謝智文，曹艷杰，何怡寧，李和鳴，戴錦龍，張志鵬，韋　平，韋天超，磨美蘭

(廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530005)

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干擾素刺激基因在雞傳染性支氣管炎病毒感染雛雞氣管黏膜中表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化

謝智文△，曹艷杰△，何怡寧，李和鳴，戴錦龍，張志鵬，韋平，韋天超，磨美蘭*

(廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530005)

摘要：為了解雞干擾素刺激基因(ISG)在雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)感染雛雞氣管黏膜中的表達(dá)情況，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IBV M41株感染SPF雞后不同時(shí)相氣管黏膜中β干擾素(IFN-β)和干擾素刺激基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平和IBV病毒載量變化。結(jié)果顯示，雞氣管黏膜中IFN-β和干擾素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在感染后(DPI)第1～14天顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)上調(diào)，且均在5DPI達(dá)到峰值；雞氣管黏膜中IBV病毒載量在1DPI急劇升高，在5DPI達(dá)到峰值，14DPI病毒載量急劇下降。結(jié)果表明，IFN-β、干擾素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5 mRNA轉(zhuǎn)錄水平與IBV病毒載量變化趨勢一致，提示IFN-β、干擾素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5在抵御IBV入侵、抑制IBV復(fù)制、增殖以及病毒清除中發(fā)揮重要作用。試驗(yàn)結(jié)果豐富了宿主抗IBV感染的固有免疫應(yīng)答機(jī)制，為IBV感染的預(yù)防和控制提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：雞傳染性支氣管炎病毒；氣管黏膜；干擾素刺激基因；β干擾素；病毒載量

干擾素是動(dòng)物機(jī)體抵抗病原感染的第一道防線，在抑制病毒復(fù)制、調(diào)控機(jī)體免疫功能和抑制惡性細(xì)胞癌變中發(fā)揮重要作用[1]。病毒侵入機(jī)體后可激活宿主抗病毒固有免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[2-5]，而Ⅰ型干擾素可結(jié)合其受體IFNAR1和IFNAR2，激活JAK-STAT信號通路，啟動(dòng)數(shù)以百計(jì)的干擾素刺激基因(interferon stimulated genes,ISG)的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[6]。這些ISG表達(dá)的產(chǎn)物可進(jìn)一步促進(jìn)機(jī)體的抗病毒效應(yīng)。一些ISG作用于病毒生命周期的多個(gè)環(huán)節(jié)，通過進(jìn)一步誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生增強(qiáng)宿主的抗病毒效應(yīng)[6]。

黏病毒抗性蛋白(Myxovirus resistance proteins,Mx)、蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)、2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(2'-5'-oligoadenylate synthetase,OAS)、病毒抑制蛋白(virus inhibitory protein，Viperin)、干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白3(interferon induced transmembrane 3,IFITM3)和干擾素誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白5(IFN-induced protein with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)均為常見的ISG。研究表明，雞Mx有多種形態(tài)，對流感病毒和水皰性口炎病毒有抗病毒活性，其中Mx第631位氨基酸的C末端決定雞Mx的抗病毒活性[7]，但Benfield C T O等[8-9]發(fā)現(xiàn)Mx并不參與雞抗流感病毒的作用。PKR與TLRs、RIG-I/MDA5功能相似，可識(shí)別細(xì)胞內(nèi)dsRNA，在TLR介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答中具有重要作用[10]。OAS是細(xì)胞質(zhì)中一種干擾素誘導(dǎo)酶，也可識(shí)別胞內(nèi)dsRNA。已有研究表明,雞OAS具有很好的抗病毒活性[11]。目前關(guān)于Viperin的抗病毒機(jī)制不是很明確，而關(guān)于雞Viperin的具體功能還未見報(bào)道。FITM3是宿主抑制病毒入侵的第一個(gè)因子。Smith S E等[12]發(fā)現(xiàn),敲除IFITM3基因的雞成纖維細(xì)胞對甲型流感病毒易感，證明了雞IFITM3可以抑制甲型流感病毒的感染。IFIT5也稱為ISG58，是雞IFIT家族唯一的成員。Zhang B等[13]發(fā)現(xiàn)IFIT5部分定位于線粒體與RIG-I和MAVS相互作用，可增強(qiáng)固有免疫信號通路來增強(qiáng)抗病毒效應(yīng)，表明IFIT5是一種重要的固有免疫應(yīng)答增強(qiáng)子。研究表明，雞在IBDV、AIV和IBV感染的初始階段，Mx、PKR、OAS和IFIT5顯著上調(diào)[2,4,14-15]，表明Mx、PKR、OAS和IFIT5在抵御多種病毒感染中發(fā)揮重要作用。

