南文金，黃健強(qiáng)，胡鴻惠，吳靜波，彭國(guó)良

(1.韶關(guān)學(xué)院動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室，廣東韶關(guān) 512005；2.韶關(guān)學(xué)院英東農(nóng)業(yè)科學(xué)與工程學(xué)院，廣東韶關(guān) 512005；3.粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東韶關(guān) 512005)

?

獸醫(yī)臨床

某規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體水平的監(jiān)測(cè)

南文金1，3，黃健強(qiáng)1，3，胡鴻惠1，3，吳靜波1，3，彭國(guó)良2，3

(1.韶關(guān)學(xué)院動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室，廣東韶關(guān) 512005；2.韶關(guān)學(xué)院英東農(nóng)業(yè)科學(xué)與工程學(xué)院，廣東韶關(guān) 512005；3.粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東韶關(guān) 512005)

摘要：為了對(duì)某豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫效果做出評(píng)估并進(jìn)一步優(yōu)化免疫程序，應(yīng)用豬瘟疫苗抗體阻斷ELSIA檢測(cè)試劑盒對(duì)該場(chǎng)不同日齡仔豬及育肥豬的豬瘟疫苗抗體水平進(jìn)行檢測(cè),對(duì)抗體合格率、平均阻斷率和變異系數(shù)統(tǒng)計(jì)分析。檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，該豬場(chǎng)豬瘟免疫空白期過(guò)長(zhǎng)，疫苗免疫接種后抗體合格率較低，增加了感染豬瘟病毒的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟免疫程序的優(yōu)化。豬瘟疫苗抗體水平監(jiān)測(cè)對(duì)豬瘟防控具有重要意義，可為規(guī)模化豬場(chǎng)開展豬瘟疫苗抗體檢測(cè)，制定合理的免疫措施提供參考。

關(guān)鍵詞：豬瘟； 抗體水平；免疫程序;監(jiān)測(cè)

豬瘟(Classical swine fever, CSF)是一種高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病[1]。豬瘟是危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一，也是給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)?yè)p失最直接、危害最嚴(yán)重的疫病之一。20世紀(jì)50年代我國(guó)專家研制的豬瘟兔化弱毒疫苗株經(jīng)臨床應(yīng)用效果顯著，不少國(guó)家引進(jìn)該疫苗后消滅了豬瘟，為世界養(yǎng)豬業(yè)做出了巨大貢獻(xiàn)。目前，我國(guó)對(duì)豬瘟采取強(qiáng)制免疫措施，有效的防控了豬瘟的暴發(fā)，但經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展，豬瘟在我國(guó)至今沒有被消滅。

近些年，在高密度免疫下，經(jīng)典豬瘟的發(fā)生少有報(bào)道，出現(xiàn)了潛伏期長(zhǎng)、排毒周期長(zhǎng)、臨床癥狀不典型的非典型豬瘟，一旦發(fā)生，同樣影響豬場(chǎng)生產(chǎn)效益，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。研究證明，豬瘟兔化弱毒疫苗對(duì)當(dāng)前流行的豬瘟野毒株仍然有良好的保護(hù)作用，非典型豬瘟的發(fā)生和疫苗的免疫效果關(guān)系密切，因此對(duì)豬瘟疫苗抗體水平監(jiān)測(cè)，根據(jù)抗體水平變化制定科學(xué)的免疫程序，提高疫苗免疫效果對(duì)防控豬瘟發(fā)生具有重要意義[2]。本研究對(duì)某規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，通過(guò)抗體水平變化分析，對(duì)該豬場(chǎng)目前采取的豬瘟免疫程序科學(xué)性進(jìn)行合理評(píng)價(jià)并提出優(yōu)化方案，為豬場(chǎng)豬瘟疫苗抗體監(jiān)測(cè)與免疫程序優(yōu)化提供參考。

1材料與方法

1.1材料

血清樣本來(lái)自粵北某豬場(chǎng)，該場(chǎng)存欄基礎(chǔ)母豬900多頭。根據(jù)該豬場(chǎng)生產(chǎn)模式情況，分別選擇懷孕30 d～40 d的母豬；出生 6 d～8 d、15 d～17 d、20 d～23 d的哺乳仔豬；出生28 d～34 d、37 d～44 d、45 d～51 d、52 d～60 d的保育仔豬和出生61 d～69 d、70 d～82 d、83 d～90 d的育肥豬，每一階段(批)的豬群中隨機(jī)選擇10頭豬前腔靜脈采血3 mL～5 mL，共計(jì)110份血液樣品，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法分離制備血清，4℃冷藏待檢。豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，美國(guó)Idexx公司產(chǎn)品，批號(hào)：D361。

