作者作為單位符號使用，而“ppm、ppb、ppt”不是量綱一的量的單位的專門名稱，也不是數(shù)學(xué)符號，更不是單位符號，只是表示數(shù)量份額的英文名詞縮寫（英文全稱分別為parts per million、parts per billion、parts per trillion）。在實際研究中，儀器測量的數(shù)值可能會以“ppm、ppb、ppt”形式給出結(jié)果，作者在撰寫文章進行數(shù)據(jù)描述時則需對“ppm、ppb、ppt”進行換算。

對溶液而言，換算前需了解體積比還是質(zhì)量比。1 μg/mL是質(zhì)量-體積比，如果溶液的密度是1 g/mL，則1 μg/mL相當(dāng)于1 ppm；如果溶液密度不是1 g/mL，則需要進行換算。

對大氣中的污染物而言，常用體積濃度和質(zhì)量-體積濃度來表示其在大氣中的含量。體積濃度是用每立方米大氣中含有污染物的體積數(shù)來表示（如cm3/m3、mL/m3），換算關(guān)系是：1 ppm=1 cm3/m3=10-6，1 ppb=10-9，1 ppt=10-12；質(zhì)量-體積濃度是用每立方米大氣中污染物的質(zhì)量數(shù)來表示（如mg/m3、g/m3），換算關(guān)系是：C= 22.4 X/M，式中：X為污染物以mg/m3表示的濃度值；C為污染物以ppm表示的濃度值；M為污染物的分子質(zhì)量。

在土壤、動植物、固體廢棄物中“ppm、ppb、ppt”與質(zhì)量含量的換算關(guān)系為：1 ppm=1 mg/kg=1 000 μg/kg；1 ppb=1 μg/kg=10-3mg/kg；1 ppt=1 ng/kg=10-6mg/kg。

本刊編輯部

作者簡介馬藝杰（1990-），女，碩士在讀，研究方向：高血壓、冠心?。煌ㄐ抛髡撸罕R成志，E- mail:lucz8@126.com。

基金項目天津市衛(wèi)生局科技基金資助項目（2014KY11）；天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計劃（14JCYBJC26100）

文章編號1006－8147（2016）01-0009-04

中圖分類號R542.2+2

文獻標(biāo)志碼A