羅華榮，柯莽，周濤，徐鋮，包衛(wèi)光

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺州醫(yī)院，浙江 臺州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.組織庫）

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CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達及臨床病理分析

羅華榮1，柯莽2，周濤1，徐鋮1，包衛(wèi)光3

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺州醫(yī)院，浙江 臺州 317000，1.病理科；2.泌尿外科；3.組織庫）

[摘 要]目的：檢測CD147和Survivin在人腎細胞癌組織中的表達，以探討二者在腎細胞癌中表達的相關(guān)性及其與預(yù)后的關(guān)系。方法：利用組織芯片技術(shù)構(gòu)建85例腎細胞癌與35例癌旁正常腎組織芯片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision法檢測CD147和Survivin在腎癌組織中的表達。結(jié)果：腎細胞癌組中CD147和Survivin的表達率分別為65.7%（23/35）和71.4%（25/35），顯著高于癌旁對照組（P＜0.01）。CD147在腎細胞癌中的表達隨著腫瘤大小與病理分級的升高而升高（P＜0.05）；Survivin在腎細胞癌中的表達隨著病理分級與臨床分期的升高而升高（P＜0.05）。CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達具有弱一致性（Kappa=0.388，P ＜0.05）。Logistic回歸分析顯示Survivin的表達是腎細胞癌的獨立危險因素（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05）。結(jié)論：CD147和Survivin在腎細胞癌中均有過量表達，可能參與了腎癌的發(fā)生發(fā)展過程，兩者聯(lián)合檢測可用于評估腎細胞癌的惡性程度和預(yù)后。

[關(guān)鍵詞]腎細胞癌；組織芯片；免疫組織化學(xué)；CD147；Survivin

CD147又稱為細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），是一種新的細胞表面黏附分子，介導(dǎo)細胞間及細胞與間質(zhì)間的黏附作用，可通過多種途徑刺激腫瘤細胞及周圍間質(zhì)成纖維細胞合成并釋放基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs），降解細胞外基質(zhì)，促進腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移。生存素（Survivin）是一種獨特的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAPs），選擇性地表達于大多數(shù)腫瘤細胞中，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。我們采用免疫組織化學(xué)方法檢測CD147和Survivin在腎細胞癌組織中的表達，旨在探討二者與腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1　材料和方法

1.1材料來源 收集本院病理科2005年1月至2008 年12月間手術(shù)切除腎細胞癌石蠟包埋標(biāo)本85例，其中男57例，女28例，男女比例為2.04:1，年齡最小17歲，最大80歲，平均56.3歲。標(biāo)本按2004年WHO腎細胞癌的病理學(xué)分類分為：透明細胞癌63例，乳頭狀腎細胞癌12例，嫌色細胞癌6例，Bellini集合管癌2例，黏液樣小管狀和梭形細胞癌1例，多囊性腎細胞癌1例。第1種類型歸為經(jīng)典型腎細胞癌組，共63例；后5種類型歸為非經(jīng)典型腎細胞癌組，共22例。核分級按Fuhrman分級標(biāo)準(zhǔn)：I級核33例，II級核30例，III級核15例，IV級核7例。腫瘤大?。耗[瘤小于5 cm 32例，5～7 cm 28例，大于7 cm 25例。按Robson法臨床分期分為：I期45例，II期30例，III期9例，IV期1例。因標(biāo)本限制等客觀原因，隨機選取了35例腎癌旁（距腎癌組織邊緣＞5 cm）正常腎組織作癌旁對照組。有完整隨訪資料的患者共72例，所有標(biāo)本的患者術(shù)前均未接受化療及放療。

1.2實驗試劑 所用一抗CD147試劑為鼠抗人單克隆抗體，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。Survivin試劑為兔抗人多克隆抗體，購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。EnVision檢測試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自Dako公司。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3實驗方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，使用組織芯片打孔儀穿取合格組織芯轉(zhuǎn)移到受體蠟塊，構(gòu)建和制備腎癌及癌旁正常對照標(biāo)本組織芯片。將制成的組織芯片行4 μm連續(xù)切片，進行HE及免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)采用EnVision兩步法，高溫高壓抗原修復(fù)，DAB顯色。

1.4結(jié)果判定 CD147以細胞膜或細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，Survivin主要以細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，偶見于細胞核。觀察5個以上高倍視野，計數(shù)不少于1 000個細胞中的陽性細胞數(shù)。陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，陽性細胞數(shù)≥10%為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計。計數(shù)資料單因素比較采用x2檢驗，采用Kappa檢驗評判兩種抗體表達的一致性，危險因素分析采用logistic回歸分析，通過向后剔除法擬合腎細胞癌的logistic回歸模型，獲得比值比（odds ratio，OR）和95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）。以α=0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。