1.2方法

1.2.1豬瘟免疫接種信息調(diào)查 認(rèn)真調(diào)查該場(chǎng)豬瘟免疫程序，樣品采集時(shí)查看每一批次豬群的豬瘟疫苗詳細(xì)免疫接種記錄，包括免疫接種日期、疫苗生產(chǎn)廠家及規(guī)格、免疫接種劑量等免疫信息。

1.2.2豬瘟病毒抗體檢測(cè)按照美國(guó)Idexx公司豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行，檢測(cè)前試劑盒和檢測(cè)樣本恢復(fù)至室溫，試劑盒反應(yīng)步驟置于23℃恒溫箱中進(jìn)行孵育。

1.2.3試驗(yàn)成立條件及結(jié)果計(jì)算按照試劑盒要求，只有陰性對(duì)照的平均OD值大于0.500，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率大于50%時(shí)，該檢測(cè)結(jié)果才能有效。阻斷率=(陰性對(duì)照平均OD值-樣本OD值)/陰性對(duì)照平均OD值×100%。

1.2.4檢測(cè)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)如果被檢測(cè)樣本的阻斷率大于或等于40%，該樣本可以判斷為陽(yáng)性(有CSFV抗體存在)；如果被檢測(cè)樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本就可以判為陰性(無(wú)抗CSFV抗體存在)；如果被檢測(cè)樣本的阻斷率在30%～40%之間，則數(shù)據(jù)可疑，應(yīng)在數(shù)日后再對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行重測(cè)。如果被檢測(cè)樣本阻斷率大于等于50%，該樣品豬瘟抗體水平為合格，即能提供有效的保護(hù)力。

2結(jié)果

2.1該場(chǎng)豬瘟疫苗免疫接種信息調(diào)查

經(jīng)過(guò)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和查看該場(chǎng)豬群豬瘟疫苗免疫接種記錄，該場(chǎng)豬瘟疫苗一直使用某公司生產(chǎn)的ST豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)。母豬豬瘟的免疫程序?yàn)槠彰夂透ッ庖呓臃N相結(jié)合方式，即每年春秋兩季集中免疫接種2次，每窩仔豬斷奶當(dāng)天母豬再跟胎免疫接種1次，免疫接種劑量為4頭份/頭；商品代豬21日齡左右首免豬瘟疫苗1頭份，60日齡左右二免豬瘟疫苗2頭份。根據(jù)每批商品代豬群豬瘟免疫接種記錄可以詳細(xì)了解采樣時(shí)各個(gè)批次豬群的豬瘟免疫接種信息，準(zhǔn)確計(jì)算該豬群豬瘟疫苗距離首免和二免豬瘟疫苗的時(shí)間(表1)。

2.2母豬豬瘟疫苗抗體水平檢測(cè)結(jié)果

對(duì)采集的懷孕母豬豬瘟疫苗抗體檢測(cè)結(jié)果表明(表1)，該場(chǎng)懷孕母豬豬瘟疫苗抗體水平合格率達(dá)到100%，平均阻斷率為82.3%，變異系數(shù)為17.31%。

2.3哺乳仔豬豬瘟疫苗抗體水平結(jié)果

表1數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，哺乳仔豬高水平母源抗體維持到2周齡左右，仔豬在出生后1周齡左右(出生6日齡～8日齡)母源抗體平均阻斷率為70.0%，抗體陽(yáng)性率和合格率均為90%，在采集的15日齡～17日齡的仔豬樣品母源抗體水平平均阻斷率略有上升，達(dá)到71.3%，母源抗體陽(yáng)性率和合格率還能達(dá)到90%，采集的20日齡～23日齡哺乳仔豬豬瘟病毒母源抗體抗體水平開始下降，抗體平均阻斷率為66.0%，抗體陽(yáng)性率和合格率下降到70%。

