摘要：基因工程抗體應(yīng)用于食品安全檢測(cè)還處于初級(jí)階段。但這種新型的抗體以其產(chǎn)量高、成本低且可塑性強(qiáng)得到了認(rèn)可?？梢姡蚬こ炭贵w在食品安全檢測(cè)中的重要作用，文章結(jié)合轉(zhuǎn)基因的相關(guān)原理對(duì)其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：基因工程；抗體；食品安全檢測(cè)

食品安全關(guān)系到人類健康，加強(qiáng)食品安全檢測(cè)十分必要?；蚬こ炭贵w被稱為第三代抗體，是一種DNA 重組技術(shù)，具有分子結(jié)構(gòu)小、成本低的特點(diǎn)，在食品安全中應(yīng)用廣泛，并且符合我國(guó)國(guó)情的需求。

一、基因工程抗體食品檢測(cè)原理

ELISA 檢測(cè)技術(shù)是依靠轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的抗原抗體反應(yīng)的高度特異性與酶的高效催化作用相結(jié)合的一種免疫分析方法。其基本原理是將受檢食品樣品的抗體在一定的程序下，與固相抗原、抗體結(jié)合形成復(fù)合物，固相載體中酶標(biāo)抗原、抗體被結(jié)合量將與標(biāo)本中待檢抗原、抗體的量成一定比例，復(fù)合物酶將參與的底物氧化或水解成有色物質(zhì)，該物質(zhì)的性質(zhì)發(fā)生變化。酶的降解底物和顯色之間成正相關(guān)，這樣通過肉眼觀察或使用光度計(jì)就可以確定食品內(nèi)是否還有未知抗原并能測(cè)試其含量?；蚬こ炭贵w先實(shí)現(xiàn)VH與VL的分離，然后實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增和連接構(gòu)成scFv，從而使抗體進(jìn)入真核細(xì)胞或原核細(xì)胞形成特異性抗體，以特異性的抗體為基礎(chǔ)ELISA 檢測(cè)技術(shù)就可以對(duì)食物中的污染物進(jìn)行檢測(cè)。

二、基因工程抗體種類及技術(shù)

基因工程抗體主要包括嵌合抗體、單鏈抗體、人源化抗體、雙特異性抗體。其中人類最先制作的抗體為嵌合抗體，該抗體以鼠源性抗體的V區(qū)基于與人類抗體的C 區(qū)基因抗體拼接為嵌合基因，之后插入載體，轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織表達(dá)的抗體分析。目前，這一技術(shù)已經(jīng)發(fā)達(dá)到一定程度，目前常見的嵌合抗體有CAMPATH - 1H、抗CD20和抗CD3基因抗體，單鏈抗體是將H 鏈和L 鏈的V 區(qū)基因相連。我國(guó)對(duì)基因工程技術(shù)十分重視，尤其是最近幾年，基因技術(shù)已經(jīng)不斷地發(fā)展和進(jìn)步?？贵w基因的克隆是這一時(shí)期的主要成果，主要出現(xiàn)了噬菌體表面、抗體基因的克隆及核糖體展示技術(shù)等。以噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)為例，這一技術(shù)是不再依賴于將雜交瘤技術(shù)，而是利用了模擬抗體的多樣性特征，噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)在原料商更加豐富，無論是雜交瘤、免疫或非免疫的動(dòng)物脾臟B 淋巴細(xì)胞都可成為這一技術(shù)的原料.其主要原理和過程是是從上述原料中提取出RNA，并進(jìn)一步純化出mRNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，利用RT - PCR 技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)容或擴(kuò)增，并將其以隨機(jī)組合的方式表達(dá)到載體上，從而形成并且擴(kuò)充轉(zhuǎn)基因人源性抗體。最后，將其與抗原結(jié)合的方法進(jìn)行篩選，獲得抗原特異抗體克隆。

三、基因工程抗體在食品安全檢測(cè)中應(yīng)用

（一）檢測(cè)食品中的毒素

食品中存在一定量的毒素，在一定的條件下會(huì)轉(zhuǎn)化，食用可造成人類死亡。因此基因工程的毒性檢查功能是確保人類健康的重要手段之一。首批基因工程抗體是從玉米的雜交瘤細(xì)胞株中提取的，命名為scFvQY1.5。scFvQY1.5 的線性范圍為10～325 ng/mL，在這一區(qū)間的毒性物質(zhì)均可以檢驗(yàn)。但基因抗體檢測(cè)與目前先進(jìn)的儀器檢測(cè)之間還存在一定的差距，還需要對(duì)基因工程的生成進(jìn)一步改良，如何找到一種方法可以確定異性抗體的功能是專家需要研究的問題。