2　 結(jié)果

2.1組織芯片 共制備了3個組織芯片，每個芯片包含42個位點，比較原HE切片，剔除切片不全及圖象不良者，實際包含85例腎細胞癌組織及35例癌旁腎組織。

2.2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 CD147在腎細胞癌中的總陽性率為71.8%（61/85），主要在細胞膜或細胞質(zhì)表達，染色較強（見圖1-2）。CD147在35例有癌旁對照的腎細胞癌組中的陽性率為65.7%（23/35），癌旁對照組僅10例呈陽性表達，陽性率為28.6%（10/ 35），主要表現(xiàn)為腎小管上皮細胞膜或細胞質(zhì)的陽性表達，腎細胞癌組CD147陽性率顯著高于癌旁對照組（P＜0.01）。Survivin在腎細胞癌組織中的總陽性表達率為76.5%（65/85），主要在腎細胞癌的細胞質(zhì)表達（見圖3），部分病例也可見到細胞質(zhì)和細胞核同時著色，且染色較強（見圖4）。Survivin在35例有癌旁對照的腎細胞癌組中的陽性率為71.4%（25/ 35），癌旁對照組無一例表達，腎細胞癌組Survivin陽性率顯著高于癌旁對照組（P＜0.01）。CD147在腎細胞癌中的陽性率隨著腫瘤大小和病理分級的升高而升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。不同組織學(xué)分型和臨床分期間CD147的表達差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。Survivin在腎細胞癌中的陽性表達率隨著病理分級和臨床分期的升高而升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），Survivin在不同腫瘤大小和組織學(xué)分型間的表達均無顯著性差異（P ＞0.05）。見表1。

圖1　CD147在腎細胞癌中呈細胞膜和細胞質(zhì)強陽性表達（EnVision，×100）

圖2　CD147在腎細胞癌中呈細胞膜陽性表達（EnVision，×200）

圖3　Survivin在腎細胞癌中呈細胞質(zhì)陽性表達（EnVision，×200）

圖4　Survivin在腎細胞癌中呈細胞質(zhì)和細胞核強陽性表達（EnVision，×200）

表1　CD147和Survivin表達與腎細胞癌臨床病理因素的關(guān)系[n（%）]

2.3CD147和Survivin在腎細胞癌中表達的一致性CD147和Survivin在腎細胞癌組織中表達的共同陽性率為62.4%（53/85），共同陰性率為14.1%（12/ 85）。Kappa檢驗統(tǒng)計分析顯示CD147和Survivin的表達具有一致性（Kappa=0.388，P＜0.05），但在Kappa系數(shù)區(qū)段中一致性程度屬于弱。見表2。

表2　CD147和Survivin在腎細胞癌中表達的一致性

2.4CD147、Survivin表達與腎細胞癌患者的預(yù)后分析 85例腎細胞癌患者中共獲得72例隨訪資料，隨訪時間2～98個月。其中存活5年以上的有55例，因腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移5年內(nèi)死亡的共17例，總的5年生存率為76.4%。生存組中CD147陽性表達率為61.8%（34/55），Survivin陽性表達率為65.5%（36/ 55）；死亡組中CD147陽性表達率88.2%（15/17），Survivin陽性表達率為94.1%（16/17）。取腫瘤大小、組織學(xué)分型、病理分級、臨床分期、CD147表達及Survivin表達為自變量，以隨訪5年是否死亡為應(yīng)變量，通過向后剔除法作logistic回歸分析，依次剔除CD147表達和組織學(xué)分型兩個自變量，結(jié)果顯示腫瘤大小、病理分級、臨床分期和Survivin表達是腎細胞癌的獨立危險因素。見表3。

表3　腎細胞癌危險因素logistic回歸分析

3　討論

腎細胞癌的浸潤和轉(zhuǎn)移是一個多因素、多步驟的級聯(lián)反應(yīng)過程。細胞外基質(zhì)（包括基底膜）的降解是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一[1]。MMPs能夠降解細胞外基質(zhì)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的蛋白水解酶[2-3]。CD147是一種單鏈跨膜糖蛋白，在惡性腫瘤細胞膜上有較強表達，能刺激腫瘤周圍微環(huán)境細胞分泌MMPs，在癌細胞表面形成復(fù)合物，將MMPs濃聚于癌細胞周圍，破壞天然組織屏障，導(dǎo)致基底膜和間質(zhì)成分降解，促進腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[4-5]。本實驗結(jié)果顯示CD147在腎細胞癌中的陽性表達率顯著高于癌旁正常腎組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。CD147在腎細胞癌組中的表達隨著病理分級的升高而增加（P＜0.05），組織分化程度越低，CD147的表達強度越強。另外CD147的表達率與腫瘤的大小也有密切關(guān)系，腫瘤越大，CD147的表達率越高。提示CD147可能參與腎癌的發(fā)生發(fā)展過程，影響腫瘤的惡性程度和發(fā)展趨勢。

Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子，特異表達于人和鼠的胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類腫瘤細胞，而在成人正常分化的組織中除了少數(shù)組織外極少表達[6]。Survivin通過直接或間接地干預(yù)凋亡蛋白酶Caspases的功能而發(fā)揮其抗凋亡作用，在調(diào)控細胞周期和抑制細胞凋亡過程中起重要作用[7-8]。本實驗結(jié)果顯示85例腎細胞癌Survivin陽性表達率為76.5%（65/85），35例癌旁正常腎組織無一例表達，表明Survivin在腎細胞癌組織中有高度選擇性表達的特征，可能參與了腎癌的發(fā)生。另外Survivin表達隨著病理分級和臨床分期的升高而增加（P＜0.05），組織分化程度越低，臨床分期越高，Survivin的表達陽性率越高。這說明Survivin的表達與腎癌的惡性生物學(xué)行為有關(guān)，Survivin的高表達可能參與惡性腫瘤的臨床進展。

最新研究[9]表明，在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展過程中，CD147的過表達能夠抑制子宮內(nèi)膜細胞的凋亡，并能促進細胞的遷移。Tang等[10]的研究表明，CD147能夠通過增加細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因免疫球蛋白結(jié)合蛋白（BIP），誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未折疊蛋白反應(yīng)（UPR），從而抑制肝癌細胞的凋亡。這些均表明CD147參與了細胞的凋亡抑制過程，并且可能在腫瘤細胞的浸潤、遷移過程中起著重要的作用。本實驗結(jié)果顯示腎細胞癌中CD147和Survivin均高表達，癌旁正常組織中CD147和Survivin低表達或不表達；Kappa檢驗顯示CD147和Survivin在腎細胞癌中的表達有弱一致性?？梢酝茰yCD147與凋亡抑制因子Survivin之間可能存在相同的信號通路，兩者在腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移過程中可能存在相互誘導(dǎo)、相互協(xié)同的作用。

本組多因素logistic回歸分析顯示Survivin的表達是腎細胞癌的獨立危險因素，且比值比較大（OR=16.256，95%CI：1.132～233.515，P＜0.05），這與文獻[11]報道一致。Rabien等[12]的研究表明，CD147在腎細胞癌中存在過表達，并且與腎透明細胞癌患者的不良預(yù)后有關(guān)。本研究顯示CD147雖不是腎細胞癌的獨立危險因素，但死亡組中CD147陽性表達率高于生存組，表明CD147的陽性表達在一定程度上可以提示腫瘤的不良預(yù)后。

CD147和Survivin在腎細胞癌中高表達，而在正常腎組織中不表達或弱表達的特點，為腎癌的分子靶向治療提供了新的靶點，使得促進腫瘤細胞調(diào)亡而不影響周圍正常組織細胞的抗腫瘤療法成為可能[5，13]。因此，聯(lián)合檢測腎細胞癌組織中CD147和Survivin的表達，對于臨床治療可能具有重要的指導(dǎo)意義。

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（本文編輯：丁敏嬌）

·臨 床 經(jīng) 驗·

Expression of CD147 and Survivin in renal cell carcinoma and their correlation with clinicopathologic pa-rameters

LUO Huarong1,KE Mang2,ZHOU Tao1,XU Cheng1,BAO Weiguang3.1.Department of Pathology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 2.Department of Urology,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000; 3.Human Tissue Bank,Taizhou Hospital Affi liated to Wenzhou Medical University,Taizhou,317000

Abstract:Objective:To investigate the expression of CD147 and Survivin in human renal cell carcinoma (RCC) and their correlation with clinicopathologic parameters.Methods:The RCC tissue microarrays containing 85 renal cell carcinoma specimens and 35 normal kidney tissue specimens were used to detect CD147 and Survivin expression by immunohistochemistry.Results:The expression rates of CD147 and Survivin were 65.7% (23/35) and 71.4% (25/35) in RCC group,respectively,signifi cantly higher than that in control group (P＜0.01).The expression of CD147 in RCC increased with the size of tumor and pathological grade (P＜0.05).And the expression of Survivin in RCC increased with the pathological grade and clinical stage (P＜0.05).The expression of CD147 and Survivin in RCC specimens showed weak consistency (Kappa=0.388,P＜0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that the positive expression of Survivin was an independent risk factor of RCC (OR=16.256,95%CI:1.132～ 233.515,P＜0.05).Conclusion:CD147 and Survivin are over-expressed in RCC specimens.CD147 and Survivin may play a crucial stage in development of human RCC.Detection of the expression of CD147 and Survivin can be used in the evaluation of malignant degree and prognosis of RCC.

Key words:renal cell carcinoma; tissue microarray; immunohistochemistry; CD147; Survivin

作者簡介：羅華榮（1980-），男，浙江臺州人，主治醫(yī)師。

收稿日期：2014-09-04

[中圖分類號]R737.11

[文獻標(biāo)志碼]B

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.01.013