李欽青， 柴金苗， 郭 蕾

（山西中醫(yī)學院，山西晉中030619）

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HPLC法同時測定復方天麻鉤藤口腔崩解片中3種成分

李欽青， 柴金苗， 郭 蕾*

（山西中醫(yī)學院，山西晉中030619）

摘要:目的 采用HPLC法同時測定復方天麻鉤藤口腔崩解片（天麻、鉤藤、白芍、當歸）中天麻素、芍藥苷和阿魏酸的含有量。方法 該藥物50％甲醇提取物的分析采用C18反相色譜柱；流動相為乙腈-0.1％磷酸水溶液，梯度洗脫；檢測波長為230 nm（天麻素、芍藥苷）和320 nm（阿魏酸）。結(jié)果 天麻素、芍藥苷、阿魏酸分別在0.153～1.377 μg、0.298 6～2.687 4 μg、0.022 68～0.204 12 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為98.4％、97.9％、97.4％。結(jié)論 該方法可用于復方天麻鉤藤口腔崩解片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞:復方天麻鉤藤口腔崩解片；天麻素；芍藥苷；阿魏酸；HPLC

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.017

KEY W 0RDS: Fufang Tianma Gouteng Ora11y Disintegrating Tab1ets；gastrodin；Paeonif1orin；feru1ic acid；high Performance 1iquid chromatogram（HPLC）

復方天麻鉤藤口腔崩解片是根據(jù)臨床有效方劑研制而來，主要由天麻、鉤藤、白芍、當歸等藥味組成，具有通絡止顫、養(yǎng)血斂陰、平肝潛陽、息風止痙等功效。目前，應用HPLC法測定中藥復方中的天麻素、芍藥苷和阿魏酸的文獻較多［1-4］，但對三者的同時測定尚未見報道。本實驗采用HPLC法，同時測定復方天麻鉤藤口腔崩解片中天麻素、芍藥苷、阿魏酸的含有量，可為更好地評價該藥物提供一定參考。

1 藥物、試劑與儀器

復方天麻鉤藤口腔崩解片（自制，批號20120301、20120302、20120303）。天麻素（批號110807-200205）、芍藥苷（批號110736-200833）、阿魏酸（批號110773-200611）對照品（中國食品藥品檢定研究院）。乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。

Agi1ent1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；PL6001-S、AL204、AB135-S電子天平（瑞士Mett1er To1edo公司）；KQ-500E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Kromasi1C18色譜柱（4.6 mm× 200 mm，5 μm）；0.05％磷酸溶液（A）-乙腈（B）為流動相，梯度洗脫（0→10 min，3％ B；10→12 min，3％→14％B；12→40 min，14％B）；檢測波長為0→28 min時230 nm（天麻素、芍藥苷），28→40 min時320 nm（阿魏酸）；體積流量1.0 mL/min；進樣量20 μL；柱溫30℃。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素、芍藥苷和阿魏酸對照品適量，加50％甲醇制成對照品貯備液（天麻素質(zhì)量濃度為765 μg/mL、芍藥苷質(zhì)量濃度為1 493 μg/mL、阿魏酸質(zhì)量濃度為113.4 μg/mL）。精密量取1.0 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得（天麻素質(zhì)量濃度為30.6 μg/mL、芍藥苷質(zhì)量濃度為59.72 μg/mL、阿魏酸質(zhì)量濃度為4.536 μg/mL）。2.3 供試品溶液的制備 取復方天麻鉤藤口腔崩解片（20120301）10片，研細，精密稱取1 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50 mL，稱定重量，超聲（250 W、40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性供試品溶液的制備 按復方天麻鉤藤口腔崩解片的生產(chǎn)工藝，分別制備缺天麻、白芍、當歸的陰性制劑，缺天麻的陰性制劑，缺白芍的陰性制劑，缺當歸的陰性制劑，并按“2.3”項下方法制備陰性供試品溶液，HPLC色譜圖見圖1。

1.天麻素 2.芍藥苷 3.阿魏酸1.gastrodin 2.Paeonif1orin 3.feru1ic acid圖1　HPLC色譜圖Flg.1 HPLC chromatogram s

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2”項下對照品貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，置于50 mL量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，分別進樣10 μL，測得峰面積，計算回歸方程。結(jié)果表明，天麻素、芍藥苷和阿魏酸分別在0.153～1.377 μg、0.298 6～2.687 4 μg、0.022 68～0.204 12 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程分別為y=2 272.3 x-6.561（r=0.999 9）、y=2 782.2 x+ 5.929 5（r=0.999 95）、y=4 991.2x-0.638（r=0.999 9）。

