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        水黃皮膠囊劑的制備工藝和質(zhì)量標準

        2016-04-05 06:59:19肖成燕
        中成藥 2016年1期
        關(guān)鍵詞:制備工藝總黃酮

        肖成燕, 朱 毅, 董 志*

        (1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理教研室,重慶400016;2.海南省藥品檢驗所,海南???70216)

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        水黃皮膠囊劑的制備工藝和質(zhì)量標準

        肖成燕1, 朱 毅2, 董 志1*

        (1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理教研室,重慶400016;2.海南省藥品檢驗所,海南???70216)

        摘要:目的 建立水黃皮膠囊的制備工藝及其質(zhì)量標準。方法 以休止角、吸濕率、臨界相對濕度、堆密度為考察指標,確定水黃皮膠囊的處方組成;TLC法對膠囊中的水黃皮進行定性鑒別;紫外分光光度和HPLC法分別測定總黃酮和水黃皮次素的含有量。結(jié)果 最佳處方為10%微粉硅膠,臨界相對濕度為63.9%,選用0號膠囊即可滿足膠囊劑裝填要求。TLC鑒別斑點清晰,無干擾。每粒膠囊劑含總黃酮不低于162.42 mg/g,水黃皮次素不低于39.56 mg/g。結(jié)論 該工藝路線合理可行,質(zhì)量控制方法專屬性強、重復(fù)性好,可用于控制水黃皮膠囊的質(zhì)量。

        關(guān)鍵詞:水黃皮膠囊;制備工藝;總黃酮;水黃皮次素;TLC;HPLC;紫外分光光度

        水黃皮Pongamia pinnata(L.)Merr.(異名Pongamia glabra)為豆科水黃皮屬的半紅樹植物[1],具有抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、抗?jié)?、抗氧化、降血糖以及降血脂等作用?,F(xiàn)代研究表明,水黃皮主要含黃酮、三萜、生物堿、脂肪酸及類固醇,其主要活性成分為黃酮類化合物[2-4],尤其在治療胃潰瘍中,水黃皮次素具有獨特的效果[5]。本實驗在前期對水黃皮有效部位總黃酮提取、分離、純化研究[6-7]的基礎(chǔ)上,以休止角、吸濕率、臨界相對濕度、堆密度為考察指標,進一步對其膠囊劑的制備進行研究,并采用TLC進行定性鑒別,紫外UV和HPLC進行含有量測定,建立合理可行的質(zhì)量標準,為其工業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

        1 儀器與試藥

        XFB-200高速中藥粉碎機(吉首市中誠制藥機械廠);標準篩(上虞市申克試驗儀器廠);手工膠囊填充板(長沙市雨花區(qū)中誠制藥機械廠);BPH9200A高溫鼓風(fēng)干燥箱(上海藍豹試驗設(shè)備有限公司);AE240電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);SK8200HP超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);EVOLUTION 300紫外可見分光光度計(美國賽默飛世爾科技公司);LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津公司)。

        藥用乳糖、糊精、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、微粉硅膠(安徽山河藥用輔料股份有限公司);0號空心膠囊(浙江綠健膠囊有限公司)。水黃皮次素對照品(美國Chroma-Dex公司);水黃皮總黃酮粉(總黃酮含有量56.39%,水黃皮次素含有量13.74%,自制,水黃皮莖醇經(jīng)D101大孔樹脂純化后濃縮,減壓干燥,即得)。乙腈為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 輔料的選擇 預(yù)試驗表明,水黃皮總黃酮原粉的流動性差、吸濕性強,故選用乳糖、糊精、預(yù)膠化淀粉、微粉硅膠和微晶纖維素作為輔料,按表1配方混合藥粉,過篩,考察流動性和吸濕性,以確定輔料種類。

        表1 輔料與水黃皮總黃酮原粉的配方組成

        2.1.1 休止角的測定[8]采用固定漏斗法,將3只漏斗串聯(lián),使最底端距水平坐標紙1 cm,將藥粉沿漏斗壁倒入最上層的漏斗,直到藥粉圓錐尖端接觸到漏斗口為止,結(jié)果見表2。

