趙瑞博，郭永紅，張凌子

(西安愛(ài)爾古城眼科醫(yī)院 屈光手術(shù)科，陜西 西安　710061)

?

TGF-α在LASIK手術(shù)患者淚液中的表達(dá)及其臨床意義

趙瑞博，郭永紅，張凌子

(西安愛(ài)爾古城眼科醫(yī)院 屈光手術(shù)科，陜西 西安710061)

[摘要]目的：探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF- α)在準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)患者淚液中的表達(dá)及其臨床意義。方法:將40例(80眼)在我院行LASIK手術(shù)治療患者作為研究對(duì)象，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELSIA)檢測(cè)患者手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)淚液中TGF- α的表達(dá)情況，分析淚液中TGF- α濃度與角膜創(chuàng)傷愈合的關(guān)系。結(jié)果:LASIK術(shù)后1 d淚液TGF- α濃度最高，然后呈逐漸下降的趨勢(shì)，至術(shù)后3個(gè)月降至最低，且與術(shù)前水平相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而術(shù)后1、7 d及1個(gè)月的淚液TGF- α濃度與術(shù)前比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且術(shù)后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。LASIK術(shù)后，基質(zhì)層角膜細(xì)胞減少值、基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)以術(shù)后1 d最高，隨后不斷下降，術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別F=5.832、F=6.369，均P<0.05)；且基質(zhì)層角膜細(xì)胞減少值、基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)與淚液中TGF- α濃度呈正相關(guān)(分別r=0.68、0.61，P<0.05)。術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且與TGF- α濃度無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論:LASIK術(shù)后淚液中TGF- α濃度呈先升高后降低至術(shù)前水平的趨勢(shì)，術(shù)后淚液中高度表達(dá)的TGF- α對(duì)角膜細(xì)胞的增殖、分裂、趨化、移行等過(guò)程具有很好的促進(jìn)作用，有利于角膜創(chuàng)傷的愈合。

[關(guān)鍵詞]準(zhǔn)分子激光； 原位角膜磨鑲術(shù)； 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α； 淚液； 角膜創(chuàng)傷愈合

準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(laserinsituker atomileusis，LASIK)是一種有效的角膜創(chuàng)傷修復(fù)手術(shù)，具有矯治范圍廣、可預(yù)測(cè)性好等優(yōu)勢(shì)[1]。LASIK術(shù)后的角膜創(chuàng)傷修復(fù)是一種復(fù)雜的過(guò)程，受淚液中多種細(xì)胞因子的影響[2- 3]。淚液中存在多種含量較低的細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子參與眼表正常功能的維持及損傷修復(fù)的過(guò)程[4]，其中TGF-α是淚液中一種重要的多肽活性物質(zhì)，能促進(jìn)多種細(xì)胞的增殖與分化過(guò)程，促進(jìn)組織修復(fù)、組織血管發(fā)生、傷口愈合等。此外，對(duì)角化細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移也具有一定的刺激作用，還可參與機(jī)體的免疫反應(yīng)過(guò)程[5]。作者對(duì)行LASIK手術(shù)患者手術(shù)前后淚液中TGF-α濃度的變化情況進(jìn)行觀察，并分析其在角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年1月至2014年1月在我院行LASIK手術(shù)治療的40例(80眼)患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均無(wú)眼疾、手術(shù)史、外傷史及角膜接觸鏡配戴史；圍手術(shù)期間所有患者均未使用過(guò)促上皮生長(zhǎng)等影響角膜愈合的藥物；患者的眼屈光度穩(wěn)定時(shí)間均較長(zhǎng)(2年以上)；屈光度范圍：球鏡-2.0 D～-10.0 D范圍內(nèi)，柱鏡<-3.0 D；術(shù)前患者的眼壓<21 mmHg；所有患者術(shù)前均經(jīng)視力、眼底、眼壓、屈光度狀態(tài)、裂隙燈等檢查，未發(fā)現(xiàn)眼底、角膜厚度及地形圖存在異常；患者術(shù)前均知情同意并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：圓錐角膜、干眼、病毒性角膜炎活動(dòng)期、慢性淚囊炎、視網(wǎng)膜病變及視神經(jīng)病變、青光眼等影響術(shù)后角膜愈合疾病及其他眼科疾??；排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病患者，排除合并糖尿病患者；排除不配合研究患者。研究對(duì)象中18例(36眼)為男性，22例(44眼)為女性，年齡19～35(25.6±3.3)歲，術(shù)前等效球鏡度數(shù)為[(-4.46)±(-1.41)] DS。

1.2方法

1.2.1淚液標(biāo)本收集同一例患者手術(shù)前，術(shù)后1 d、7 d、1個(gè)月、3個(gè)月的淚液標(biāo)本收集均由一人操作完成。制作直徑為3 mm的圓形濾紙片，高壓消毒滅菌后將其放入術(shù)眼下穹窿外1/3處的結(jié)膜囊內(nèi)，囑咐患者輕閉雙眼3 min，3 min后將濾紙取出并放入已經(jīng)高壓消毒的EP管內(nèi)，再放入冰箱(-20 ℃)保存待測(cè)。

