移植導管對小鼠非手術(shù)胚胎移植影響因素分析

隨著科技的進步，非手術(shù)法胚胎移植逐漸進入人們的世界，而小鼠作為最常見的模式動物[1]，已成為研究非手術(shù)法最受歡迎的小動物，小鼠非手術(shù)胚胎移植技術(shù)無需特別專業(yè)的手術(shù)設(shè)備，操作簡單，對操作者的要求較低，無需擔心術(shù)后感染問題，之前美國人員進行了研究，但是移植成功率遠遠低于手術(shù)法，所以很少有人采用這種技術(shù)[2]。為了改變這一現(xiàn)狀且更穩(wěn)定的提高小鼠非手術(shù)胚胎移植的成功率，我們試驗并開發(fā)一種非手術(shù)移植器械，利用這種移植器械將CD-1小鼠的囊胚經(jīng)子宮頸移植到假孕2.5天的CD-1小鼠的子宮內(nèi)，并從移植導管的材質(zhì)和長度兩方面進行討論。

1 移植導管的材質(zhì)

移植器械的發(fā)明與使用是小鼠非手術(shù)胚胎移植技術(shù)上的一項重大突破，它的出現(xiàn)大大簡化了非手術(shù)胚胎移植的操作過程，從整個器械來看，移植導管是小鼠非手術(shù)胚胎移植成功的關(guān)鍵，之前一直使用玻璃導管，且移植效率一直都不高，為了解決這一問題我們進行了實驗，并總結(jié)了在相同實驗條件下用傳統(tǒng)的玻璃針以及用材質(zhì)較軟的聚四氟乙烯(PTFE)管進行小鼠非手術(shù)胚胎移植的結(jié)果，如表1所示。

表1 不同移植器械的比較

由表1可以看出，采用不同材質(zhì)的移植器械，移植成功率不同，其中采用聚四氟乙烯(PTFE)管進行小鼠非手術(shù)胚胎移植的成功率可以達到78.6%，而用玻璃針進行移植的成功僅有56.4%，也就是說采用質(zhì)地較軟且有一定弧度的聚四氟乙烯(PTFE)管可以有效地提高移植效率，我們分析原因可能是玻璃材質(zhì)的導管會對小鼠的子宮角造成傷害，而塑料導管在一定程度上減少了對小鼠子宮的傷害，所以用聚四氟乙烯(PTFE)管進行移植的效率比較高，但相對手術(shù)法還有很大的差距，我們還需不斷地改進。

2 移植導管的長度

移植導管材質(zhì)的改進大大提高了小鼠非手術(shù)胚胎移植的效率，我們還從移植導管的長度方面進行了討論，結(jié)果進一步提高了移植成功率。為了找到最有效地移植導管的長度，我們根據(jù)所用小鼠子宮的長度以及前人的實驗經(jīng)驗分別采用長度為1.5 cm、2.0 cm、2.5 cm聚四氟乙烯(PTFE)管進行小鼠非手術(shù)法胚胎移植，其他實驗條件和實驗用品保持不變，進行多次重復實驗，結(jié)果如表2所示。

表2 采用不同長度的聚四氟乙烯(PTFE)管進行移植的結(jié)果

由表2可知長度為2.0 cm的聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效率顯著高于長度為1.5 cm和2.5 cm的移植導管，在保證其他實驗條件正常的前提下，移植導管進入子宮的位置越深對子宮造成的損傷越大，同樣如果胚胎移入的位置離子宮頸口過近，胚胎很有可能隨著移植管的撤離和子宮的強烈收縮從子宮中逸出，使胚胎丟失。所以從理論以及實驗結(jié)果分析，我們得出長度為2.0 cm的聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效果最好。根據(jù)前人的結(jié)論得出手術(shù)法的移植效率為75%左右，而這種非手術(shù)方法的平均移植效率與手術(shù)法不相上下甚至優(yōu)于手術(shù)法，所以此方法值的推廣，可以被更廣泛的應用。

3 總結(jié)

3.1 實驗存在誤差與偶然性，應多次重復實驗。

3.2 玻璃管移植效率與手術(shù)法比較仍具有顯著的差異，對小鼠子宮損傷大。經(jīng)改進后，聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效率顯著提高，與手術(shù)法相當且對小鼠子宮損傷小，值得推廣。

3.3 由實驗得出結(jié)論：長度為2.0 cm的聚四氟乙烯(PTFE)管的移植效率最高。

[1]郭鵬，蘇銳.胚胎移植技術(shù)及在畜牧業(yè)中的應用前景[J].2009(12)：21～23.

[2]MarskL，LarssonKS.A s imple method for nonsurgical blastocyst transfer in mice[J].Reprod Fertil，1974，37(02)：393～398.

071000 河北農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 蔣瑞

岳巧嫻 薛如冰

河北農(nóng)業(yè)大學創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃項目：小鼠非手術(shù)胚胎移植器的研究(20160403)