摘 要 通過(guò)坡地種植不同品種白三葉，觀測(cè)其品種農(nóng)藝學(xué)性狀、物候表現(xiàn)，針對(duì)主要病害進(jìn)行病原菌的分離鑒定和大田化學(xué)防治試驗(yàn)，并對(duì)種植白三葉樣地的土壤取樣測(cè)定，研究白三葉種植對(duì)土壤的改良效果。結(jié)果表明，白三葉越夏過(guò)程中干旱和白絹病為致死的主要因素，白絹病病原為齊整小核菌，殺蟲(chóng)劑與殺菌劑復(fù)配噴施較適合于控制病情；幾個(gè)參試品種中‘CF022549’抗病蟲(chóng)害和景觀特性表現(xiàn)較佳；種植白三葉可在一定程度上改良土壤。

關(guān)鍵詞 白三葉；品比試驗(yàn)；物候期；病蟲(chóng)害；適應(yīng)性；坡地；綠化

中圖分類號(hào)：S541+.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.22.021

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白三葉（Trifolium repens L.）是世界上分布最廣、栽培最多的豆科牧草之一[1-2]，車(chē)軸草屬多年生草本，又名白車(chē)軸草、白花三葉草等。白三葉不僅可作牧草用于草地與畜牧業(yè)中，也兼有良好的綠化及水土保持功能[3-5]，同時(shí)也有報(bào)道研究其對(duì)銅、鎘、鉛重金屬污染土壤的修復(fù)作用[6-7]。本文研究幾種白三葉種質(zhì)材料在郴州坡地的生長(zhǎng)表現(xiàn)，以探討不同白三葉材料在坡地生長(zhǎng)的適應(yīng)性和對(duì)土壤的改良效果。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)于2014年3—11月進(jìn)行。試驗(yàn)地樣地位于湖南省郴州市白露塘鎮(zhèn)有色金屬加工園區(qū)內(nèi)。多年平均氣溫17.4℃，多年平均降水量1452.1 mm。

1.2試驗(yàn)材料

參試品種為7份具有代表性的白三葉種質(zhì)材料（表1）。

1.3試驗(yàn)方法

樣地為向陽(yáng)坡地，蓄水性較差，降雨較大時(shí)有較嚴(yán)重的沖刷。松土扦插三葉草莖段使各個(gè)品種成坪，定期觀察其生物學(xué)特征和土壤的干濕度，進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)護(hù)和物候性狀記錄。其中，成活覆蓋率、株高、葉長(zhǎng)，葉寬、初花期、盛花期、凋落期等物候性狀的觀測(cè)記錄參照NY/T1091-2006中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)草品種審定技術(shù)規(guī)程中的“豆科牧草及飼料作物觀測(cè)項(xiàng)目與記載標(biāo)準(zhǔn)”[8]。

針對(duì)白三葉生長(zhǎng)過(guò)程中最典型的病害，采用組織分離法接種分離病原菌，獲得病原菌的菌落后根據(jù)科赫準(zhǔn)則進(jìn)行回接以確定致病性[9]。根據(jù)菌落形態(tài)特征，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[9]進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。DNA的提取在CTAB法[10]的基礎(chǔ)上稍做改進(jìn)。引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增：PCR擴(kuò)增引物：ITS1 （5’-TCCGTAGGTGAACC TGCGG-3’），ITS4 （5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4 min；94℃變性1 min，56℃退火1 min，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；72℃終延伸10 min，擴(kuò)增樣于4℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物所測(cè)得序列提交到National Center for Biotechnology Information（NCBI）核酸數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)Blast程序，將ITS-rDNA序列與GeneBank中的核酸序列進(jìn)行對(duì)照，并找出最近似序列，分析序列相似程度。

成坪半年后，以對(duì)角線取樣法取覆蓋度較好的白三葉樣板地0～10 cm層土壤，取未種植白三葉土壤為對(duì)照，風(fēng)干粉碎后過(guò)100目篩，用凱氏定氮法測(cè)土壤全氮，用重鉻酸鉀外加熱法測(cè)有機(jī)質(zhì)含量，每個(gè)處理重復(fù)3次。

2結(jié)果與分析

2.1品種農(nóng)藝學(xué)性狀和物候差異

白三葉按葉片大小可分為大葉型、中葉型和小葉型幾種。白三葉葉片大小會(huì)受環(huán)境條件的影響，不同生長(zhǎng)環(huán)境、不同季節(jié)表現(xiàn)不一，但不同品種間的差異性是穩(wěn)定的。幾種參試材料中，海發(fā)、021613、02485、02478均為大葉型，00605為小葉型，022549、00858為中葉型。試驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，海發(fā)生長(zhǎng)狀況是幾種三葉草之中最差的，葉片大小較其他報(bào)道的結(jié)果相對(duì)較小，匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)度也相對(duì)較?。ū?）。

