蔡冬冬，羅 毅，張 輝，邢 坤，劉瑞英，陳代平

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

雞傳染性喉氣管炎的研究進(jìn)展

蔡冬冬，羅 毅，張 輝，邢 坤，劉瑞英，陳代平

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

雞傳染性喉氣管炎是大雞群易發(fā)的一種嚴(yán)重呼吸道疾病，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)有巨大威脅。本文就雞傳染性喉氣管炎的病原、基因組及蛋白、流行病學(xué)等方面進(jìn)行了綜述，并根據(jù)疫苗的研究進(jìn)展，分析了基因工程疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用前景，以期為雞傳染性喉氣管炎的有效防控提供幫助。

雞傳染性喉氣管炎；潛伏感染；毒力返強(qiáng)；基因工程疫苗

雞傳染性喉氣管炎（ILT）是由雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）引起的一種高度傳染性上呼吸道疾病。目前，ILTV只有一個(gè)血清型，但是不同毒株間毒力相差懸殊，引起的臨床表現(xiàn)也有所不同。強(qiáng)毒株感染時(shí)，表現(xiàn)為受侵害的氣管黏膜細(xì)胞腫脹與水腫，導(dǎo)致糜爛和出血，通常發(fā)病率接近100%，死亡率為10%～40%，產(chǎn)蛋雞群感染后產(chǎn)蛋下降可達(dá)35%或完全停產(chǎn)。弱毒株感染時(shí)，表現(xiàn)為黏液性氣管炎、竇炎、結(jié)膜炎、消瘦，一般發(fā)病率不足5%，死亡率較低。目前，野毒和弱毒疫苗都可以造成潛伏感染，使本病持續(xù)存在[1]。

1 病原

ILTV屬于皰疹病毒亞科，傳染性喉氣管炎病毒屬。病毒顆粒呈球形，有囊膜，對(duì)氯仿和乙醚等脂溶劑敏感，對(duì)外界環(huán)境的抵抗力不強(qiáng)。能夠在雞胚和多種禽類細(xì)胞上增殖，雞胚肝是最為敏感的培養(yǎng)系統(tǒng)。近年，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，通過雞胚制備的ILTV弱毒株存在毒力返強(qiáng)現(xiàn)象，而通過組織培養(yǎng)制備的ILTV弱毒株并未發(fā)現(xiàn)毒力返強(qiáng)，這為疫苗毒株選育工作帶來了新的探索方向[2]。目前，ILTV只有一個(gè)血清型，但不同毒株間毒力相差甚遠(yuǎn)。

2 基因組及編碼蛋白

ILTV基因組是雙股線性DNA分子，基因組大約155 kb，由一個(gè)長獨(dú)特區(qū)（UL，120 kb）和一個(gè)短獨(dú)特區(qū)（US，17 kb），以及US區(qū)兩側(cè)的反向重復(fù)序列（IRS 和TRS，約為18kb）組成。近期發(fā)現(xiàn)，ILTV的DNA在UL區(qū)的兩側(cè)也有反向重復(fù)序列（IRL和TRL，約為17bp）。TK、gX、gC、gI、gE、gM等是病毒復(fù)制的非必需基因，可用于構(gòu)建活病毒載體及基因缺失減毒疫苗，或者作為基因缺失疫苗的遺傳標(biāo)志，成為鑒別疫苗免疫感染和野毒感染診斷的目標(biāo)基因；TK、ICP4、gB、gH、pK等基因高度保守，既可以作為診斷技術(shù)研究的靶基因，又可用于構(gòu)建病毒活載體表達(dá)疫苗。TK基因表達(dá)的蛋白高度保守，是病毒檢測(cè)的主要靶標(biāo)。ILTV的許多糖蛋白已經(jīng)被鑒定，如gB、gC、gD蛋白參與病毒的吸附，是主要保護(hù)性抗原，是病毒免疫抗體評(píng)價(jià)的主要依據(jù)，還可用于病毒活載體表達(dá)疫苗和亞單位疫苗的構(gòu)建。gX蛋白為非結(jié)構(gòu)糖蛋白，是區(qū)分野毒株和疫苗毒株的理想目標(biāo)蛋白。

