于立杰，陳　雨，張盼盼，張　文

(中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院風濕免疫科 風濕免疫病學教育部重點實驗室， 北京 100730)

ChinJAllergyClinImmunol，2016，10(4)：346- 350

IgG4相關疾病(IgG4-related disease，IgG4-RD)是一種新近被命名的慢性炎癥性自身免疫性疾病，主要表現(xiàn)為受累臟器的腫大，血清中IgG4漿細胞增多，組織中IgG4陽性漿細胞浸潤為主要特點，其臨床疾病譜廣泛，可累及淋巴結、鼻竇、淚腺，頜下腺，腮腺、肺臟、胰腺、腹膜后組織、膽管、前列腺等多個器官或組織[1- 3]。該病的病因尚不清楚，目前認為包括三方面：基因易感性、感染的分子模擬機制、免疫系統(tǒng)(包括固有免疫和適應性免疫)紊亂[4]。對疾病相關易感基因的研究較少，日本報道 人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)-DRB1*0405和DQB1*0401可能與疾病發(fā)病相關[5]。本研究擬探討我國IgG4-RD患者HLA-DR、HLA-DQ基因與疾病的相關性。

對象和方法

對象

北京協(xié)和醫(yī)院IgG4-RD前瞻性隊列研究患者91例，診斷符合2011年IgG4-RD全面診斷標準(Comprehensive diagnostic criteria for IgG4-RD 2011)[6]：(1)臨床檢查顯示一個或多個器官特征性彌漫/局灶性增大或腫塊；(2)血清IgG4水平增高(≥1.35 g/L)；(3)組織病理學檢查顯示大量淋巴、漿細胞浸潤和纖維化，以及IgG4陽性漿細胞浸潤(IgG4陽性漿細胞/IgG陽性漿細胞>40%，IgG4陽性漿細胞>10個/高倍視野)。明確診斷：(1)+(2)+(3)；很可能診斷：(1)+(3)；可能診斷：(1)+(2)[6]，并除外其他自身免疫性疾病和惡性腫瘤。對照組為年齡和性別匹配的100例健康查體者。該研究經北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會批準，入組者簽署知情同意書。

方法

采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)法檢測。

DNA提取：取300 μl抗凝全血，采用離心柱法提取全血DNA。

序列特異性引物-聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)基因分型：按照上海偉和生物公司HLA-DR、DQ試劑盒操作步驟進行。

儀器：ABI 9700 基因擴增儀、Thermo Heraeus Pico 17離心機、大龍掌上離心機D1008E、其林貝爾掌上離心機LX- 100、SBP Select旋渦振蕩器、奧豪斯先行者CP512型電子天平、天能EPS300電泳儀、天能2500凝膠成像系統(tǒng)、Eppendorf可調式移液器、Thermo NanoDrop 2000分光光度計、Milli-Q Advantage A10超純水機。

統(tǒng)計學處理

所有數據采用SPSS 17.0軟件分析，HLA-DR、DQ出現(xiàn)頻率通過累計每個等位基因出現(xiàn)的次數計算；實驗組與對照組基因出現(xiàn)頻率比較采用卡方檢驗，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結　　果

一般情況

91例IgG4-RD患者，男64例，女27例，平均年齡(52±13)歲；對照組男性57例，女性43例，平均年齡(48±15)歲；與對照組相比，試驗組性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義。

91例IgG4-RD患者臟器受累情況

最常見受累器官為頜下腺、淋巴結，均為58%；其次為淚腺和胰腺，分別為51%和32%；垂體、胃腸道受累較少，為1%(表1)。

HLA-DR、DQ在IgG4-RD及對照組中表達情況

與對照組比較，IgG4-RD患者中HLA-DRB1*03(13%vs. 5%，χ2=3.94，P=0.047)表達率顯著增高；HLA-DRB1*09 表達率顯著降低(16%vs. 33%，χ2=6.91，P=0.009)；按照器官受累部位比較，29例IgG4相關自身免疫性胰腺炎(autoimmune pancreatitis，AIP)患者HLA-DRB1*03(28%vs. 5%，χ2=10.29，P=0.001)、HLA-DRB1*08(31%vs. 13%，χ2=3.97，P=0.046)表達率顯著升高，HLA-DRB1*09(0vs. 33%，χ2=12.86，P=0.04)表達率顯著下降；19例膽道受累患者中，HLA-DRB1*09(0vs. 33%，χ2=8.68，P=0.002)表達率顯著下降；53例頜下腺受累患者中HLA-DRB1*07(32%vs. 17%，χ2=4.55，P=0.033)、HLA-DQB1*02(36%vs. 20%，χ2=4.58，P=0.032)表達率顯著升高；HLA-DRB1*09(15%vs. 33%，χ2=5.66，P=0.017)、HLA-DRB1*14(3%vs. 15%，χ2=4.42，P=0.036)表達率顯著下降；46例淚腺受累患者中，HLA-DRB1*03(17%vs. 5%，χ2=4.53，P=0.033)、HLA-DQB1*02(37%vs. 20%，χ2=4.79，P=0.029) 表達率顯著升高；26例腮腺受累患者中HLA-DRB1*04(38%vs. 19%，χ2=4.41，P=0.008)、HLA-DRB1*07(35%vs. 17%，χ2=3.91，P=0.048)、HLA-DQB1*02(38%vs. 20%，χ2=3.88，P=0.049)表達率顯著升高，HLA-DRB1*09(12%vs. 33%，χ2=4.66，P=0.031)表達率顯著下降；20例腹膜后受累患者中HLA-DRB1*08(35%vs. 13%，χ2=4.33，P=0.037)表達率顯著升高；HLA-DRB1*09(10%vs. 33%，χ2=4.27，P=0.039)表達率顯著下降；20例肺部受累患者中HLA-DRB1*04(40%vs. 19%，χ2=10.74，P=0.001)表達率顯著升高；19例泌尿系統(tǒng)受累患者中HLA-DRB1*08(37%vs. 13%，χ2=4.90，P=0.027)表達率顯著升高；HLA-DRB1*09(11%vs. 33%，χ2=3.88，P=0.049)表達率顯著下降；16例前列腺受累患者中HLA-DRB1*09(6%vs. 33%，χ2=6.02，P=0.014)表達率顯著下降；53例淋巴結受累患者中HLA-DRB1*09(11.3%vs. 33%，χ2=8.57，P=0.003)表達率顯著下降；26例鼻竇受累患者中HLA-DRB1*03(23%vs. 5%，χ2=6.35，P=0.012)、HLA-DRB1*07(46%vs. 17%，χ2=9.90，P=0.002)、HLA-DRQ1*02(54%vs. 20%，χ2=6.59，P=0.001)表達率顯著升高；HLA-DRB1*09(8%vs. 33%，χ2=12.0，P=0.01)表達率顯著下降；余HLA-DR、DQ基因亞型表達差異無統(tǒng)計學意義。