IBV可引起感染雞呼吸道黏膜、腎臟等器官不同程度的損傷，造成蛋雞產(chǎn)蛋量、蛋品質(zhì)及肉雞生產(chǎn)效益的下降，嚴(yán)重地影響?zhàn)B禽業(yè)的健康發(fā)展。IBV基因組易變，血清型眾多,且不同血清型之間免疫交叉保護(hù)效果差[16-17]，給該病防控帶來了困難。目前關(guān)于IBV感染對宿主ISG基因表達(dá)的影響的報(bào)道較少。氣管作為IBV入侵門戶，是家禽黏膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分，研究IBV感染后氣管黏膜ISG轉(zhuǎn)錄的變化,有利于分析IBV感染對宿主抗病毒能力的影響。因此，本研究對IBV M41株感染SPF雞后氣管黏膜中IFNβ和 Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3及IFIT5等ISG的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和IBV病毒載量變化進(jìn)行研究，旨在探討IBV感染對氣管黏膜ISG基因表達(dá)的影響，揭示宿主抗IBV感染的天然免疫應(yīng)答機(jī)制，為IBV感染的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)和新思路。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與病毒SPF雞蛋,北京梅里亞維公司產(chǎn)品，于孵化箱內(nèi)孵化21 d，獲得1日齡SPF雛雞；IBV M41(AV1511)，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所產(chǎn)品，使用前測定其EID50為10-10.6/0.1 mL。

1.1.2主要試劑及儀器實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(IQ5型)，Bio-Rad公司產(chǎn)品；微量蛋白核酸分析儀，Biochrom公司產(chǎn)品；低溫高速離心機(jī)，Eppeddorf公司產(chǎn)品；總RNA抽提試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Premix ExTaqⅡ，TaKaRa公司產(chǎn)品；其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)將孵化獲得的48羽1日齡SPF雛雞飼養(yǎng)至14日齡，隨機(jī)分為2組，每組24羽。A組為試驗(yàn)組，用0.2 mL，106EID50/0.1 mL的IBV M41病毒液通過點(diǎn)眼滴鼻途徑進(jìn)行攻毒。B組為對照組，用等量陰性尿囊液進(jìn)行點(diǎn)眼滴鼻。攻毒后，每天觀察試驗(yàn)組和對照組雞的臨床癥狀。在攻毒后1、3、5、8、11、14、21、28 d每組隨機(jī)取3羽雞，安樂死后無菌采集氣管，置-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2氣管組織總RNA抽提及cDNA合成參照總RNA抽提試劑盒說明書提取氣管組織總RNA，并按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，保存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR

1.2.3.1引物的設(shè)計(jì)根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫公布的Viperin(GenBank登錄號：EU427332.1)、IFITM3(GenBank登錄號：KC876032)和IFIT5(GenBank登錄號：XM-421662)的mRNA序列，針對這些基因保守區(qū)利用Primer5.0及Oligo7.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物。IFNβ、Mx和TBP引物參考本課題組已建立的方法[18]，PKR和OAS的引物參考已發(fā)表論文[19-20]，其中TBP為內(nèi)參基因(表1)。引物由廣州六合華大基因科技股份有限公司合成。

表1　引物序列

1.2.3.2雞氣管組織ISG基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測IFN-β和Mx基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平根據(jù)本課題組建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法[18]。Viperin、IFITM3、IFIT5和PKR基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性30 s；95℃ 5 s，60℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)；每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)檢測熒光；熔解曲線分析：95℃ 0.5 s，65℃ 20 s；最后50℃ 30 s結(jié)束，OAS實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系為：95℃預(yù)變性30 s；95℃ 5 s，62℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)；每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)檢測熒光；熔解曲線分析：95℃ 0.5 s，65℃ 20 s；最后50℃ 30 s結(jié)束。反應(yīng)體系總體積為20 μL，包括SYBR Premix ExTaqⅡ 10 μL，上、下游引物各0.5 μL，樣品cDNA 1 μL，Viperin、IFITM3、IFIT5和PKR基因重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)準(zhǔn)品由本課題組構(gòu)建)各1 μL，Nase-free water 8 μL。