白三葉為淺根性草種，其生長(zhǎng)速度受季節(jié)、溫度變化的影響。春季氣溫在20～26℃時(shí)，進(jìn)入快速生長(zhǎng)期；夏季高于30℃時(shí)，白三葉生長(zhǎng)緩慢，高溫時(shí)部分植株會(huì)進(jìn)入半休眠狀態(tài)。夏季持續(xù)高溫和干旱會(huì)導(dǎo)致葉片邊緣焦黃，長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)有降水時(shí)，草坪會(huì)出現(xiàn)萎蔫枯死。秋冬季節(jié)氣溫回落，白三葉苗也逐漸返青?；ㄆ诰哂写呵飪杉荆ū?），均在返青期內(nèi)。當(dāng)年物候表現(xiàn)為春季快速生長(zhǎng)期開(kāi)花較多，秋冬季開(kāi)花較少，大葉型品種花期較小葉型品種長(zhǎng)，可能與營(yíng)養(yǎng)水平、病蟲(chóng)害影響有關(guān)。

圖1為3—6月白三葉的生長(zhǎng)情況及覆蓋度變化，可見(jiàn)其在3—6月可迅速生長(zhǎng)成坪。7—9月高溫干旱期和病蟲(chóng)害爆發(fā)是導(dǎo)致草坪斑禿的主要因素。海發(fā)、021613等大葉型品種夏季死亡率相對(duì)較高，覆蓋度較差。觀察表明，各個(gè)品種中，較耐旱、抗病蟲(chóng)害、成坪效果好、覆蓋率高的品種為CF022549。

2.2病蟲(chóng)害防治

入夏后氣溫升高，濕度變大，不少白三葉由莖及葉出現(xiàn)一定程度的萎蔫，莖部褐化腐爛（圖2），并偶爾可見(jiàn)白色菌絲和菌核，初步診斷為白絹病。由于田間有不少蝗蟲(chóng)、蠐螬、夜蛾類、跳甲等害蟲(chóng)為害白三葉，造成不少傷口，使白絹病更容易在短期內(nèi)迅速擴(kuò)散，草坪出現(xiàn)一塊塊黑色禿斑。

取典型病樣進(jìn)行組織分離獲得病原菌菌株，菌絲為白色絹絲狀，有隔膜和分枝，菌株為圓形菌落，呈放射狀擴(kuò)展（圖2），10 d后菌落上菌絲集結(jié)產(chǎn)生菌核。菌核球形，先呈白色后漸變?yōu)楹稚瑑?nèi)部灰白色，表面光滑且具光澤，直徑為0.5～0.8 mm。根據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》和相關(guān)文獻(xiàn)[11-13]，查閱檢索，確定該菌為半知菌亞門(mén)小菌核屬真菌。用菌株對(duì)健康白三葉植株進(jìn)行回接，病株表現(xiàn)明顯的萎蔫和腐爛，莖部有放射狀白色菌絲和菌核，與田間病株癥狀一致，未接種的對(duì)照植株上無(wú)發(fā)病癥狀，表明該菌株確為白絹病病原菌。

經(jīng)分子鑒定，病原菌ITS序列與GenBank中JQ340325.1序列具有99%的同源性，結(jié)合形態(tài)與分子，鑒定白三葉白絹病病原菌為羅氏阿太菌（Athelia rolfsii），無(wú)性世代為齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）。

蟲(chóng)害造成植株出現(xiàn)較多傷口，一定程度上加速了白絹病的病情蔓延，且白絹病為土傳病害，本身較難根除。先后采用了百菌清、多菌靈、代森錳鋅等多種殺菌劑、殺蟲(chóng)劑，及其復(fù)配的方式對(duì)白三葉草坪進(jìn)行病蟲(chóng)害防治。其中，噴施綠福（高效氯氰菊酯）+國(guó)光代森錳鋅可初步控制病情，抑制病害擴(kuò)散。入秋后氣溫下降，降水減少，病蟲(chóng)害危害情況也逐漸緩解。

2.3白三葉種植對(duì)土壤的改良作用

白三葉根系上有較多根瘤，可固氮、改良土壤。同時(shí)白三葉生長(zhǎng)速度快，生物量大，其老葉殘?bào)w逐漸分解至土壤中，增加土壤的有機(jī)質(zhì)含量。

試驗(yàn)結(jié)果表明，種植白三葉半年的土壤全氮、有機(jī)質(zhì)較對(duì)照土壤存在顯著差異，種植白三葉半年的土壤全氮含量和有機(jī)質(zhì)含量顯著升高（表4），而成坪效果較好的白三葉品種間無(wú)顯著性差異。土壤全氮、有機(jī)質(zhì)含量均有一定程度的升高，表明種植白三葉對(duì)貧瘠板結(jié)的土壤有一定改良作用。

3結(jié)論與討論

白三葉為多年生植物，生長(zhǎng)速度快，較適合應(yīng)用于綠化。但由于其抗旱性、耐熱性較差，夏季會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)速度慢的休眠階段，對(duì)土傳白絹病抗性差，單一草種的白三葉草坪較容易出現(xiàn)成片死亡，影響綠化效果。這也是導(dǎo)致應(yīng)用白三葉進(jìn)行綠化防護(hù)的邊坡工程在夏季容易出現(xiàn)變黃枯萎的因素。但白三葉在田間經(jīng)由昆蟲(chóng)授粉，可結(jié)實(shí)并自播，較快地生長(zhǎng)復(fù)壯成坪，且種植白三葉可在一定程度上改良土壤，增加土壤氮素和有機(jī)質(zhì)含量，因此白三葉較適合作為先鋒草種與其他慢生性植物用于坡地綠化。

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（責(zé)任編輯：丁志祥）