劉義剛，李曉瑩，路麒,郭亞南，任勇

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院，濟(jì)南250021)

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性病門診患者HPV感染情況及其亞型分析(附733例報(bào)告)

劉義剛，李曉瑩，路麒,郭亞南，任勇

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院，濟(jì)南250021)

摘要：目的了解性病門診患者人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況和病毒亞型分布。方法采用PCR法檢測(cè)733例性病門診患者HPV 基因及其亞型。 結(jié)果733例性病門診患者HPV陽性檢出率36.15%，男、女檢出率分別為27.20%、46.73%，P<0.05。其中，HPV感染高危型71.69%、低危型55.09%；高危型單一感染構(gòu)成比52.41%，其中HPV52、58、16分別占10.16%、9.63%、9.36%，混合感染構(gòu)成比為28.31%；HPV陽性構(gòu)成比20～29歲者47.06%、≥60歲者0.80%。結(jié)論性病門診患者中HPV陽性檢出率較高，且女性檢出率高于男性；高危型以單一型感染居多，以HPV52、58、16為主；20～29歲HPV陽性構(gòu)成比最高、≥60歲者低。

關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒；基因亞型；性病門診

人乳頭瘤病毒 (HPV)是一種高度親嗜人體皮膚及黏膜的小分子雙鏈 DNA 病毒 ，人類是 HPV的惟一宿主，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已鑒定出200多種亞型，能感染人類生殖道的有40多個(gè)，HPV感染是最普遍的性傳播疾病之一。本研究觀察了733例性病門診患者HPV感染情況及其亞型分布，為其防治及流行病學(xué)研究提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年10月～2015年5月山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院性病門診就診的性病患者和咨詢自愿者733例 ，男397例、女336例，年齡4～67歲。

1.2HPV檢測(cè)方法男女分別取尿道、宮頸分泌物，外生殖器有贅生物者另在贅生物表面稍用力刮拭取材；放入裝有2 mL細(xì)胞保存液的保存管中，-20 ℃保存待測(cè)。選擇DA7600核酸擴(kuò)增分析儀 DNA 提取試劑、HPV 擴(kuò)增試劑、HPV核酸測(cè)定試劑盒(熒光PCR法)，可檢測(cè)HPV亞型15種，包括 13 種高危亞型 (16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型)、2種低危亞型 (6、11型)。標(biāo)本試管中加入1 mL無菌生理鹽水，吸取液體轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中，13 000 r/min 離心 5 min；沉淀加無菌生理鹽水1 mL混勻，13 000 r/min 離心 5 min，重復(fù)洗滌1次；沉淀直接加入50 μL核酸提取液充分混勻，99 ℃干浴或水浴10 min；13 000 r/min 離心 5 min，取上清41 μL作為PCR反應(yīng)模板。取混合液36 μL置于PCR反應(yīng)管中，然后將標(biāo)本、陽性對(duì)照品、水(陰性對(duì)照)的處理上清液各4 μL分別加入薄壁PCR反應(yīng)管中，反應(yīng)體系40 μL。37 ℃ 2 min；94 ℃ 2 min；再按93 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s，循環(huán)40次。結(jié)果判定：儀器Ct欄顯示UNDET或40表示檢測(cè)樣本低于檢測(cè)限，判為陰性；檢測(cè)樣本Ct值≤38，且擴(kuò)增曲線呈典型S形，判為陽性。檢測(cè)樣本Ct值在38～40，需重復(fù)測(cè)定，如仍在38～40，且擴(kuò)增曲線呈典型的S形，則判為陽性；若非典型S形曲線，則判為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HPV檢出率733例患者中共檢出 HPV 陽性265例，檢出率為36.15%；其中男性27.20%、女性46.73%，女性 HPV 陽性檢出率明顯高于男性(χ2=260.81，P<0.05)。

2.2HPV感染亞型分布265例HPV感染者基因型分布見表1。不同性別HPV感染者單一及多重感染構(gòu)成情況見表2。不同年齡人群HPV陽性率及陽性構(gòu)成比見表3。