3 流行病學(xué)

ILT是一種接觸性傳染病，主要通過呼吸道及眼感染，也可經(jīng)消化道感染。病雞、康復(fù)后或無癥狀的帶毒雞是本病的主要傳染源。主要依靠水平傳播，遠(yuǎn)距離跨界傳播的主要途徑是引種傳播、國際貿(mào)易傳播和弱毒疫苗免疫接種傳播。ILTV自然感染的潛伏期為6～12 d，感染后排毒期為6～8 d，少部分康復(fù)雞可以長期帶毒，排毒期可長達(dá)2年。病程一般為7～15 d，時(shí)間長的可以延至30 d。長期潛伏感染是ILT的主要流行病學(xué)特征，野毒感染和接種疫苗均可導(dǎo)致潛伏感染，潛伏感染的病毒在一定條件下（比如應(yīng)激），會(huì)重新激活，引起雞群呈現(xiàn)周期性的自然發(fā)病。ILTV主要呈地方性流行，同群傳播較快，群間傳播較慢。近年來該病的“溫和型”感染逐漸增多，發(fā)病率和致死率都很低。

4 疫苗的研究進(jìn)展

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和日趨完善，利用基因工程疫苗來預(yù)防ILT已經(jīng)成為人們的共識(shí)。

4.1 基因工程缺失疫苗 構(gòu)建缺失某一毒力基因的所謂基因缺失疫苗是近年來基因工程疫苗開發(fā)研究的一個(gè)活躍領(lǐng)域。Coppo等[3]對(duì)本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的缺失gG基因的基因工程苗與商品化的弱毒疫苗進(jìn)行了臨床比較，發(fā)現(xiàn)gG基因缺失重組疫苗株具有良好的保護(hù)性、安全性，有望用于ILT的防控與凈化。Lee SW 等[4]通過缺失gJ基因構(gòu)建疫苗毒株，經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)具有良好的免疫原性，為商品化疫苗提供了良好的備選毒株。

4.2 重組活載體疫苗 重組活載體疫苗由于可達(dá)到“一次免疫，預(yù)防多種疾病”的優(yōu)點(diǎn)，深受市場(chǎng)歡迎。目前可以選用的病毒載體有FPV、MDV、HVT及禽腺病毒等。尤其是ILT-雞痘病毒疫苗，已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。哈爾濱獸醫(yī)研究所將WG株的gB基因插入雞痘活病毒載體，成功地構(gòu)建了重組活載體疫苗，對(duì)雞痘與傳染性喉氣管炎都具有很好的免疫效果。目前該疫苗已經(jīng)商業(yè)化生產(chǎn)，被證實(shí)能有效地防止ILT發(fā)生，并且接種副反應(yīng)小、安全性高，具有良好的應(yīng)用前景。Gimeno等[5]也利用MDV為載體，成功構(gòu)建了可以同時(shí)預(yù)防傳染性喉氣管炎和馬立克氏病兩種疫病的重組疫苗毒株。臨床免疫試驗(yàn)證明，該重組毒株具有良好的保護(hù)性、安全性。為了降低防控成本，減少動(dòng)物應(yīng)激，一支疫苗防控多種疫病的需求日益高漲，應(yīng)用前景廣闊。Sun等[6]將新城疫的F、HN基因和傳染性喉氣管炎的gB基因同時(shí)插入雞痘病毒載體構(gòu)建重組疫苗株，經(jīng)試驗(yàn)證明該重組疫苗株對(duì)新城疫、傳染性喉氣管炎、雞痘都有良好的保護(hù)作用。

4.3 基因工程亞單位疫苗 目前，ILTV亞單位疫苗的研究主要集中在糖蛋白，因?yàn)樘堑鞍渍T導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液和細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)ILTV的免疫應(yīng)答。Zheng 等[7]成功地表達(dá)了糖蛋白gB，可以保護(hù)SPF雞胚抵抗ILTV攻擊。但是使用亞單位疫苗的不利方面在于它不能在機(jī)體內(nèi)復(fù)制，所需接種量大，制備成本高。