1.2.2淚液標(biāo)本中TGF-α濃度檢測(cè)淚液中TGF-α濃度采用ELSIA法檢測(cè)，試劑盒為美國(guó)R&D Systems公司生產(chǎn)，操作嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3觀察指標(biāo)

觀察LASIK術(shù)前，術(shù)后1、7d及1、3個(gè)月淚液中TGF-α的濃度。在共聚焦激光顯微鏡下選擇清晰的顯微圖像，由兩名實(shí)驗(yàn)人員對(duì)基質(zhì)角膜細(xì)胞、角膜基質(zhì)層碎片、角膜內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行手工計(jì)數(shù)，再根據(jù)NAVIS圖像分析軟件定量分析所有患者的基質(zhì)層角膜細(xì)胞、角膜基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)、角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)情況，取平均值，計(jì)算基質(zhì)層角膜細(xì)胞減少值，并對(duì)術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1LASIK術(shù)前、術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)淚液中TGF-α的表達(dá)見(jiàn)表1。

術(shù)后淚液中TGF-α濃度呈先升高后降低的趨勢(shì)，以術(shù)后1 d最高，術(shù)后1、7 d及1個(gè)月淚液TGF-α濃度與術(shù)前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

時(shí) 間TGF-α表達(dá)量/pg·ml-1術(shù)前177.62±58.53術(shù)后1d602.57±132.66術(shù)后7d445.48±85.93術(shù)后1個(gè)月252.36±69.71術(shù)后3個(gè)月185.32±44.23F值5.916P值0.015

2.2LASIK術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)基質(zhì)層角膜細(xì)胞減少值、角膜基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)、角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)比較見(jiàn)表2。

個(gè)/mm2

LASIK術(shù)后1 d角膜細(xì)胞減少值及基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)最高，隨后不斷下降，術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別F=5.832、F=6.369，均P<0.05)。LASIK術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.872，P>0.05)。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析可知，基質(zhì)層角膜細(xì)胞減少值、角膜基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)與淚液中TGF-α濃度存在正相關(guān)性(分別r=0.68、0.61，P<0.05)，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)與TGF-α濃度無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。

3討論

LASIK術(shù)后角膜創(chuàng)傷愈合機(jī)制較為復(fù)雜，許多學(xué)者對(duì)LASIK術(shù)后角膜創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程的機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)修復(fù)過(guò)程與多種細(xì)胞及細(xì)胞因子各自的作用及相互間的作用密切相關(guān)[6- 7]。大量細(xì)胞因子、酶類、轉(zhuǎn)錄因子等構(gòu)成一個(gè)整體網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，參與角膜創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程的精確調(diào)控[8]。LASIK術(shù)后嚴(yán)格控制或減輕傷口愈合反應(yīng)有利于獲得更滿意的治療效果[9]。

大量研究證實(shí)，在角膜的發(fā)育及角膜完整性的維持過(guò)程中，淚液中TGF-α表達(dá)具有十分關(guān)鍵性作用[10- 11]。TGF-α是一種由多種細(xì)胞產(chǎn)生的調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)的多肽類活性物質(zhì)，同時(shí)也是一種強(qiáng)有力的促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的正性生長(zhǎng)因子，其生物學(xué)作用十分廣泛，分泌后結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor，EGF- R)而發(fā)揮作用，能在多種細(xì)胞增殖與分化、組織修復(fù)、傷口愈合、角化細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移、免疫反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮很好的促進(jìn)作用[12]。淚液中的TGF-α大多由角膜上皮細(xì)胞合成和分泌，少部分為外源性。TGF-α可促進(jìn)角膜多種細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程，如細(xì)胞的增殖、分化和移行等，鄰近上皮細(xì)胞的增殖和移行可完成對(duì)角膜傷口的修復(fù)。此外，TGF-α還可通過(guò)正向調(diào)節(jié)TGF-β1的間接作用機(jī)制來(lái)促進(jìn)角膜成纖維細(xì)胞的增殖、分化及細(xì)胞外基質(zhì)分泌，從而進(jìn)一步促進(jìn)角膜創(chuàng)傷修復(fù)[13]。