2.6 精密度試驗 精密吸取“2.2”項下對照品溶液10 μL，在“2.1”項色譜條件下連續(xù)進樣6次。結(jié)果，三者RSD分別0.43％、0.62％、0.56％，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取“2.3”項下供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h在“2.1”項色譜條件下測定6次。結(jié)果，三者RSD分別0.59％、0.68％、0.73％，表明溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 取同一批號樣品，按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下測定。結(jié)果，三者RSD分別1.2％、1.1％、1.5％，表明該方法重復性良好。

2.9 加樣回收試驗 取復方天麻鉤藤口腔崩解片（20120301）30片（天麻素、芍藥苷、阿魏酸的含有量分別為0.78、4.71、0.074 mg/mL），研細，精密稱取6份，每份0.5 g，置于具塞錐形瓶中，每份分別加入78.5 μg/mL天麻素對照品5 mL、465.8 μg/mL芍藥苷對照品5 mL、7.3 μg/mL阿魏酸對照品5 mL，按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進行測定，計算平均加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1　回收率試驗結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests

2.10 含有量測定 取3批樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下測定，每批樣品平行3次，記錄峰面積，代入標準曲線，計算天麻素、芍藥苷和阿魏酸的含有量，結(jié)果見表2。

表2　3種成分含有量測定結(jié)果（n=3）Tab.2 Determ lnatlon results of the contents of three constltuents（n=3）

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法的考察 參考文獻［5-6］，分別采用50％、70％、100％甲醇，進行超聲以及加熱回流提取。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用50％甲醇，超聲提取30 min時效果最好。

3.2 流動相的選擇 參考文獻［7-9］，采用梯度洗脫分離多個成分，以節(jié)省分析時間。另外，考察不同比例的乙腈-磷酸、甲醇-磷酸溶液系統(tǒng)，最終確定以乙腈-0.05％磷酸溶液為流動相。在該梯度洗脫系統(tǒng)下，樣品中天麻素、芍藥苷和阿魏酸的分離度好，出峰時間較快。

3.3 檢測波長的確定 參考文獻［10-11］，采用紫外檢測器，在230 nm處檢測天麻素、芍藥苷，在320 nm處檢測阿魏酸，發(fā)現(xiàn)這3種成分的分離度、峰形均較好。另外，天麻素的檢測波長亦可以選擇在220 nm處［12-13］，此時三者均有最大的響應值，但雜質(zhì)峰也較大。因此，檢測波長最終確定為230 nm（天麻素、芍藥苷）、320 nm（阿魏酸）。

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Slmultaneous determ lnatlon of three constltuents ln Fufang Tlanma Gouteng 0 rally Dlslntegratlng Tablets by HPLC

LIQin-qing， CHAIJin-miao， GUO Lei*
（Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Jinzhong 030619，China）

ABSTRACT:AIM To deve1oP an HPLCmethod for simu1taneous1y determining the contents of gastrodin，Paeonif1orin and feru1ic acid in Fufang Tianma Gouteng Ora11y Disintegrating Tab1ets（Gastrodiae Elatae Rhizoma，Uncariae Ramulus cum Uncis，Paeoniae Lactilorae Radix and Angelicae Sinensis Radix）.METH 0DS The ana1ysis of 50％ methano1ic extract of this drugwas Performed on C18ODS co1umn，mobi1e Phasewas acetonitri1e-0.1％ PhosPhoric acid with gradient e1ution，and detection wave1engthswere set at230 nm for gastrodin and Paeonif1orin，and 320 nm for feru1ic acid.RESULTS Gastrodin，Paeonif1orin and feru1ic acid disP1ayed good 1inear re1ationshiPswithin the ranges of0.153 -1.377 μg，0.298 6 -2.687 4 μg and 0.022 68 -0.204 12 μg，and their average recoverieswere 98.4％，97.9％ and 97.4％，resPective1y.C0NCLUSI0N Thismethod can be aPP1ied to the qua1ity contro1of Fufang Tianma Gouteng Ora11y Disintegrating Tab1ets.

*通信作者:郭 蕾（1968—），女，博士，教授，博士生導師，從事中醫(yī)基礎理論研究。Te1:（0351）3179842，E-mai1: g1qz1123@ 163.com

作者簡介:李欽青（1978—），男，碩士，講師，從事中藥藥效物質(zhì)及新藥研究。Te1:（0351）3179903，E-mai1: 1qq1qq@126.com

基金項目:國家自然科學基金資助項目（81173165）；太原市科學技術(shù)局資助項目（11014918）

收稿日期:2015-09-25

中圖分類號:R927.2

文獻標志碼:A

文章編號:1001-1528（2016）02-0315-04