2.4豬瘟疫苗免疫接種后抗體水平變化情況

研究分別采集了該場(chǎng)豬瘟疫苗首免后和二免后不同時(shí)間豬群樣本進(jìn)行豬瘟疫苗抗體水平檢測(cè)，表1顯示，豬瘟疫苗首免后抗體水平開始下降，抗體離散度增加。首免后5 d豬瘟疫苗抗體合格僅為40%，平均阻斷率為44.2%；首免后20 d抗體陽(yáng)性率為20%，抗體合格率為0，抗體水平平均阻斷率僅為27.9%；首免后26 d抗體陽(yáng)性率和合格率分別為20%和10%，平均阻斷率和免疫接種后20 d相比沒有明顯提升；首免后36 d阻斷率上升到39.5%，樣品陽(yáng)性率和合格率開始緩慢上升到40%和30%；豬瘟疫苗首免后45 d，二次免疫接種后6 d所采集的仔豬樣品豬瘟疫苗抗體陽(yáng)性率和合格率才分別上升到80%和70%，抗體水平平均阻斷率也達(dá)到62.9%，但較高水平豬瘟疫苗抗體并沒有維持較長(zhǎng)時(shí)間，在采集的出生83日齡～90日齡豬群樣品，即豬瘟二免后23 d，豬瘟疫苗抗體已經(jīng)下降到很低水平，雖然抗體陽(yáng)性率為50%，但合格率僅為10%。

2.5豬瘟疫苗免疫接種對(duì)豬群抗體水平變化的影響

將采集的該場(chǎng)商品代豬群豬瘟疫苗抗體陽(yáng)性率、合格率、平均阻斷率和變異系數(shù)以柱形圖進(jìn)行表示，對(duì)豬瘟疫苗兩次免疫接種前后抗體水平變化情況進(jìn)行比較分析，從圖1可以看出，在豬瘟疫苗首免前仔豬豬瘟母源抗體水平都維持在較高水平，抗體變異系數(shù)相對(duì)較低；仔豬進(jìn)行豬瘟疫苗首次免疫接種后，采集的各階段豬群樣品抗體陽(yáng)性率、合格率和平均阻斷率都迅速下降，抗體水平變異系數(shù)也呈增高趨勢(shì)，除首免后23 d，即出生45 d～51 d仔豬群抗體水平變異系數(shù)在30%左右外，其他日齡豬群抗體變異系數(shù)都在50%以上，其中首次免疫接種豬瘟疫苗后26 d(出生52 d～60 d豬群)，樣品抗體變異系數(shù)高達(dá)68.05%；首次免疫接種后45 d，二次免疫接種后6 d(出生70 d～82 d豬群)，抗體水平才明顯提高，抗體均勻度也顯著改善，抗體合格率達(dá)到70%，變異系數(shù)降低到30%以下；二次免疫接種后23 d(出生83 d～90 d豬群)采集的樣品豬瘟疫苗抗體水平再次降低，變異系數(shù)升高到50%以上。

2.6該豬場(chǎng)豬瘟免疫效果評(píng)價(jià)及免疫方案優(yōu)化

根據(jù)豬瘟疫苗抗體檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，該豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫程序不科學(xué)，21日齡左右首免時(shí)間過(guò)早，來(lái)自疫苗的抗原被高水平母源抗體中和了，少量的疫苗抗原無(wú)法刺激機(jī)體免疫反應(yīng)，導(dǎo)致母源抗體迅速下降而疫苗刺激機(jī)體抗體上升緩慢；間隔40 d左右進(jìn)行豬瘟疫苗二免時(shí)按常規(guī)免疫接種劑量進(jìn)行免疫操作，而此時(shí)一免產(chǎn)生的抗體正處于高峰，二次免疫接種的疫苗抗原再次被抗體中和，形成免疫復(fù)合物被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除，無(wú)法激活免疫記憶細(xì)胞啟動(dòng)體液免疫機(jī)制迅速產(chǎn)生疫苗抗體，導(dǎo)致二免后20多天豬瘟抗體水平不升反降。鑒于該豬場(chǎng)母豬豬瘟抗體水平較高，結(jié)合仔豬抗體檢測(cè)結(jié)果，可以采用30日齡～35日齡首次免疫接種豬瘟疫苗，60日齡～65日齡進(jìn)行豬瘟二次免疫接種，具體免疫效果還需進(jìn)一步監(jiān)測(cè)。

表1　豬瘟疫苗血清抗體水平統(tǒng)計(jì)結(jié)果

注：“-”未進(jìn)行免疫接種。

Note: "-"non vaccination.

