李高俊++佟延南++符一凡++蒲利云++楊明秋

摘要：研究百安威、樂多源活菌、EM菌等3種有益微生物劑與凡納濱對蝦育苗效果的關系，篩選育苗使用效果最佳的微生物制劑種類以及科學的使用方法。結(jié)果顯示：百安威最佳投放濃度為6 mg/L，成苗率達到28.0%；樂多源最佳投放濃度為7 mg/L，成苗率達到24.8%；EM菌最佳投放濃度為7 mg/L，成苗率達到23.3%；而對照組成苗率僅為12.5%。與對照組相比，投喂百安威、樂多源活菌、EM菌等3種有益微生物劑的凡納濱對蝦成苗率分別提高15.5%、12.3%、10.8%。其中，投喂百安威的育苗效果最好。3種微生物生物制劑在對蝦育苗過程中投放3～4次效果較佳。

關鍵詞：凡納濱對蝦；育苗；有益微生物制劑；百安威；樂多源活菌；EM菌；成活率

中圖分類號：S968.22+9.12 文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2016）02-0288-03

收稿日期：2014-12-29

基金項目：海南省科學事業(yè)費項目（編號：KYYS-2014-51、KYYS-2013-23）；海南省重大科技項目。

作者簡介：李高俊（1982—），男，海南萬寧人，碩士，助理工程師，主要從事水生動物增養(yǎng)殖研究。E-mail：tyn171575140@163.com。

通信作者：佟延南，碩士，工程師，主要從事水生動物增養(yǎng)殖、病害研究。E-mail：150599790@qq.com。凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）別稱南美白對蝦，具有適應環(huán)境能力強、營養(yǎng)要求低、生長速度快、出肉率高、營養(yǎng)豐富和養(yǎng)殖產(chǎn)量高等優(yōu)點。凡納濱對蝦苗種是海南省海水養(yǎng)殖的主要產(chǎn)業(yè)，2012年產(chǎn)凡納濱對蝦苗種約599.79億尾，年產(chǎn)值約6億元，其中50%苗種供應省外養(yǎng)殖場，經(jīng)濟社會效益十分顯著。

有益微生物物制劑的應用，不僅能保護沿海海洋環(huán)境，而且能大幅提高對蝦養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。因此，國家大力提倡水產(chǎn)品的綠色無公害養(yǎng)殖，隨著宣傳力度的加大，健康養(yǎng)殖的理念已深入人心，由此涌現(xiàn)出生態(tài)養(yǎng)殖、生態(tài)控制、生物防治等一批新技術和新理念，這其中使用最廣泛的就是利用有益微生物制劑特別是有益微生物的一系列特性，將其應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的水質(zhì)調(diào)控、營養(yǎng)添加、疾病防治等方面取得了顯著效果[1-2]。

當前，海南省絕大多數(shù)對蝦育苗場采用定期潑灑有益微生物調(diào)控水質(zhì)，但是使用有益微生物制劑種類多樣化，并且投放濃度與時間均不一致，尚無標準化的使用方法。本研究選擇當前較普遍使用的百安威、樂多源活菌、EM菌等3種有益微生物劑，分別觀察不同濃度對育苗效果的影響，篩選出每次潑灑的最佳濃度；篩選3種有益微生物制劑最佳使用濃度之后，在對蝦育苗過程中使用最佳濃度進行不同投放次數(shù)比較試驗，探索有益微生物制劑的最佳使用次數(shù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1凡納濱對蝦幼體來源親蝦為從美國夏威夷引進后繁育的子1代蝦苗養(yǎng)成，體長18～20 cm、體質(zhì)量37～41 g/尾。雌蝦采取切除右側(cè)眼球催熟，催熟期間以沙蠶、魷魚和牡蠣為餌料，調(diào)控水溫為30～32℃，每天投餌2次、換水1次。當雌性背部出現(xiàn)桔黃色生殖腺，雄性第5步足基部出現(xiàn)乳白色精莢時，傍晚把雌蝦與雄蝦放進同一個交配池進行交配，然后將已交配雌親蝦放于產(chǎn)卵池產(chǎn)卵，受精卵孵化的無節(jié)幼體經(jīng)抽樣計數(shù)后，放養(yǎng)于育苗水槽中育苗。幼體為從美國夏威夷引進親蝦的子2代無節(jié)幼體。