（二）檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留

目前，幾乎所有的產(chǎn)品中使用農(nóng)藥，食品安全引發(fā)了人們的又一輪思考。食品中的農(nóng)藥殘留種類和數(shù)量甚至超過了人們的想象，其中包括食品中農(nóng)藥殘留主要包括擬除蟲菊酯類、有機(jī)磷類、三嗪類、有機(jī)氯類等?；诖?，基因工程中的農(nóng)藥檢測(cè)具有重要意義，并在我國(guó)市場(chǎng)中發(fā)展迅速。如近年來利用抗有機(jī)磷雜交瘤細(xì)胞6E2分離出VH（348bp）和VL（（321bp），用其連接產(chǎn)品為VH-（Gly4Ser）3。導(dǎo)入質(zhì)粒pLIP6 /GN，轉(zhuǎn)化BL21大腸桿菌，最后經(jīng)過誘導(dǎo)純化得到鏈抗體蛋白建立cdELISA。我們用試驗(yàn)的方式來檢測(cè)其作用。將5種相同量的有機(jī)農(nóng)藥放入等體積的水中，檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因cdELISA檢測(cè)出的農(nóng)藥含量與所放入的含量差距很小，并且通過不同農(nóng)藥反復(fù)試驗(yàn)證明了該轉(zhuǎn)基因工程產(chǎn)品在農(nóng)藥檢測(cè)中的作用。一些專家還從小白鼠中提出mRNA，用同樣的方法連接獲取了抗體，最后利用具體試驗(yàn)的方式證明了其在檢驗(yàn)農(nóng)藥中的可行性。由于農(nóng)藥為小分子抗原，因此在轉(zhuǎn)基因工程的提取上，要確保其強(qiáng)的特異性。目前，多采取擴(kuò)增VH 和VL 雜交瘤細(xì)胞的方式，取得了一定的效果，但仍然需要進(jìn)一步加強(qiáng)。

（三）檢測(cè)動(dòng)物性食品中的藥物殘留

不僅蔬菜、水果中含毒素，動(dòng)物在進(jìn)食和治療過程中亦可產(chǎn)生藥物殘留，使肉質(zhì)影響人體健康。動(dòng)物性食品中獸藥殘留近年來多次被報(bào)道出來，給民眾造成了恐慌，引起了政府部門的思考。建立高效的動(dòng)物性食品藥品殘留檢測(cè)機(jī)制十分必要。專家利用噬菌體展示技術(shù)以上述方法最終建立并提取了抗氧氟沙星單鏈抗體ELISA 檢測(cè)技術(shù)。其檢測(cè)范圍為1.43～ 4000ng/mL，具有實(shí)用性和可行性。利用瘤細(xì)胞AC2 分離出的VH 和VL，利用linker通過重疊延伸組裝VH 和VL，組裝后scFv 導(dǎo)入質(zhì)粒pLIP6 /GN，轉(zhuǎn)化為BL21 大腸桿菌，此項(xiàng)基因工程科用于檢測(cè)豬肉中的常見的鹽酸克倫特羅，其最低檢測(cè)值可至（0.02±0.004）ng/mL。該方法在理論上同HPLC-MS 之間成線性相關(guān)（ R2>0.99） ，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)動(dòng)物性食品中的藥物殘留，效果較好。另外一些專家利用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)所建立的抗體可檢測(cè)中動(dòng)物性食品中超過13 種磺胺類藥物的量，效果優(yōu)于普通儀器檢測(cè)。在一些動(dòng)物疫苗注射中，會(huì)殘留部分獸藥，獸藥同樣為小分子抗體，因此基因工程抗體的優(yōu)良程度就取決于細(xì)胞，而包括上述抗體在內(nèi)的多種基因工程已經(jīng)研發(fā)出來，其作用可見一斑。如何增強(qiáng)基因抗體對(duì)獸藥和其他藥物的靈敏度是專家需要研究的問題。

總結(jié)

食品安全涉及國(guó)計(jì)民生，我國(guó)食品安全檢測(cè)質(zhì)量偏低，因此基因工程食品檢測(cè)的研究具有重要意義。隨著分子生物學(xué)等現(xiàn)象學(xué)科的快速發(fā)展，基因工程抗體的提取成為可能，并且應(yīng)用于食品藥物檢測(cè)、食品毒素檢測(cè)中，取得了一定的效果。由于基因工程抗體成本低提取方便，符合我國(guó)國(guó)情，因此應(yīng)從需求出發(fā)對(duì)其進(jìn)行開發(fā)，以最大化發(fā)揮其在食品檢測(cè)中的作用。

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