1.2.3.3雞氣管組織中IBV病毒載量的檢測根據(jù)本課題組建立的方法[21]對IBV M41株感染后雞氣管組織中IBV病毒載量進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測。

1.2.4數(shù)據(jù)分析

1.2.4.1IBV病毒載量檢測結(jié)果分析將試驗(yàn)所得Ct值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算拷貝數(shù)，應(yīng)用SPSS 22軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，應(yīng)用GraphPad Prism 6軟件作圖。

1.2.4.2mRNA轉(zhuǎn)錄水平數(shù)據(jù)處理將所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用REST 2009軟件分析，根據(jù)軟件分析后得到的相對表達(dá)倍數(shù)，取表達(dá)倍數(shù)log2值，應(yīng)用GraphPad Prism 6軟件作圖。

2結(jié)果

2.1IBV M41株感染后臨床癥狀及剖檢病變

2DPI試驗(yàn)組部分雞出現(xiàn)輕微咳嗽、甩頭，4DPI～10DPI精神沉郁、羽毛雜亂，出現(xiàn)典型的啰音、頻繁甩頭、張口呼吸、咳嗽等，11DPI臨床癥狀開始減輕，14DPI臨床癥狀基本消失，21DPI雞群恢復(fù)正常。對照組在整個(gè)動(dòng)物試驗(yàn)過程中精神狀態(tài)及采食均正常，未出現(xiàn)任何明顯變化。

剖檢可見試驗(yàn)組雞氣管在3DPI和5DPI出現(xiàn)明顯黏液，腎臟無明顯病變。整個(gè)試驗(yàn)過程中對照組雞氣管和腎臟均無明顯病變。

2.2IBV M41株感染后氣管組織病毒載量變化

檢測結(jié)果顯示，試驗(yàn)組雞氣管組織中病毒載量在1DPI～11DPI快速增加，5DPI達(dá)到峰值，病毒拷貝數(shù)為4.8×105copies/μL。8DPI～11DPI病毒仍然維持在較高水平。14DPI病毒載量急劇下降，病毒拷貝數(shù)為5.95 copies/μL。對照組雞氣管組織中未檢測到IBV(圖1)。

2.3IBV M41感染雞后氣管組織中IFN-β mRNA轉(zhuǎn)錄水平變化

IBV M41人工感染雞后，與對照組相比，試驗(yàn)組雞氣管組織中IFN-β mRNA轉(zhuǎn)錄水平在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)表現(xiàn)為上調(diào)，在1DPI和8DPI表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P<0.05)，在3DPI、5DPI、11DPI和21DPI極顯著上調(diào)(P<0.01)，在5DPI達(dá)到峰值，28DPI表現(xiàn)為下調(diào)(圖2)。

圖1　雞感染IBV M41后氣管組織中IBV載量

圖2　攻毒后不同時(shí)間IFN-β的mRNA轉(zhuǎn)錄水平

2.4IBV M41感染雞后干擾素刺激基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平變化

結(jié)果表明，與對照組相比，試驗(yàn)組雞氣管組織中Mx在1DPI-14DPI表現(xiàn)為極顯著上調(diào)(P<0.01)，且在5DPI其mRNA轉(zhuǎn)錄水平達(dá)到峰值，相對表達(dá)倍數(shù)為35.30倍。PKR在3DPI～11DPI、21DPI和28DPI表現(xiàn)為極顯著上調(diào)(P<0.01)，14DPI表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P<0.05)，其mRNA轉(zhuǎn)錄水平在5DPI達(dá)到峰值，表達(dá)倍數(shù)為18.66倍。OAS在3DPI～21DPI表現(xiàn)為極顯著上調(diào)(P<0.01)，其mRNA轉(zhuǎn)錄水平在5DPI達(dá)到峰值，表達(dá)倍數(shù)為17.84倍。Viperin在1DPI～11DPI表現(xiàn)為極顯著上調(diào)(P<0.01)，21DPI和28DPI表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P<0.05)，其mRNA轉(zhuǎn)錄水平在5DPI達(dá)到峰值，表達(dá)倍數(shù)為64.66倍。ITIF5在3DPI～14DPI表現(xiàn)為極顯著上調(diào)(P<0.01)，在21DPI表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P<0.05)，其mRNA轉(zhuǎn)錄水平在5DPI達(dá)到峰值，表達(dá)倍數(shù)為27.90倍。IFITM3在3DPI、5DPI、11DPI和14DPI表現(xiàn)為極顯著上調(diào)(P<0.01)，在1DPI和8DPI表現(xiàn)為顯著上調(diào)(P<0.05)，其mRNA轉(zhuǎn)錄水平在5DPI達(dá)到峰值，表達(dá)倍數(shù)為310.1倍(圖3)。

