何　清　張緯建　李　晶

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院放療科，福建　福州　350005)

?

乳腺癌組織中扭曲基因和雌激素受體的表達(dá)及臨床意義

何清張緯建李晶1

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院放療科，福建福州350005)

〔摘要〕目的研究乳腺癌組織中扭曲基因(TWIST)和雌激素受體(ERα)的表達(dá)及其臨床意義。方法隨機(jī)選取2009年1月至2010年9月在該院接受手術(shù)治療的35例乳腺癌患者的癌組織與癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行研究，采用免疫組織化學(xué)法檢測乳腺癌組織及癌旁組織中的TWIST與ERα表達(dá)情況，分析兩者對(duì)乳腺癌患者1年及5年復(fù)發(fā)率及生存率的影響，采用Cox多因素統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析乳腺癌患者生存預(yù)后的影響因素。結(jié)果TWIST在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，ERα在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織(P<0.05)。TWIST(+)ERα(-)的5年復(fù)發(fā)率顯著高于其他各組，5年生存率顯著低于其他各組(P<0.05)。低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者TWIST陽性及ERα陰性的比例明顯高于中高分化及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。Cox多因素分析顯示，病理分級(jí)為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TWIST(+)ERα(-)均為乳腺癌患者預(yù)后生存的影響因素。結(jié)論TWIST的高表達(dá)及ERα的低表達(dá)對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后生存具有不利影響，臨床監(jiān)測二者的表達(dá)情況，可評(píng)估患者的預(yù)后。

〔關(guān)鍵詞〕乳腺癌組織；TWIST；ERα

近年來，乳腺癌發(fā)病率不斷升高，相關(guān)報(bào)道指出〔1，2〕，扭曲基因(TWIST)和雌激素受體(ERα)在乳腺癌的發(fā)生侵襲以及轉(zhuǎn)移等活動(dòng)中起到關(guān)鍵作用,本文旨在深入研究兩者在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中所起到的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料隨機(jī)選取2009年1月至2010年9月在我院接受手術(shù)治療的35例女性乳腺癌患者，年齡36～69歲，平均(48.2±2.6)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者在術(shù)前未接受過放化療治療；(2)術(shù)后病理學(xué)確診為乳腺癌；(3)單側(cè)乳腺癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)其他種類的癌癥病史；(2)雙側(cè)乳腺癌。手術(shù)切除患者癌組織與癌旁組織(與癌組織距離≥3 cm)，所有標(biāo)本蠟塊均存于液氮內(nèi)。

1.2研究方法對(duì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本實(shí)施常規(guī)脫蠟和水化，制成切片，使用3%的過氧水在室溫下孵育約10 min，利用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，5 min/次。使用10%的山羊血清進(jìn)行封閉，在室溫下孵育約10 min，清除血清并滴加一抗(產(chǎn)自美國Billegend公司)，在4℃下過夜。給予PBS沖洗，滴入生物素標(biāo)記二抗(產(chǎn)自美國Billegend公司)，在37℃下孵育約10 min，給予PBS沖洗，滴入由堿性磷酸酶標(biāo)記后的鏈霉卵白素，在37℃下孵育約20 min，給予PBS沖洗。再滴入配制好的DAB顯色液，6 min顯色后使用蒸餾水沖洗，由蘇木精復(fù)染，最后樹脂封片。

1.3效果評(píng)價(jià)〔3，4〕顯微鏡下取每張切片的5個(gè)視野進(jìn)行評(píng)價(jià)，TWIST染色結(jié)果通過染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞總數(shù)中所占的比例進(jìn)行評(píng)分。染色強(qiáng)度：無色計(jì)0分；淡黃色計(jì)1分；棕黃色計(jì)2分，黃褐色計(jì)3分。陽性細(xì)胞比例：≤10%計(jì)0分，11%~25%計(jì)1分，26%~50%計(jì)2分，51%~100%計(jì)3分。將上述兩項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相乘，乘積為0～3分計(jì)陰性，4分計(jì)以上計(jì)陽性。ERα的染色結(jié)果以細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)棕色顆粒記為陽性。

