安賢蘭 闞朋甲 王 宇

抗生素微生物檢定法測定注射用磷霉素鈉含量的不確定度分析

安賢蘭1闞朋甲2王 宇3

目的 探討注射用磷霉素鈉含量采用抗生素微生物檢定法鑒定的不確定度評定方法。方法 本次研究采用抗生素微生物檢定法對注射用磷霉素鈉含量測定過程中不確定度的來源及大小進行評定。結(jié)果 總合成不確定度u總=100．5%×urel總=2．5%；按置信概率P=0．96，K=1．95，擴展不確定度為U=1．95×u總=4．9%；注射用磷霉素鈉含量測定結(jié)果為（100．5±4．9）%。結(jié)論 在對不確定度進行分析與評估時，應該盡可能地對不確定度所有來源進行密切考察，防止出現(xiàn)遺漏。

注射用磷霉素鈉含量；抗生素微生物檢定法；不確定度評定方法

抗生素微生物檢定法主要是指在攤布特定試驗菌的固體培養(yǎng)基內(nèi)采用抗生素使其呈現(xiàn)出球面形的擴散，從而使其形成一個含有一定濃度的抗生素球形區(qū)，最終能夠?qū)υ囼灳姆敝城闆r進行抑制，呈現(xiàn)出一個透明的抑菌圈［1］。通過對標準品與試供品產(chǎn)生出的抑菌圈情況對試供品效價進行測定。采用抗生素微生物檢定法時，影響其結(jié)果的干擾因素較多，因而在操作中要嚴格按照相關的規(guī)則及要求進行，盡可能地縮小試驗中造成的誤差，確保試驗結(jié)果的準確性［2］。

1 試驗方法

1.1 試藥與相關儀器

本次試驗采用的試藥包括注射用磷霉素鈉、磷霉素標準品、抗生素微生物檢定培養(yǎng)基II號、藤黃微球菌、磷酸鹽緩沖液［3］。其中磷酸氫二鉀以及磷酸二氫鉀均為分析純。相關儀器包括：型號為ZY-300G的鋼管自動放置器、型號為ZY-300IV抑菌圈自動測量分析儀、隔水式恒溫培養(yǎng)箱以及型號為BP-211D電子分析天平。

1.2 制備供試品與標準品

1.2.1 供試品 選取5瓶供試品，精密稱定總內(nèi)容物為7.269 g，平均裝置為1.396 g。然后精密稱取供試品74.52 mg，將其放置于容量為100 ml的容量瓶中，采用滅菌水溶解并將其稀釋至刻度。最后將其制作成含磷霉素1 000單位/ml的標準品溶液，采用相同的方法，制作成含磷霉素20單位及10單位/ml的溶液，將其作為試供品溶液的高低劑量［4］。

1.2.2 標準品 精密稱取磷霉素標準品38.09 mg，將其放置于容量為25 ml的容量瓶中，加滅菌水進行溶解后稀釋至刻度，并將其制作成含磷霉素1 000 單位/ml的標準品溶液。然后精密地量取此溶液各2 ml，將其分別放置在容量為50 ml以及100 ml的容量瓶中，采用滅菌磷酸鹽緩沖液加入其中，將其稀釋至刻度。最后將其制作成含磷霉素20單位及10單位/ml的溶液，將其作為標準品溶液的高低劑量［5］。

1.3 制備及培養(yǎng)雙碟

按照試驗的要求平行制備9個雙碟，并將其放置于水平臺上。每只雙碟的底層應該添加經(jīng)過配置的記錄為20 ml的抗生素微生物鑒定培養(yǎng)基，將其凝固后加入劑量為5 ml的菌層。攤布均勻且冷卻后，在每只雙碟的等距離處放置4個鋼管，并將其穩(wěn)定5～10 min。然后滴加之前已經(jīng)制備完成的供試品以及標準品高低劑量溶液，將其蓋上陶瓦蓋后，放置于隔水式恒溫培養(yǎng)箱（37℃）進行長達18 h的培養(yǎng)［6］。