1.1.2有益微生物制劑來源選擇當前海南省凡納濱對蝦育苗最常用的百安威活菌、樂多源活菌和EM菌等3種有益微生物制劑為試驗材料。其中，百安威為固體顆粒狀，主要成分以芽孢桿菌及其代謝物為主；樂多源活菌為固體粉狀，主要成分為乳酸桿菌、枯草桿菌、乳酸球菌；EM菌為稀釋液體，主要成分為雙岐菌、乳酸菌、芽孢桿菌、光合細菌、酵母菌、放線菌、醋酸菌等。

1.1.3育苗設施藍色不透光的孵化桶為育苗容器，容積約為0.5 m3。孵化桶上方有塑料板頂棚遮雨設施，每個孵化桶放置1個散氣石充氣。

1.1.4育苗用水水源水質(zhì)應符合GB11607—1989《漁業(yè)水質(zhì)標準》的規(guī)定，育苗使用的海水應經(jīng)沉淀、沙濾凈化處理后使用。海水鹽度2.8%～3.5%，pH值7.8～8.5，化學耗氧量1 mg/L以下，氨態(tài)氮含量0.05 mg/L以下，溶解氧含量 5 mg/L 以上。

1.2試驗方法

1.2.1試驗分組

1.2.1.1不同濃度微生物制劑對凡納濱對蝦育苗效果試驗3種有益微生物制劑各設立4、5、6、7、8 mg/L等5個試驗濃度，每個濃度設2組平行試驗組，以未投放微生物制劑為對照組。微生物制劑在育苗階段投放3次[試驗組投放微生物制劑的是根據(jù)蝦苗變態(tài)來決定的，投放時間是在幼體入池前、蚤狀幼體Ⅲ期（Z3）和糠蝦幼體Ⅲ期（M3）]。觀察各試驗組對蝦各個發(fā)育階段的成活率，培育仔蝦5期（P5）成苗數(shù)量。

1.2.1.2不同投放次數(shù)微生物制劑對凡納濱對蝦育苗效果試驗以篩選出的3種微生物制劑最佳使用濃度為投放濃度，設立3種不同的投放次數(shù)[試驗1是育苗過程中幼體入池前和蚤狀幼體Ⅲ期時投放微生物制劑，共2次；試驗2是育苗過程中幼體入池前、蚤狀幼體Ⅲ期和糠蝦幼體Ⅲ期時投放微生物制劑，共3次；試驗3是育苗過程中幼體入池前、蚤狀幼體Ⅲ期、糠蝦幼體Ⅲ期及仔蝦Ⅰ期（P1）時投放微生物制劑，共4次]，每種投放次數(shù)設2組平行試驗。

1.2.2苗種培育方法

1.2.2.1育苗水槽消毒育苗水槽采用60 mg/L 高錳酸鉀消毒，然后用干凈淡水洗干凈。

1.2.2.2育苗用水育苗用水為沙濾池過濾的海水，海水鹽度3.2%。

1.2.2.3溫度調(diào)控育苗水體用加熱棒控溫，無節(jié)幼體（N期）調(diào)控水溫30.0～30.5℃，蚤狀幼體期（Z期）30.5～31.0℃，糠蝦幼體期（M期）31.0～32.0℃，仔蝦期（P期）31.0～32.0℃。

1.2.2.4充氣無節(jié)幼體培育充氣狀態(tài)水體呈微波狀，蚤狀幼體培育充氣狀態(tài)水體呈弱沸騰狀，糠蝦幼體培育充氣狀態(tài)水體呈沸騰狀，仔蝦培育充氣狀態(tài)水體呈強沸騰狀。

1.2.2.5光照條件采用遮陽網(wǎng)調(diào)節(jié)光照度，無節(jié)幼體和蚤狀幼體平共處階段調(diào)控光照度為500 lx，糠蝦幼體光照度為1 000 lx，仔蝦為5 000 lx。