4.4 DNA疫苗 DNA疫苗是繼傳統(tǒng)疫苗和基因工程亞單位疫苗之后的第三代新型疫苗，不但具有滅活疫苗優(yōu)點(diǎn)，而且不易發(fā)生逆轉(zhuǎn)錄，具有廣闊的應(yīng)用前景。姬向波等[8]編碼ILTV主要抗原gB基因的重組DNA疫苗“pcDNA-gB”，能誘導(dǎo)雞產(chǎn)生特異性的體液免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答，為ILTV新型疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。之后，邵攀峰等[9]將重組含有g(shù)B基因的DNA質(zhì)粒與IL-18DNA質(zhì)粒同時(shí)免疫試驗(yàn)雞，結(jié)果得出免疫雞保護(hù)率達(dá)到80%以上，死亡率為0、發(fā)病率為10%，均比只免疫含有g(shù)B基因的DNA質(zhì)粒有顯著降低?！?/p>

[1] Parra SH，Nu?ez L F，Astolfi-Ferreira C S，et al. Persistence of the tissue culture origin vaccine for infectious laryngotracheitis virus in commercial chicken flocks in Brazil[J].Poult Sci，2015，94（11）：2608-2615. [2] García M，Volkening J，Riblet S，et al.Genomic sequence analysis of the United States infectious laryngotracheitis vaccine strains chicken embryo origin（CEO）and tissue culture origin（TCO）[J].Virology，2013，440（1）：64-74.

[3]Coppo M J，Noormohammadi A H，Hartley C A，et al.Comparative in vivo safety and efficacy of a glycoprotein G-deficient candidate vaccine strain of infectious laryngotracheitis virus delivered via eye drop[J].Avian Pathology，2011，40（4）：411-417.

[4] Lee SW，Hartley C A，Coppo M J，et al.Growth kinetics and transmission potential of existing and emerging field strains of infectious laryngotracheitis virus[J].Plos One，2015，10（3）.

[5]Gimeno IM，Cortes A L，F(xiàn)aiz NM，et al.Evaluation of the protection efficacy of a serotype 1 marek′s disease virus-vectored bivalent vaccine against infectious laryngotracheitis and marek's disease[J].Avian Dis，2015，59（2）：255-62.

[6]Sun H L，Wang Y F,Tong GZ，et al.Protection of chickens from newcastle disease and infectious laryngotracheitis with a recombinant fowlpox virus co-expressing the F，HN genes of newcastle[J]. Avian Diseases，2008，52（1）：111-117.

[7] Zheng H Z，Yang H，Bai JN，et al.Cloning and expression of gB gene of infectious laryngotracheitis virus in M.smegmatis[J].Acta Microbiological Sinica，2004，44（6）：830-3.

[8]姬向波，劉文波，魏建超，等.雞傳染性喉氣管炎病毒gB基因重組DNA疫苗的構(gòu)建與免疫試驗(yàn)[J].中國病毒學(xué)，2006，21（5）：481-484.

[9]邵攀峰，陳紅英，崔保安，等.雞傳染性喉氣管炎病毒gB基因重組DNA疫苗的構(gòu)建與雞IL-18聯(lián)合免疫試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，30（10）：1296-1300.

Research Progress of Avian Infectious Laryngotracheitis

CAI Dongdong，LUO Yi，ZHANG Hui，et al.
（Animal Disease Prevention and Control Center of Sichuan Province，Sichuan Chengdu 610041，China）

Avian infectious laryngotracheitis is a kind of serious respiratory disease infected in large chicken flocks，which takes a great threaten to poultry.This paper summarized the pathogen，genome and protein，epidemiology of ILT，analyzed the advantage，disadvantage and the application prospects of genetic engineering vaccine.It was aimed at offering some help for preventing and controling AILT.

Avian infectious laryngotracheitis（AILT）；Latent infections；Strong virulence return；Genetic engineering vaccine

S858.316.3

A

1001-8964（2016）04-0034-02

2016-01-15

蔡冬冬（1982-），男，河南商丘人，獸醫(yī)師，碩士，現(xiàn)從事重大動(dòng)物疫病防控工作。