魏煥輝

(伊春區(qū)畜牧獸醫(yī)站,黑龍江伊春 153000)

兔痘的診斷方法及防控措施

魏煥輝

(伊春區(qū)畜牧獸醫(yī)站,黑龍江伊春 153000)

兔痘病毒除了對兔具有致病性外,幾乎與馬痘、牛痘病毒沒有區(qū)別。本病僅發(fā)生于穴兔繁殖群,臨床表現(xiàn)為病兔皮膚痘疹和鼻、眼內(nèi)流出多量分泌物。各年齡均可感染,但以4～12周齡兔易感。

兔痘;診斷;防控

1 病理學診斷

（1）病理剖檢變化：皮膚損傷具有特征性，其嚴重程度可以僅有少數(shù)局部斑疹到嚴重的、有廣泛壞死和出血的皮膚損害不等。皮下水腫及口和其他天然孔的水腫是兔痘的常見病變。胃腸道主要在腹膜和網(wǎng)膜上出現(xiàn)灶性斑疹。肺、肝、脾腫大，有肉眼可見的青白色粟粒大的結(jié)節(jié)，膽囊也有小結(jié)節(jié)。睪丸、卵巢和子宮也布滿白色結(jié)節(jié)，睪丸發(fā)生明顯水腫和壞死，子宮有時發(fā)生灶性膿腫。

（2）病理組織學變化：斑疹或結(jié)節(jié)的組織中央壞死，周圍是單核細胞浸潤，相鄰組織水腫或出血，或可見由大量單核細胞、壞死組織細胞、出血和水腫構(gòu)成的彌漫性病變，血管上皮明顯腫脹，細小血管阻塞。兔痘引起的肺炎以血管周圍單核細胞和多形核細胞浸潤為特征。骨髓內(nèi)有單核細胞浸潤，并伴有散在的出血和壞死。脾臟嚴重充血，紅髓內(nèi)有大量單核細胞浸潤，脾小體水腫，甚至出現(xiàn)灶性到彌漫性壞死。淋巴結(jié)，特別是小腸結(jié)合淋巴濾泡可發(fā)生廣泛性壞死。膽管區(qū)單核細胞浸潤，睪丸組織有水腫壞死灶，甲狀腺、腎上腺、胸腺、唾液腺和子宮細胞變性、壞死及單核細胞浸潤。有時在上述各受害器官內(nèi)可看到特征性的胞漿內(nèi)包涵體。

2 病原學診斷

（1）病料采集和處理：①樣品采集：心肌、肝、脾、肺、腎，以及淋巴結(jié)、睪丸、子宮材料、呼吸道分泌物和水腫液等均可作為病毒檢驗材料。雞胚絨毛尿囊膜的痘皰病灶以及細胞培養(yǎng)物亦可作為被檢材料。皮膚材料采集時，先用棉球了占70%乙醇或乙醚，清洗病變皮膚的表面，收集痂皮及其病灶頂部的材料。②樣品處理：將被檢材料放入玻璃研磨器內(nèi)，加10%生理鹽水后研磨。每毫升加入青霉素、鏈霉素各1000IU，37℃孵育1h后經(jīng)3000轉(zhuǎn)/min離心10min，吸取上清液作為雞胚接種、細胞培養(yǎng)和動物接種材料，分裝保存。

（2）病原分離：①雞胚接種：第一步：接種。將上述材料按常規(guī)方法接種10～13日齡的SPF雞胚絨毛尿囊膜上，每胚接種0.2ml，每份材料接種4個雞胚，39～40℃培養(yǎng)48～72h。第二步：收獲觀察。接種后第2d檢卵，棄去死胚，待培養(yǎng)48～72h后，按常規(guī)方法收獲絨毛尿囊膜。第三步，結(jié)果觀察。如收獲的絨毛尿囊膜出現(xiàn)白色的痘斑時，可以認為是兔痘病毒感染。在絨毛尿囊膜上分離病毒的方法是比較簡單而又可靠的實驗診斷方法，但這并不是惟一的病毒分離方法，還可以用組織培養(yǎng)和動物接種分離法分離病毒。動物接種時，取上述材料家兔腹部皮膚劃痕接種，或同時作睪丸內(nèi)接種及家兔角膜劃痕接種。②細胞培養(yǎng)。兔痘病毒可在兔腎、睪丸和兔胚單層細胞內(nèi)繁殖。取細胞2～4管，吸掉上清液。每管接種上述標本0.2ml，室溫下吸附30min。加入維持液0.8時，37℃培養(yǎng)6～7d，每天觀察細胞病變。結(jié)果觀察：在有病變的細胞漿內(nèi)可見包涵體形成。③動物接種：取上述接種材料，以皮膚劃痕法，接種易感兔，或每兔皮下注射0.5～1.0ml，或每兔滴鼻感染0.2～0.5ml。一般在感染后5d左右開始發(fā)病，癥狀和病變與自然發(fā)病病例相同。

（3）病毒鑒定：①包涵體檢查：將病料組織、絨毛尿囊膜、細胞培養(yǎng)物作涂片或觸片，或?qū)⒉∽兘M織、絨毛尿囊膜、細胞培養(yǎng)物制成組織切片，姬姆薩染色，可見細胞漿內(nèi)紫色包涵體。②血凝試驗與血凝抑制試驗：痘皰型毒株能凝集雞紅細胞，利用這一特性對采集的樣品進行檢查。方法1：玻片法。取上清液一滴，滴于玻片上，加等量1%雞紅細胞，室溫下混勻后不斷搖動，3min內(nèi)出現(xiàn)凝集者判為陽性反應。方法2：試管法。取9支清潔的試管置于試管架內(nèi)排成一排，每管加入0.25ml生理鹽水。吸取0.05ml待檢樣品加入第一管中，混勻后取0.25ml加入到第二管中，如此類推直至第八管，最后從第八管吸出0.25ml，棄去。第九管不加被檢樣品，作為對照。每管加入0.25ml 1%雞紅細胞懸液，充分混勻后置于37℃水浴內(nèi)30min。結(jié)果判定：“＋＋＋＋”雞紅細胞在管底四周呈顆粒狀；“＋＋＋”少數(shù)紅細胞集中于管底中央，大部分分散成顆粒狀；“＋＋”半數(shù)紅細胞集中于管底中央，呈圓碟狀；“＋”75%紅細胞集中于管底，呈圓碟狀；“－”全部紅細胞集中于管底，呈圓碟狀。試驗中以被檢樣品的最大稀釋管顯示“＋＋＋＋”凝集現(xiàn)象者為一個血凝單位。

對于血凝試驗陽性的樣品，必須用已知的標準陽性血清進行血凝抑制試驗，只有被檢樣品的血凝性可被特異性的陽性血清所中和者，才能判為兔痘病毒陽性。

3 預防措施

對本病無特效藥物治療。一旦發(fā)病，需立即采取嚴格的隔離措施，消毒并撲殺病兔，尸體深埋或焚燒，做無害化處理，其余兔包括健康兔緊急接種牛痘疫苗，進行免疫預防，接種后很快能產(chǎn)生抵抗力，免疫期能達半年左右。注意加強飼養(yǎng)管護，對兔場及器具進行徹底清潔和嚴格消毒。引進種兔時要嚴格檢疫，并隔離飼養(yǎng)，確定無病后，方可進場。

[1] 張占江.兔痘的流行和診療方法[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2016，（7）：128-129.

魏煥輝（1964—），男，大專學歷，助理獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控工作。