1.4 測量抑菌圈直徑與計算效價

對抑菌圈直徑采用抑菌圈自動測量分析儀進行測定，按照生物檢定統(tǒng)計法對效價進行計算。在計算的過程中需要同時滿足三點：偏離平行不顯著（P＞0.01）；效價平均可信限率為4.88%，在5%以內(nèi)；回歸項顯著（P＜0.01）。

2 評估測量不確定度

供試品含量測定結(jié)果由以下數(shù)學模型給出：

其中PT表示為供試品效價，AT表示為供試品估價試價，Ws及WT分別表示為標準品與供試品的稱樣量。Ps表示為標準品的純度，Vs及VT分別表示為標準品與供試品的稀釋倍數(shù)，I為高低劑量之比。S1與S2分別表示為標準品低濃度溶液所致抑菌圈直徑總和以及高濃度所致抑菌圈直徑總和，T1與T2分別表示為樣品低、高濃度所致抑菌圈直徑總和。

試驗結(jié)果表明，總合成不確定度u總=100.5%×urel總= 2.5%；按置信概率P=0.96，K=1.95，不確定度為U=1.95×u總= 4.9%；注射用磷霉素鈉含量測定結(jié)果為（100.5±4.9）%。

3 討論

本次研究表明，試供品總合成不確定度u總=2.5%；按置信概率P=0.96，K=1.95，不確定度為U=4.9%。這說明，在現(xiàn)有的條件下使測定結(jié)果受控，并且可以通過分析各分量不確定度的大小對實驗進行優(yōu)化，從而能夠確保測定結(jié)果的真實可靠性。并且，合成不確定度數(shù)值主要取決因素在于數(shù)值較大的不確定度分量［7］。因此，在對不確定度進行分析與評估時，應該盡可能地對不確定度所有來源進行密切考察，防止出現(xiàn)遺漏。為了確保測量結(jié)果的準確性，需要采用有針對性的試驗設計方法，縮小生物變異對試驗結(jié)果造成的影響。并且要盡可能地減少稀釋過程對測定結(jié)果造成的影響，將稀釋次數(shù)控制在3次內(nèi)，并盡可能地避免采用小體積量器進行量取及定容［8］。除此之外，還需要嚴密地控制實驗過程中溫度的變化情況，避免因溫度導致溶劑體積的變化。

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AN Xianlan1KAN Pengjia2WANG Yu31 Chemical Room，Yanbian Institute of Food and Drug Inspection，Yanji Jilin 133000，China，2 Chemical Room，Baicheng Food and Drug Inspection Institute，Baicheng Jilin 137000，China，3 Traditional Chinese Medicine Room，Yanbian Institute of Food and Drug Inspection，Yanji Jilin 133000，China

Objective To explore the evaluation method of uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection by using the microbial assay of antibiotics． Methods The source and size of the uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection were evaluated by the method of antibiotic microbiological assay． Results Total synthesis uncertainty u total =100．5% ×urel total =2．5%，according to the confidence probability P=0．96，K=1．95，extended uncertainty U=1．95×utotal=4．9%． Fosfomycin Sodium for Injection content determination result was（100．5±4．9）%． Conclusion In the analysis and evaluation of uncertainty，it should be possible to make a close investigation of all sources of uncertainty，so as to prevent the occurrence of omissions．

Fosfomycin sodium for injection content，Antibiotic microbiological assay method，Uncertainty evaluation method

R927

A

1674-9316（2016）22-0117-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．070 Determination of the Uncertainty of the Content of Fosfomycin Sodium for Injection by the Method of Microbial Assay of Antibiotics

1 延邊州食品藥品檢驗所化學室，吉林 延吉 133000 2白城市食品藥品檢驗所化學室，吉林 白城 137000 3延邊州食品藥品檢驗所中藥室，吉林 延吉 133000