表1　IgG4-RD患者臟器受累情況Table 1　Organ involvement in patients with IgG4-RD

討　　論

本研究發(fā)現(xiàn)IgG4-RD患者中HLA-DRB1*03表達率顯著增加，考慮為疾病易感基因；DRB1*09 表達率顯著降低，考慮為疾病保護基因，按照臟器損害分組，發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*09在IgG4相關胰腺、膽道、頜下腺、腮腺、腹膜后、泌尿系、前列腺、淋巴結及鼻竇受累患者中表達率顯著下降，考慮該基因亞型為上述臟器保護基因；HLA-DRB1*14在IgG4相關頜下腺受累中表達率顯著下降，考慮為頜下腺損傷保護基因；HLA-DQB1*02在IgG4相關頜下腺、淚腺、腮腺、鼻竇受累患者中表達率顯著升高，考慮與頜下腺、淚腺、腮腺、鼻竇損傷易感基因；HLA-DRB1*03在IgG4相關胰腺、淚腺、鼻竇受累中表達率顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；HLA-DRB1*04在IgG4相關腮腺、肺部受累中表達率顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；HLA-DRB1*07在IgG4相關頜下腺、腮腺、鼻竇受累患者中表達率顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；HLA-DRB1*08在IgG4相關胰腺、腹膜后、泌尿系受累中顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；由此得出，在國內人群中，DRB1*03高表達，DRB1*09基因的表達缺失考慮可能與IgG4-RD的易感性有關，且基因表達頻率的不同，其損傷臟器亦不相同。其他HLA-DR、DQ基因亞型分析尚未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義。

IgG4-RD的發(fā)病機制目前尚不清楚，可能有多因素參與本病的發(fā)生和發(fā)展，包括基因、環(huán)境、遺傳機制。在該病與HLA基因相關性研究方面，早在2002年，日本學者Kawa等[5]對IgG4相關AIP進行了研究，該研究納入AIP患者40例，健康對照201例，發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*0405和DQB1*0401表達頻率顯著升高，認為該基因增加了疾病的易感性。但2013年同樣一項來自日本的研究發(fā)現(xiàn)，在1對患有AIP的兄妹中，并未發(fā)現(xiàn)DRB1*0405和DQB1*0401的表達，得出AIP可能是由多種基因參與的疾病[7]。一項關于AIP的研究發(fā)現(xiàn)[8]，HLA-DRB1*0701和DQB1*0202增加了該疾病的易感性；來自中國中臺灣的研究報道顯示，在中國患者中CTLA- 4 49A 多態(tài)性和-318C/+49A/CT60G單倍體與AIP 相關[9]。然而，以上兩項研究均集中在AIP易感基因的研究，且研究例數較少，有一定的局限性。本研究以IgG4-RD不同臟器損傷分類，探討了IgG4-RD相關疾病不同臟器損傷可能的易感基因，而這種分類方法在國內外尚未有報道。本研究發(fā)現(xiàn)IgG4相關疾病HLA-DR、DQ基因亞型國外報道不一致，考慮與種族差異有關。

目前針對HLA個別基因對于疾病危險性方面尚缺乏基于人口基數遺傳免疫學的研究，但該研究策略可在嚙齒類動物體中實現(xiàn)[10]，且在AIP的小鼠模型HLA易感基因方面已有大量的研究[11- 14]，但由于小鼠HLA等位基因與人類存在差異，因此這些研究所得結論與人類實際情況也有差異。

本研究發(fā)現(xiàn)IgG4相關疾病HLA-DR、DQ基因亞型與國外報道不一致，考慮有以下可能：(1)種族差異；(2)既往報道主要針對AIP患者，而本研究是收集多種器官受累的患者；(3)本研究樣本量相對較少。

本研究從免疫遺傳學角度初步探討了IgG4-RD與人類白細胞抗原-DR、DQ等位基因的相關性，為進一步研究IgG4-RD發(fā)病機制提供了初步理論依據，但本研究納入病例數較少，存在一定的局限性，且尚未對有意義的基因亞型進行高分辨分析，需要進一步探討。

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