3討論

HPV是具有鱗狀上皮細(xì)胞親嗜性的閉合環(huán)狀DNA病毒，根據(jù)其致病力或致癌危險(xiǎn)性不同可分為低危型和高危型。低危型是引起尖銳濕疣的主要病原體[1]，如HPV6、11、42、43、44、81等；高危型常引起宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及浸潤(rùn)性宮頸癌，如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68 等。研究證實(shí)，HPV 感染與宮頸癌及其癌前病變密切相關(guān)。高危型HPV持續(xù)感染可整合到宿主黏膜的上皮基因中，使病毒的致癌基因 E6/E7 在宮頸上皮組織中過量表達(dá)，并與宿主基因組的抑癌基因pRb、p53結(jié)合，使其降解、失活，失去對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期的調(diào)控，導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖甚至惡性轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致宮頸癌[2，3]。HPV感染后最初以亞臨床感染為主，導(dǎo)致人群中存在大量無癥狀病毒攜帶者，增加了人群感染的危險(xiǎn)性。因此，對(duì)本地區(qū)門診高危患者進(jìn)行 HPV 分型檢測(cè)，了解高危人群感染HPV的流行病學(xué)特點(diǎn)，對(duì)疾病的防治具有重要意義。

表1　265例HPV感染者基因型分布[例(%)]

表2　不同性別HPV感染者單一及多重感染

表3　不同年齡人群HPV陽性率及陽性構(gòu)成比(%)

本組患者HPV陽性率為36.15%，高于張志勇等[4]報(bào)道的28.82%、劉靜等[5]報(bào)道的29.67%，低于聶雙雙等[6]報(bào)道的36.94%、李嘉彥等[7]報(bào)道的40.26%。其中，女性 HPV 陽性檢出率明顯高于男性，與李嘉彥等[7]的報(bào)道不同。其原因可能與種族、地域及主動(dòng)來醫(yī)院就診的疑似HPV 感染者及檢測(cè)技術(shù)等差異有關(guān)。本研究顯示，HPV高危亞型前3位是 HPV52、58、16，且存在性別差異，可能是由個(gè)人衛(wèi)生情況及性行為、人體生理解剖結(jié)構(gòu)等造成。流行病學(xué)資料顯示，HPV亞型分布有明顯地域差異[8]。本研究女性高危亞型前3位是HPV58、52、16型，不同于其他報(bào)道[9～14]，進(jìn)一步提示HPV亞型分布存在明顯地域差異。本研究顯示，HPV感染構(gòu)成比中，高危型感染以單一感染為主；且無論高危型單一、多重感染，還是低危型混合感染，女性高于男性。有文獻(xiàn)[15]顯示，女性HPV高危型單一感染可使宮頸癌患病風(fēng)險(xiǎn)增加 19.9倍， 而混合感染可增加31.8倍。因此，應(yīng)更加重視多重高危及混合型感染。

本研究顯示，<20歲者HPV感染率最高，可能與此年齡段性活躍度高、個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣及健康意識(shí)缺乏、免疫系統(tǒng)還未被致敏等有關(guān)；≥60歲者HPV感染率相對(duì)較高,可能是自身免疫力下降所致；20～29歲者構(gòu)成比最高、≥60歲者最低，是由于20～29歲者性生活活躍而健康意識(shí)缺乏，導(dǎo)致門診就診數(shù)最高，HPV感染者基數(shù)大，≥60歲者門診就診數(shù)少。因此，需普及年輕人群對(duì)于HPV感染的基本認(rèn)識(shí)，指導(dǎo)其建立良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣和健康性生活，同時(shí)加強(qiáng)高危老年人群HPV的篩查。

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(收稿日期：2015-10-23)

中圖分類號(hào)：R711.7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2016)10-0084-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.10.038

通信作者：任勇(E-mail: heirenyong@163.com)

基金項(xiàng)目：山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013GSF11872)。