1.4觀察指標(biāo)觀察并比較TWIST與ERα在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，患者隨訪5年，記錄來院復(fù)診患者的病情變化，分析TWIST與ERα表達(dá)對(duì)乳腺癌患者近遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率及生存率的影響。收集患者病理資料(包括年齡、TNM分期、腫瘤直徑、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)，分析其與TWIST及ERα表達(dá)的關(guān)系，利用 Cox法對(duì)乳腺癌患者生存預(yù)后的影響因素進(jìn)行分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS15.0分析軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Cox分析。

2結(jié)果

2.1TWIST與ERα在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況比較TWIST在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率為77.14%(22例)，顯著高于癌旁組織的8.57%(3例)；ERα在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率為31.43%(11例)，顯著低于癌旁組織的74.29%(26例)(均P<0.05)。

2.2TWIST與ERα的表達(dá)對(duì)乳腺癌患者近遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率及生存率的比較由于 TWIST(-)ERα(-)例數(shù)過少，無代表性，因此未列入比較。TWIST(+)ERα(-)的5年復(fù)發(fā)率顯著高于其他各組，5年生存率顯著低于其他各組(P<0.05)。各組1年復(fù)發(fā)率及生存率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3患者病理資料與TWIST及ERα表達(dá)的關(guān)系分析低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者TWIST(+)ERα(-)的比例明顯高于中高分化及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=3.902，5.844,9.135,12.696；P=0.048，0.016，0.003，0.000)。不同年齡、TNM分期的乳腺癌患者TWIST與ERα的表達(dá)比例比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.4Cox法對(duì)乳腺癌患者生存預(yù)后的影響因素分析病理分級(jí)為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TWIST(+)ERα(-)均為乳腺癌患者預(yù)后生存的影響因素。見表3。

表1　TWIST與ERα的表達(dá)對(duì)乳腺癌患者近遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率及

與TWIST(+)ERα(+)比較:1)P<0.05；與 TWIST(-)ERα(+)比較:2)P<0.05

表2　患者病理資料與TWIST及ERα表達(dá)的

與中高分化比較:1)P<0.05；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較:2)P<0.05

表3　Cox法對(duì)乳腺癌患者生存預(yù)后的影響因素分析

3討論

近年來女性乳腺疾病發(fā)病率不斷攀升，乳腺癌發(fā)病年齡也呈年輕化趨勢，對(duì)女性日常生活造成影響，對(duì)其生命健康造成威脅〔5〕。乳腺癌具有極易發(fā)生轉(zhuǎn)移的典型生物學(xué)特性，研究表明〔6〕，乳腺癌在發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移這一系列活動(dòng)中，受到多種因素影響，其過程十分復(fù)雜，其中包含健康狀態(tài)乳腺上皮細(xì)胞受到誘導(dǎo)而轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)細(xì)胞，之后失控增殖形成原位癌，繼而原位癌出現(xiàn)脫離以及外侵現(xiàn)象，導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞發(fā)生定向轉(zhuǎn)移，最終在靶器官上進(jìn)行黏附并增殖。TWIST為堿性螺旋-環(huán)-螺旋類型轉(zhuǎn)錄因子，其在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。TWIST具有促使細(xì)胞移動(dòng)和組織重組功能，對(duì)胚胎發(fā)育起到關(guān)鍵作用，其能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生多種間充質(zhì)標(biāo)志物，幫助完成上皮和間質(zhì)之間的轉(zhuǎn)化，進(jìn)而促進(jìn)上皮來源的癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化成為間充質(zhì)細(xì)胞。TWIST過度表達(dá)會(huì)導(dǎo)致上皮細(xì)胞中的E-cadherin表達(dá)發(fā)生缺失或者喪失，引起間質(zhì)標(biāo)志物出現(xiàn)表達(dá)上升現(xiàn)象，提升細(xì)胞遷徙力〔7〕。同時(shí)，TWIST還會(huì)與E-cadherin中的啟動(dòng)子相結(jié)合，阻止其進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。此外，TWIST過度表達(dá)還會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡受到抑制，促使腫瘤進(jìn)一步惡化。因此，TWIST表達(dá)狀況可直接反映乳腺癌進(jìn)展情況，如其過度表達(dá)，則可預(yù)測出乳腺癌極可能已發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。