1.2.2.6水質(zhì)調(diào)控無節(jié)幼體、蚤狀幼體、糠蝦幼體不加水、不換水，仔蝦Ⅰ期（P1）加水10 cm，仔蝦Ⅱ期（P2）開始換水，每天換水1次，每次換10%左右。育苗期間水質(zhì)指標變化情況：氨態(tài)氮（NH3-N）濃度0.7～3.2 mg/L，亞硝態(tài)氮（NO2-N）濃度0.06～0.16 mg/L，pH值7.4～8.2，溶氧量6～9 mg/L。

1.2.2.7餌料及其投喂蚤狀幼體Ⅰ期開始投餌，每天分別于00：00、06：00、11：00、15：00、19：00投餌5次。（1）蚤狀幼體投餌。以螺旋藻為主，蝦片、黑粒、ZM（海水類蛋白質(zhì)和脂類）和BP為輔。每次投餌量如下：蚤狀幼體Ⅰ期，螺旋藻1 mg/L，蝦片、黑粒、ZM各0.5 mg/L；蚤狀幼體Ⅱ期，螺旋藻 2～3 mg/L，蝦片和黑粒各1 mg/L，ZM和BP各0.5 mg/L；蚤狀幼體Ⅲ期，螺旋藻2～3 mg/L，蝦片1 mg/L，黑粒、ZM和BP各0.5 mg/L。（2）糠蝦幼體投餌。當蚤狀幼體變態(tài)為糠蝦幼體后停止投喂螺旋藻，改為以蝦片、車元（日本對仔蝦配合飼料）、ZM和BP等為餌料，投喂過程中逐步增加蝦片、車元和BP的投喂量，ZM則減少。每次投餌量如下：糠蝦幼體Ⅰ期，蝦片、車元和ZM各2 mg/L，BP 1 mg/L；糠蝦幼體Ⅱ期，蝦片和BP各2 mg/L，車元2～3 mg/L，ZM 1 mg/L；糠蝦幼體Ⅲ期，蝦片3 mg/L，BP 2 mg/L，車元2～4 mg/L，ZM 1 mg/L。（3）仔蝦投餌。從糠蝦變態(tài)為仔蝦后停止投喂ZM，以蝦片、車元、BP和鹵蟲無節(jié)幼體為餌料，仔蝦時的蝦苗已經(jīng)具備了成蝦的基本特征，可以自主游動和用附肢抓住食物覓食，每天 09：00、21：00投喂活體鹵蟲無節(jié)幼體。每次投餌量如下：仔蝦期，蝦片4～6 mg/L、車元3～5 mg/L、BP 2 mg/L及鹵蟲無節(jié)幼體6～10 mg/L。

1.2.3幼體、對蝦成活率的計算方法計算各階段幼體、仔蝦成活率時，在育苗水槽中稍加大充氣量，使幼體或仔蝦均勻分布于水槽中，用250 mL燒杯在水槽不同位置取樣5次，計算平均數(shù)量，然后根據(jù)育苗水體計算出成活率：成活率=成活幼體或仔蝦數(shù)量/投放幼體數(shù)量×100%。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度微生物制劑對凡納濱對蝦育苗效果

由表1可以看出，使用百安威微生物制劑后，試驗組的對蝦仔蝦（P5期，下同）成活率比對照組都有不同程度的提高，且差異顯著（P<0.05）。因為百安威的主要成分是芽孢桿菌，試驗的結(jié)果與Rengpipat等在斑節(jié)對蝦（Penaeus monodon）餌料中添加芽孢桿菌制劑，提高其成活率的結(jié)果[3]一致。其中，濃度為4、5 mg/L 的仔蝦成活率較對照組分別提高12.4、13.3百分點，但2個濃度之間的成活率差異不顯著（P>0.05）；濃度為6、7、8 mg/L 仔蝦成活率較對照組分別提高15.5、15.3、15.6百分點，但3個濃度之間的成活率差異不顯著（P>0.05）。建議選用濃度為6 mg/L 百安威。

