韓曉勇 尚金星 趙志煌 王希瑞 尹港峰

滄州市中心醫(yī)院神經外三科 河北省滄州市 061000

Rac1降低膠質瘤手術聯合放化療敏感性

韓曉勇 尚金星 趙志煌 王希瑞 尹港峰

滄州市中心醫(yī)院神經外三科 河北省滄州市 061000

目的：探討膠質瘤術后放化療敏感性與Rac1表達的關系。方法：選取我院膠質瘤患者30例，術中均留取標本，術后均經過常規(guī)放化療治療。PCR檢測30例膠質瘤標本Rac1的表達量，并隨訪統計30例患者復發(fā)率。利用X2檢驗，分析膠質瘤中Rac1表達的高低與膠質瘤術后患者經放化療治療后復發(fā)率的關系。結果：Rac1高表達的膠質瘤患者經術后放化療后復發(fā)率較Rac1低表達的膠質瘤患者明顯增加，差異具有統計學意義。結論：Rac1高表達的膠質瘤術后放化療敏感性降低。

膠質瘤；Rac1；放化療

腦膠質瘤是腦原發(fā)性腫瘤中發(fā)病率最高并且在治療上最困難的一類腫瘤。目前對于腦膠質瘤復發(fā)的具體機制尚不明確。有研究發(fā)現，Rac1的表達有膠質瘤的侵襲和遷移能力密切相關。本文隨訪收集我院神經外科2012-2013年手術聯合放化療綜合治療的膠質瘤患者30例，初步探討膠質瘤患者術后經放化療后的復發(fā)率與Rac1表達的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集滄州市中心醫(yī)院2012-2013年30例膠質瘤患者手術切除的膠質瘤標本，將所取新鮮標本裝入凍存管中，置入液氮保存。 30例膠質瘤患者，其中男性18例，女性12例，年齡：26-65歲，平均年齡43.5歲。根據WHO神經系統腫瘤分型（2007年版）進行分級，其中Ⅰ級2例，Ⅱ級11例，Ⅲ級13例，Ⅳ級4例，取癲癇患者顳葉腦組織8例，作為對照組。所有患者均為首發(fā)膠質瘤，術前均未行放化療。

1.2 治療方法

所有患者均行開顱手術治療，所選30例患者均為術中腫瘤完全切除。術后經放療科正規(guī)放療，并同期行化療?；煼桨覆捎媚崮就』蛱婺虬?。

1.3 RT-PCR檢測膠質瘤組織中Rac1 mRNA水平

從液氮中取出冰凍膠質瘤組織按照Trizol說明書提取U251細胞總RNA，進行RNA的濃度、純度及完整性的測定。用二步法擴增目的基因，參照文獻 Rac1的引物序列為：上游引物5’-TGACCAATACTGACCCTCTTTACCT-3’，下游引物5’-CATCAATAGGCAAAG CGACTACA-3’；內參β-actin的引物序列為：上游引物5’-ATGTGGCCGAGGACT TTGAT-3’，下游引物5’TGGCTTTTAG GATGGCAAGG-3’。Rac1和β-actin的擴增產物長度分別為：71bp和100bp。擴增條件：94℃激活5min，94℃變性30S，52℃退火60S，72℃延伸90S，30個循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸5min。取RT-PCR產物在2%瓊脂糖凝膠上電泳(80V，30min)，用凝膠圖像分析軟件分析結果，取其積分吸光度值，目的基因與β-actin的比值為相對表達水平，每組重復實驗3次，結果采用均數±標準差表示。

1.4 隨訪及統計學方法

隨訪采取門診復查方法，以治療后3-6個月復查增強核磁共振為依據判斷腫瘤復發(fā)情況。采用SPSSl6.0統計軟件進行統計學分析。比較采用t檢驗和X2檢驗，以P<0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

（1）為了檢測膠質瘤標本中Rac1的表達情況，我們通過RT-PCR方法測得30例膠質瘤標本中Rac1對比內參的平均相對表達量為37.53±7.14%，而正常腦組織的Rac1對比內參的相對表達量為7.33±2.51%?？梢娔z質瘤中的Rac1表達量較正常腦組織表達量明顯增高，且差異具有統計學意義（P=0.008）。

（2）為了比較Rac1的表達和膠質瘤復發(fā)率的關系，我們根據已測得的膠質瘤平均相對表達量，將膠質瘤標本分為兩組。具體方法為：以Rac1表達量高于平均值者為高表達組，低于平均值者為低表達組。高表達組18例，Rac1平均表達量為46.23±8.29%；低表達組12例，Rac1平均表達量為18.62±5.82%。根據隨訪結果，高表達組18例復發(fā)14例，復發(fā)率為77.78%；低表達組12例，復發(fā)5例，復發(fā)率為41.67%?？梢奟ac1高表達組的復發(fā)率明顯增加，利用四格表卡方檢驗分析認為差異具有統計學意義（p=0.043）。

3 討論

腦膠質瘤是中樞神經系統最常見的惡性腫瘤之一，由于其高度侵襲性生長的特點，使得單純的手術治療方法無法將腫瘤組織切除完全。術后的放化療也就成為了膠質瘤綜合治療的重要組成部分[1]。膠質瘤患者術后經正規(guī)合理的放化療的綜合治療，總體上可以改善生存，但仍存在部分腫瘤早期復發(fā)的情況[2]。

Rac1作為一種重要的細胞信號轉導分子，其廣泛存在于人體各種細胞內，并且與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。膠質瘤的高侵襲性與高遷移能力是膠質瘤復發(fā)和耐藥性的密切相關因素。膠質瘤的高侵襲性與高遷移能力可能是膠質瘤術后殘留，逃避放療和產生耐藥性的重要原因。我們研究發(fā)現在膠質瘤組織中，Rac1的表達量顯著高于正常腦組織。并且，Rac1高表達組的膠質瘤患者在術后和聯合放化療后的復發(fā)率要明顯高于Rac1低表達組。這說明，Rac1的高表達可能與膠質瘤治療后的復發(fā)密切相關，但具體機制有待進一步研究。

[1]齊春曉，王寧.惡性膠質瘤放化療后假性進展的研究現狀[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(18):8425-8427.

[2]肖鋒,王洪林.腦膠質瘤放化療研究進展[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(02):54-55.