本研究對(duì)LASIK術(shù)前、術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)淚液中TGF-α的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，TGF-α濃度在術(shù)后1 d達(dá)到最高，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)淚液中TGF-α濃度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示淚液中TGF-α在術(shù)后早期高度表達(dá)，這與LASIK術(shù)對(duì)角膜的損傷有關(guān)。角膜上皮細(xì)胞對(duì)TGF-α最敏感，角膜出現(xiàn)損傷后，淚液中細(xì)胞因子TNF-α水平可產(chǎn)生很大的變化，在早期淚液中表達(dá)量可急劇增加，促進(jìn)角膜細(xì)胞的增殖和移行，從而完成角膜傷口的修復(fù)過(guò)程。目前，國(guó)內(nèi)外較多學(xué)者的研究中已發(fā)現(xiàn)了這一點(diǎn)，均認(rèn)為L(zhǎng)ASIK術(shù)后淚液TGF-α表達(dá)量可發(fā)生較大的波動(dòng)[14- 15]。但本研究還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，LASIK術(shù)后隨著時(shí)間的進(jìn)展，淚液TGF-α表達(dá)量逐漸下降，尤其是3個(gè)月后，淚液中TGF-α的濃度接近于術(shù)前水平，術(shù)后1、7 d、1個(gè)月與術(shù)前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明隨著角膜創(chuàng)傷的修復(fù)，TGF-α表達(dá)水平逐漸恢復(fù)穩(wěn)定狀態(tài)。這是由于手術(shù)應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體角膜細(xì)胞釋放細(xì)胞因子參與創(chuàng)傷修復(fù)調(diào)控，創(chuàng)傷一旦修復(fù)，調(diào)控機(jī)制恢復(fù)正常狀態(tài)，故淚液TGF-α表達(dá)量恢復(fù)正常表達(dá)水平。本研究發(fā)現(xiàn)，LASIK術(shù)后基質(zhì)層角膜細(xì)胞減少值、基質(zhì)層碎片計(jì)數(shù)與淚液中TGF-α表達(dá)量的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律相似，且經(jīng)Spearman分析存在正相關(guān)性，說(shuō)明LASIK術(shù)后角膜創(chuàng)傷的愈合與TGF-α參與的角膜多種細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān)，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化和移行等而實(shí)現(xiàn)對(duì)創(chuàng)傷修復(fù)的調(diào)控。對(duì)此，尚無(wú)較多的文獻(xiàn)報(bào)道，還有待于進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 盛小紅.準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)前后淚液中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)的表達(dá)[D].大連：大連醫(yī)科大學(xué)，2010．

[2] 丁月.LASIK手術(shù)前后淚液中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量的變化[D].大連：大連醫(yī)科大學(xué)，2012．

[3] 陳靜，陳藝，韓蘇寧，等.Epi- LASIK術(shù)中上皮瓣去留對(duì)術(shù)后角膜上皮下霧狀混濁及淚液中TGF-β1的影響[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33(5):631- 634．

[4] 牛廣增.準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)后淚液中神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)與角膜知覺(jué)恢復(fù)的研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2011．

[5] 牛廣增，蘇蕊，范玉香，等.準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)后淚液中神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)與角膜知覺(jué)恢復(fù)的研究[J].眼科新進(jìn)展，2012，32(11):1050- 1053．

[6] DU Z，ZHAO W，HUANG Z，et al.Inhibition effect of tetrandrine on haze formation after Epi- LASIK surgery in rabbits[J].Curr Eye Res，2011，36(8):699- 705．

[7] TORII H，NEGISHI K，WATANABE K，et al.Myopic regression after phakic intraocular lens implantation and LASIK[J].Optometry Vision Sci，2014，91(2):231- 239．

[8] QUEIROS A，VILLA- COLLAR C，JORGE J，et al.Peripheral refraction in myopic eyes after LASIK surgery[J].Optometry Vision Sci，2012，89(7):977- 983．

[9] KIM S J，CHUNG T W，CHOI H J，et al.Ganglioside GM3 participates in the TGF- beta 1- induced epithelial- mesenchymal transition of human lens epithelial cells[J].Biochem J，2013，449(Pt.1):241- 251．

[10] KIM Y W，PARK J，LEE H J，et al.TGF-βsensitivity is determined by N- linked glycosylation of the type Ⅱ TGF-βreceptor[J].Biochem J，2012，445(3):403- 411．

[11] 周遠(yuǎn)沛.堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)LASIK術(shù)后角膜神經(jīng)修復(fù)和角膜知覺(jué)恢復(fù)的影響[D].鄭州：鄭州大學(xué)，

2014．

[12] 廉井財(cái)，顧麗瓊，石海云，等.準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)前后淚液中TNF-α、IL- 2和NGF的表達(dá)[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2008，28(6):669- 671．

[13] 郭秀瑾.不同方式的準(zhǔn)分子激光表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2010．

doi：10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.02.022

[中圖分類號(hào)]R779.65

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1671- 6264(2016)02- 0239- 03

[作者簡(jiǎn)介]趙瑞博(1976-)，男，陜西西安人，主治醫(yī)師，在讀碩士研究生。E- mail: 2544249223@qq.com

[收稿日期]2015- 09- 22[修回日期] 2015- 12- 24

[引文格式] 趙瑞博，郭永紅，張凌子.TGF-α在LASIK手術(shù)患者淚液中表達(dá)及臨床意義[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2016，35(2)：239- 241.

·論著·