本研究結(jié)果顯示，人工感染IBV M41后，氣管組織中干擾素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在1DPI～28DPI均表現(xiàn)為上調(diào)，且多個(gè)時(shí)間點(diǎn)表現(xiàn)為顯著(P<0.05)或者極顯著(P<0.01)上調(diào)，極顯著上調(diào)主要集中在3DPI～14DPI，且這些ISG轉(zhuǎn)錄水平均在5DPI達(dá)到峰值。

圖3　攻毒后不同時(shí)間Mx(A)、PKR(B)、OAS(C)、Viperin(D)、IFITM3(E)和IFIT5(F)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平

3討論

ISG反應(yīng)是一種重要的且有效的抗病毒效應(yīng)機(jī)制。病毒侵入動(dòng)物機(jī)體后可被機(jī)體模式識(shí)別受體識(shí)別，激活機(jī)體抗病毒免疫應(yīng)答，刺激機(jī)體誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[5]，誘導(dǎo)ISG反應(yīng)，最終達(dá)到抗病毒效應(yīng)。了解病毒感染后宿主的ISG轉(zhuǎn)錄變化，對深入了解病毒的致病機(jī)制以及宿主抗病毒天然免疫具有非常重要的意義。

IFN-β屬于Ⅰ型干擾素，在抗病毒感染中發(fā)揮重要的作用。本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IBV M41株感染后，雞氣管組織中IFN-β mRNA相對表達(dá)動(dòng)態(tài)。結(jié)果顯示，IBV M41株感染后，與對照組相比，試驗(yàn)組雞氣管組織中IFNβ mRNA轉(zhuǎn)錄水平多個(gè)時(shí)間點(diǎn)顯著(P<0.05)或者極顯著(P<0.01)上調(diào)，表明IFNβ在抗IBV感染的早期發(fā)揮重要作用，這與Cong F和Pei J等[15,22]研究結(jié)果相一致。Vervelde L等[23]研究發(fā)現(xiàn),IBV M41接種5周齡SPF雞，攻毒后雞肺組織中IFN-α和IFN-β的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白含量沒有立即產(chǎn)生，這可能與接種日齡以及組織細(xì)胞類型不同等因素有關(guān)[24]。

Ⅰ型干擾素能誘導(dǎo)ISG的表達(dá)，ISG的表達(dá)可促進(jìn)更強(qiáng)的抗病毒效應(yīng)[6]。Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5均為重要的ISG。已有研究表明IFN-β可以誘導(dǎo)PKR、OAS和Mx等表達(dá)[2,4,12,25]，以抵抗各種病毒的感染。在IBV、IBDV和AIV感染的初始階段，雞Mx表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)[2,4-5,14]。He H等[10]發(fā)現(xiàn),PKR在TLR介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答中具有重要作用，PKR和OAS在IBDV和ALV感染初始階段的抗病毒效應(yīng)中發(fā)揮重要作用[2,4]。

本研究中，IBV M41感染SPF雞后，與對照組相比，試驗(yàn)組雞氣管組織中的Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)顯著(P<0.05)或者極顯著(P<0.01)上調(diào)，表明Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5在早期抵御IBV感染中發(fā)揮重要作用。Cong F等[15]研究發(fā)現(xiàn)，IBV ck/CH/LDL/091022株感染SPF雞后，雞腎臟組織中Mx、PKR、OAS和IFIT5顯著上調(diào)。Wang X等[14]研究發(fā)現(xiàn)，IBV Mass感染后，雞氣管組織中Mx顯著上調(diào)。結(jié)合前人研究和本研究結(jié)果，干擾素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5等可能對多種IBV毒株具有抗感染能力。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，IFNβ、Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平呈現(xiàn)一定的規(guī)律性變化，其mRNA轉(zhuǎn)錄水平先急劇上升，均在5DPI達(dá)到峰值，然后開始緩慢下降，表明Ⅰ干擾素在誘導(dǎo)ISG反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5基因 mRNA轉(zhuǎn)錄水平與IBV病毒載量變化趨勢一致，即IBV病毒拷貝數(shù)增加時(shí)，ISG mRNA轉(zhuǎn)錄水平相應(yīng)的升高， IBV病毒增殖受到抑制后，ISG mRNA轉(zhuǎn)錄水平也相應(yīng)降低，表明ISG在抗IBV感染中發(fā)揮重要的作用。