圖1　豬瘟疫苗免疫接種對(duì)豬瘟抗體水平變化的影響

3討論

抗體監(jiān)測(cè)在豬瘟免疫效果評(píng)價(jià)及免疫程序制定中具有重要指導(dǎo)意義。國(guó)內(nèi)外學(xué)著建立了多種豬瘟疫苗抗體檢測(cè)方法，目前應(yīng)用最廣泛的ELISA是美國(guó)Idexx公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，該試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)中，阻斷率大于等于40%為豬瘟疫苗抗體陽(yáng)性，但根據(jù)阻斷率和病毒中和試驗(yàn)間關(guān)系研究結(jié)果，該試劑盒檢測(cè)豬瘟疫苗抗體阻斷率達(dá)到50%時(shí)的豬瘟疫苗抗體水平相當(dāng)于中和抗體滴度1∶32，此水平的中和抗體水平才對(duì)豬群具有保護(hù)力[3]，實(shí)際生產(chǎn)中要以阻斷率大于50%作為豬瘟疫苗抗體合格標(biāo)準(zhǔn)。一些利用該試劑盒進(jìn)行豬瘟疫苗抗體檢測(cè)研究的報(bào)道中以陽(yáng)性率(阻斷率大于40%)來(lái)作為判斷抗體是否合格的標(biāo)準(zhǔn)不能反應(yīng)豬群豬瘟疫苗抗體真實(shí)水平。本研究圖1顯示，豬瘟疫苗抗體陽(yáng)性率和合格率有時(shí)差異較大，在某些階段豬群中，豬瘟疫苗抗體陽(yáng)性率達(dá)到50%，但抗體合格率卻很低，甚至為0。因此，在利用Idexx公司豬瘟疫苗抗體阻斷ELISA監(jiān)測(cè)抗體是要以阻斷率達(dá)到50%為判斷抗體合格的最低標(biāo)準(zhǔn)，阻斷率大于40%小于50%只代表抗體陽(yáng)性，不代表中和抗體能抵抗豬瘟野毒侵襲[4]。

豬瘟疫苗抗體水平檢測(cè)數(shù)據(jù)的科學(xué)分析是評(píng)價(jià)豬群豬瘟疫苗免疫效果的前提。豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫抗體合格率高于90%，變異系數(shù)母豬豬群小于25%，商品豬群小于30%是比較理想狀態(tài)[4]。本試驗(yàn)監(jiān)測(cè)的該豬場(chǎng)豬瘟疫苗抗體數(shù)據(jù)表明，該場(chǎng)母豬群豬瘟免疫接種效果較好，豬瘟疫苗抗體合格率為100%，抗體阻斷率超過(guò)80%，變異系數(shù)小于20%，但商品代豬群豬瘟疫苗首免以后抗體下降迅速，抗體離散度較大，變異系數(shù)都高于50%，免疫空白期超過(guò)1個(gè)月，保育豬群風(fēng)險(xiǎn)較高。慕國(guó)輝等[5]在對(duì)仔豬豬瘟免疫相關(guān)因素系統(tǒng)研究后證實(shí)，高水平母源抗體對(duì)豬瘟疫苗首免影響顯著，首免后豬瘟抗體上升率和上升幅度和母源抗體水平呈負(fù)相關(guān)。本研究檢測(cè)的21日齡左右豬群豬瘟疫苗母源抗體水平還比較高，而此時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗免疫接種是導(dǎo)致保育階段豬群豬瘟抗體水平不理想的主要原因。

規(guī)模養(yǎng)豬是以群體免疫接種而不是個(gè)體免疫的理念進(jìn)行疫苗免疫接種，在進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)時(shí)的抽樣方式要代表一個(gè)群體的免疫狀態(tài)，只有這樣檢測(cè)的數(shù)據(jù)才能對(duì)生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。在針對(duì)特定豬場(chǎng)豬瘟疫苗抗體監(jiān)測(cè)研究的報(bào)道中[6-7]，采用采集出生0、7、14、21、28 d，以此類推，間隔7 d采集一批樣品的采樣方式雖然時(shí)間準(zhǔn)確，能反映豬群抗體變化規(guī)律，但對(duì)按一定生產(chǎn)周期為單位設(shè)計(jì)豬欄(舍)數(shù)量，嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出和分區(qū)飼養(yǎng)的規(guī)模豬場(chǎng)生產(chǎn)指導(dǎo)卻有一定欠缺，因?yàn)檫@些豬場(chǎng)豬群轉(zhuǎn)入下一個(gè)生產(chǎn)區(qū)時(shí)一般也是按同一欄或同一棟(間)豬轉(zhuǎn)入相應(yīng)的欄舍飼養(yǎng)，豬的免疫也是按欄或棟為單位進(jìn)行免疫，每一欄或一棟(間)豬舍中的豬出生日期有一定的時(shí)間跨度，實(shí)際操作中無(wú)法做到按準(zhǔn)確出生天數(shù)進(jìn)行免疫接種。因此，本研究采樣是按豬場(chǎng)實(shí)際生產(chǎn)流程，采集的每一階段樣品即為免疫接種時(shí)間為同一天的同一豬群，所以出生時(shí)間有相應(yīng)的跨度，按此采樣方式檢測(cè)的數(shù)據(jù)代表了該批次豬群整體抗體水平和變化規(guī)律，對(duì)優(yōu)化免疫程序參考價(jià)值更大。