使用樂多源微生物制劑后，試驗組的對蝦仔蝦成活率比對照組都有不同程度的提高，且差異顯著（P<0.05）。樂多源的主要成分是乳酸桿菌、枯草桿菌等，而朱學芝等發(fā)現(xiàn)，在餌料中添加乳酸桿菌、枯草桿菌等制劑均可促進對蝦顯著生長（P<0.05）[4-5]。在本試驗中，濃度為4、5 mg/L仔蝦成活率較對照組分別提高5.3、5.4百分點，但2個濃度之間差異不顯著（P>0.05）；濃度為6 mg/L的仔蝦成活率較對照組提高8.4百分點；濃度為7、8 mg/L仔蝦成活率較對照組分別提高12.3、12.1百分點，2個濃度之間差異不顯著（P>0.05）。建議凡納濱對蝦育苗過程投放濃度為7 mg/L的樂多源較適宜。

使用EM菌微生物制劑后，試驗組的對蝦仔蝦成活率比對照組都有不同程度的提高，且差異顯著（P<0.05）。肖珊等在飼料中添加EM菌，使有益菌定植在對蝦消化道內(nèi)并形成優(yōu)勢種群，排斥病原菌，降低發(fā)病率，提高仔蝦成活率[6]。在本試驗中，濃度為7、8 mg/L的仔蝦成活率提高率較大，較對照組分別提高10.8、10.7百分點，但2個濃度之間差異不顯著（P>0.05）。建議選用濃度為7 mg/L的EM菌。

2.2不同投放次數(shù)微生物制劑對凡納濱對蝦育苗效果觀察

由表2可以看出，在投喂不同次數(shù)的試驗中，3種微生物制劑的試驗2和試驗3較試驗1差異顯著（P<0.05），但試驗2和試驗3差異不顯著（P>0.05）。建議凡納濱對蝦育苗過程投放微生物制劑3～4次較適宜，可達到提高幼體育苗成苗率的目的。

3結(jié)論與討論

3.1有益微生物制劑有利于減少對蝦育苗的病害

微生物制劑的成分包含蛋白質(zhì)、多種氨基酸、維生素及一些微量元素，本身就具有對蝦幼體所需的很高的營養(yǎng)價值。投放有益微生物制劑，由于有益微生物與病原體間有拮抗作用，一方面有益微生物在育苗水體中大量繁殖，可有效抑制病原體的繁殖；另一方面蝦苗攝取了水體中的微生物制劑后，有益微生物在對蝦幼體、仔蝦消化道中繁殖，可抑制幼體、仔蝦體內(nèi)的有害菌群的繁殖，從而減少和預防疾病的發(fā)生。

眾所周知，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中水質(zhì)的好壞嚴重影響水產(chǎn)生物的成活率，而幼體在變態(tài)成長過程中一定會有相當?shù)拇x物，而且投喂餌料的過程中也會有一定的餌料殘留，這些都會對水體造成一定程度上的污染，使水環(huán)境惡化（最基本和常見的就是pH值和NH3-N濃度），導致對蝦幼體、仔蝦出現(xiàn)病害甚至死亡。而投放有益、有利于分解育苗水體有機物，緩解了pH值的降低，有效地抑制了NH3-N濃度升高?？梢?，對蝦對減少對蝦育苗病害和提高蝦苗質(zhì)量具有積極作用。

3.2 微生物制劑對保護海洋生態(tài)與提高養(yǎng)殖效益的作用

對蝦育苗潑灑有益微生物制劑，利用有益微生物分解育苗水體的殘餌、糞便等有機物，凈化育苗水體質(zhì)量，大量減少對蝦育苗的換水量，從而大幅減少育苗廢水排入海區(qū)。潑灑有益微生物對育苗水體病原細菌繁殖具有較好的抑制作用，減少育苗病害的發(fā)生，提高對蝦幼體培育成活率和蝦苗質(zhì)量，為海南省內(nèi)外對蝦養(yǎng)殖戶提供優(yōu)質(zhì)養(yǎng)殖苗種，大量減少養(yǎng)殖病害，同時大幅減少因?qū)ξr養(yǎng)殖病害的發(fā)生而造成的“排塘”現(xiàn)象，對保護海洋生態(tài)與提高養(yǎng)殖效益均具有積極作用。

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