除了IFN-β、Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5與IBV病毒載量變化趨勢一致，本研究還發(fā)現(xiàn)，IBV病毒載量與臨床癥狀及剖檢病變也存在一定的相關(guān)性。本研究中，1DPI氣管IBV病毒載量均急劇上升，5DPI達(dá)到峰值，14DPI病毒載量急劇下降。臨床癥狀觀察表明，2DPI～10DPI雞群發(fā)病明顯，14DPI臨床癥狀基本消失。同時(shí)，3DPI～5DPI氣管病變最嚴(yán)重。因此氣管黏膜中IBV病毒載量與ISG轉(zhuǎn)錄水平、感染雞的臨床表現(xiàn)及剖檢病變均存在時(shí)間相關(guān)性。由此推測，IBV M41感染后第1～11天是機(jī)體抗IBV免疫應(yīng)答的關(guān)鍵時(shí)期，其中第5天尤為關(guān)鍵，在此時(shí)，應(yīng)用抗病毒藥物或免疫調(diào)節(jié)劑，對臨床治療IBV感染至關(guān)重要。本課題組早期對IBV GX-YL5進(jìn)行研究也發(fā)現(xiàn)，感染后第1～8天氣管黏膜和哈德氏腺的IBV病毒載量與感染雞的臨床表現(xiàn)、固有免疫相關(guān)受體及細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平存在時(shí)間相關(guān)性[26]。因此，IBV感染早期對宿主固有免疫應(yīng)答產(chǎn)生明顯的影響。

綜上所述，IBV M41株感染早期，雞氣管組織中IFN-β、Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)呈規(guī)律性變化，與病毒載量變化一致，與疾病進(jìn)程相關(guān)，表明Ⅰ型干擾素和這些ISG在抵御IBV入侵，抑制IBV復(fù)制、增殖以及病毒清除中發(fā)揮重要作用。因此，本研究豐富了宿主抗IBV感染的天然免疫應(yīng)答機(jī)制，為IBV感染的防控提供了理論依據(jù)。

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Dynamic Changes in Expression of Interferon Stimulated Genes in Trachea Mucosa of Chickens Infected with IBV

XIE Zhi-wen,CAO Yan-jie,HE Yi-ning,LI He-ming,DAI Jin-long,ZHANG Zhi-peng,WEI Ping,WEI Tian-chao,MO Mei-lan

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning,Guangxi,530005,China)

Abstract:In order to understand the expression of interferon stimulated genes(ISG) in trachea mucosa of chickens infected with infectious bronchitis virus (IBV),the mRNA transcription levels of IFN-β,interferon stimulated genes Mx,PKR,OAS,Viperin,IFITM3 and IFIT5,as well as IBV viral load in tracheae of chickens at different time points after infection with IBV M41 strain were detected by real-time PCR method in the present study.The results showed that the mRNA transcription levels of IFN-β and interferon stimulated genes Mx,PKR,OAS,Viperin,IFITM3 and IFIT5 were significant (P<0.05) or highly significant (P<0.01) up-regulation during 1DPI to 14DPI,and reached the peak also at 5DPI.The IBV viral load rose rapidly at 1 day post infection (DPI),and reached the peak at 5DPI, then decreased rapidly at 14 DPI.The present results revealed that change trend of the mRNA transcription levels of ISG was consistent with that of IBV viral load.FN-β and interferon stimulated genes Mx,PKR,OAS,Viperin,IFITM3 and IFIT5 played an critical role in resisting IBV invasion,suppressing the replication and proliferation of IBV as well as viral clearance.This study enriched the host innate immune response mechanism against IBV infection and provided theoretical basis for the prevention and control of IBV infection.

Key words:Infectious bronchitis virus;trachea mucosa;interferon stimulated gene;IFNβ;viral load

文章編號:1007-5038(2016)03-0019-06

中圖分類號:S852.657;S852.659.6

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

作者簡介：謝智文(1987-)，男，湖北赤壁人，碩士研究生，主要從事禽病學(xué)研究。曹艷杰(1991-)，女，河南開封人，碩士研究生，主要從事禽病學(xué)研究?！魍蓉暙I(xiàn)作者。*通訊作者

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360611)；廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014GXNSFDA118011,2013GXNSFCA019010)

收稿日期：2015-08-13