ERα屬于類固醇類型激素受體，為激素調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子中十分重要的組成部分。在對(duì)雌激素具有依賴性質(zhì)的乳腺癌細(xì)胞內(nèi)，雌激素會(huì)對(duì)癌細(xì)胞自身的分泌功能產(chǎn)生刺激作用，提升對(duì)其生長有刺激作用的因子水平，降低對(duì)其生長有抑制作用的因子水平，進(jìn)一步通過調(diào)節(jié)作用影響ERα等雌激素受體的水平。因此，雌激素和ERα等雌激素受體之間發(fā)生生物化學(xué)反應(yīng)可能直接關(guān)系到乳腺癌的產(chǎn)生及發(fā)展。

本研究表明TWIST與ERα在乳腺癌組織中存在表達(dá)異常。此外，本研究與Vesuna等〔8〕報(bào)道一致，說明TWIST(+)ERα(-)可能會(huì)促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展，影響患者預(yù)后。高表達(dá)TWIST對(duì)ERα的表達(dá)產(chǎn)生抑制，使得患者更易對(duì)治療方案產(chǎn)生不耐受，從而不利于預(yù)后生存。而病理分級(jí)為低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者由于癌癥病情較重，易導(dǎo)致其生存預(yù)后不良。Ouelaa-Benslama等〔9〕針對(duì)乳腺癌癌癥病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響患者的生存率作出了分析，與本文研究結(jié)果大體一致，但未涉及TWIST與ERα的表達(dá)情況，本文給予了補(bǔ)充，完善了研究結(jié)果。但須指出，樣本量較少是本次研究的短板。綜上，TWIST的高表達(dá)及ERα的低表達(dá)對(duì)乳腺癌患者的生存預(yù)后具有不利影響，臨床通過上檢測二者的表達(dá)情況，可評(píng)估患者的預(yù)后。

4參考文獻(xiàn)

1于丁,臧愛華,吳輝菁,等.乳腺癌干細(xì)胞通過上調(diào)Twist表達(dá)的上皮-間葉轉(zhuǎn)化參與腫瘤轉(zhuǎn)移〔J〕.腫瘤學(xué)雜志,2010；16(9):710-4.

2周明莉,唐石伏,張海龍,等.Twist促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞BT-549乳腺細(xì)胞小球形成及其遷移〔J〕.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2015；31(3):321-4.

3宋一民,朱雅萍,薛金慧,等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Twist和缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2014；31(10):2284-6.

4劉瑜,孫曉紅.Twist、Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路與女性相關(guān)腫瘤的關(guān)系〔J〕.社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志,2014；12(8):49-52.

5周明莉,楊佳佳,唐石伏,等.高表達(dá)Twist基因促進(jìn)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7干細(xì)胞樣細(xì)胞富集和遷移〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2014；36(20):2083-6.

6Tilghman SL,Townley I,Zhong Q,etal.Proteomic signatures of acquired letrozole resistance in breast cancer:suppressed estrogen signaling and increased cell motility and invasiveness〔J〕.Mol Cell Proteomics,2013；12(9):2440-55.

7Fu J,Zhang L,He T,etal.TWIST represses estrogen receptor-alpha expression by recruiting the NuRD protein complex in breast cancer cells〔J〕.Int J Biol Sci,2012；8(4):522-32.

8Vesuna F,Lisok A,Kimble B,etal.Twist contributes to hormone resistance in breast cancer by downregulating estrogen receptor-α〔J〕.Oncogene,2012；31(27):3223-34.

9Ouelaa-Benslama R,De Wever O,Hendrix A,etal.Identification of a GαGβγ,AKT and PKCα signalome associated with invasive growth in two genetic models of human breast cancer cell epithelial-to-mesenchymal transition〔J〕.Int J Oncol,2012；41(1):189-200.

〔2015-11-23修回〕

(編輯滕欣航)

〔中圖分類號(hào)〕R737.9

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)05-1128-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.049

通訊作者：張緯建(1955-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事放射腫瘤治療方面的研究。

1福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院影像科

第一作者：何清(1978-)，女，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤放射治療方面的研究。