本研究選擇的該豬場(chǎng)生產(chǎn)是以“周”為單位設(shè)計(jì)，即每周出生的哺乳仔豬斷奶后轉(zhuǎn)入相應(yīng)的保育舍，每間保育舍豬再轉(zhuǎn)入相應(yīng)的生長(zhǎng)育肥豬舍，但根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)記錄和免疫接種信息查閱發(fā)現(xiàn)，在實(shí)際生產(chǎn)中每批豬的出生時(shí)間跨度相差較大，基本都超過(guò)7 d，跨度最大的達(dá)到12 d，導(dǎo)致和生產(chǎn)流程設(shè)計(jì)誤差較大的原因是同一時(shí)間段內(nèi)(7 d)分娩母豬數(shù)不均衡，同一欄豬出生時(shí)間跨度較大，這也成為導(dǎo)致該豬場(chǎng)豬瘟免疫效果不理想，抗體水平不均勻，變異系數(shù)較高的重要原因。要想提高規(guī)模豬場(chǎng)群體免疫的效果，必須有科學(xué)合理的生產(chǎn)流程和管理措施作為保障。

疫苗免疫接種仍是控制豬瘟主要手段，科學(xué)的免疫程序?qū)μ岣哓i瘟疫苗免疫效果至關(guān)重要。對(duì)不同豬場(chǎng)豬瘟免疫監(jiān)測(cè)研究確定的免疫程序都不相同[8-9]，因此，豬場(chǎng)要重視豬瘟疫苗抗體監(jiān)測(cè)，根據(jù)抗體消長(zhǎng)情況對(duì)免疫接種方案及時(shí)做出調(diào)整優(yōu)化，提高疫苗免疫效果。養(yǎng)豬生產(chǎn)是一個(gè)系統(tǒng)工程，疫苗免疫效果和豬舍設(shè)計(jì)，配種分娩、轉(zhuǎn)欄轉(zhuǎn)群、飼養(yǎng)管理等關(guān)系密切，要樹立群體免疫理念，重視群體免疫接種技術(shù)研究與應(yīng)用，提高疫苗免疫效果，才能提高豬群抵御病原微生物侵襲的能力。

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Monitoring of Classical Swine Fever Antibody Level in a Large Scale Pig Farm

NAN Wen-jin1，3，HUANG Jian-qiang1，3， HU Hong-hui1，3， WU Jing-bo，3， PENG Guo-liang2，3

(1.LaboratoryofAnimalDisease，ShaoguanUniversity,Shaoguan,Guangdong,512005,China;2.SchoolofAgriculturalScienceandEngineering，ShaoguanUniversity,Shaoguan,Guangdong,512005,China;3.NorthGuangdongCollaborativeInnovationandDevelopmentCenterofPigFarmingandDiseaseControl,Shaoguan,Guangdong,512005,China)

Abstract:In order to make immune effect evaluation and further optimize the immune procedure of classical swine fever virus(CSFV)vaccine in a pig farm，the blood samples of different day age of piglets and fattening pigs were collected from the farm and detected by CSFV antibody blocking ELSIA kit.Based on antibody qualified rate,average blocking rate and coefficient of variation,combined with CSFV immunization program,the testing data showed that the pig farm immunity blank period was too long,the antibody qualified rate was low,which increased the risk of CSFV infection，the CSF vaccine immunization program timely should be optimized.Antibody level monitoring is important to CSF prevention and control.The experiment can provide reference for detection antibody and making reasonable immune procedure against CSF.

Key words:Classical swine fever;antibody level;immune procedure；monitoring

文章編號(hào):1007-5038(2016)03-0120-04

中圖分類號(hào):S852.651

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

作者簡(jiǎn)介：南文金(1981-)，男，河南靈寶人，助理研究員，碩士，主要從事動(dòng)物疫病防控技術(shù)研究。

基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011B020305009)；韶關(guān)市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013CX/N09)

收稿日期：2015-05-10