        表2 不同輔料的休止角及吸濕率

        2.1.2 吸濕率的測定[9]將底部盛有NaC1飽和溶液的玻璃干燥器于實驗前1天,放入25℃恒溫培養(yǎng)箱中。精密稱取各配方,平鋪于已恒重的扁形稱量瓶中,厚度約2 mm,瓶蓋打開,置于玻璃干燥器中,間隔一段時間稱量,結(jié)果見表2。

        由表可知,水黃皮總黃酮原粉中加入輔料后,其流動性和吸濕性都有所改善。其中,以微粉硅膠為輔料時,其休止角可達到30°左右,而且在75%濕度環(huán)境中放置6 h后,仍呈粉末狀。因此,選擇微粉硅膠為輔料制備膠囊劑。2.2 輔料用量的篩選 為了確定微粉硅膠的最佳用量,按表3配方混合藥粉,考察不同配方的流動性和吸濕性,結(jié)果見表3。

        表3 不同比例微粉硅膠的休止角及吸濕率

        由表可知,隨著微粉硅膠比例的增加,其流動性和吸濕性逐漸得到改善。當置于75%濕度環(huán)境中6 h后,微粉硅膠為5.0%的配方表面有少量黏結(jié),其他配方均為粉末。根據(jù)休止角和吸濕率測定結(jié)果的綜合分析,選擇微粉硅膠的最佳比例為10%。

        2.3 臨界相對濕度的測定[10]將混合藥粉干燥至恒重后,平鋪于已恒重的稱量瓶底部,厚度約2 mm,再置于不同相對濕度的玻璃干燥器中,7 d后稱量。結(jié)果,相對濕度分別為0.59%、2.23%、3.78%、6.82%、15.41%、24.17%、29.65%。以吸濕率為縱坐標,相對濕度為橫坐標,應(yīng)用SPSS軟件作圖,測得其臨界相對濕度為63.9%,見圖1。

        圖1 不同相對濕度下的吸濕率

        2.4 選擇膠囊的型號 先稱定量筒質(zhì)量,將適量混合藥粉置于其中,再稱定其質(zhì)量。上下振動,至體積不變時讀出體積,計算3次,測得堆密度分別為0.618 5、0.616 1、0.610 8 g/mL,平均值為0.615 1 g/mL,RSD=0.39%。根據(jù)藥效學(xué)實驗研究結(jié)果,水黃皮總黃酮的有效劑量為(標準體質(zhì)量60 kg)[11]150×0.162 =24.3 mg/kg,日服劑量每人約1.5 g。另外,每粒膠囊可裝0.4 g,每日服用4粒,其所占體積約0.65 mL,與0號膠囊0.67 mL接近,故選用0號膠囊填充。

        2.5 工藝驗證[12]按照上述處方及工藝條件,對3批樣品以外觀、崩解時限、水分、含有量為工藝的評價指標進行驗證,結(jié)果見表4。由表可知,各項指標均符合《中國藥典》2010年版附錄項下對膠囊劑的質(zhì)量要求,表明該工藝可行,生產(chǎn)出的產(chǎn)品符合要求。

        表4 水黃皮總黃酮膠囊工藝驗證結(jié)果

        2.6 薄層鑒別 取本品內(nèi)容物0.5 g,置于具塞三角瓶中,加甲醇100 mL,超聲(250 W、100 Hz)30 min,過濾,水浴蒸干,加水10 mL溶解,石油醚∶乙酸乙酯(92∶8)萃取3次,每次10 mL,揮干脂質(zhì)部分,移取1 m L,用甲醇溶解,作為供試品溶液。另取水黃皮對照藥材2.0 g,同法制成對照藥材溶液。再取水黃皮次素對照品1.0 mg,加甲醇10 mL溶解,作為對照品溶液。上述3種溶液各取2~5 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-丙酮(7.5∶2.5)為展開劑展開,于紫外燈(365 nm)下觀察,結(jié)果見圖2。由圖可知,在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上,呈現(xiàn)出相同顏色的斑點。

        1.供試品 2.對照品 3.對照藥材圖2 水黃皮膠囊的TLC色譜圖

        2.7 總黃酮含有量的測定

        2.7.1 對照品溶液的制備 精密稱取真空干燥24 h的水黃皮次素對照品3.61 mg,置于50 mL量瓶中,甲醇溶解,定容至刻度,超聲(250 W、100 Hz)30 min,放冷,甲醇補足至刻度,搖勻,即得質(zhì)量濃度為72.2 μg/m L的水黃皮次素對照品溶液。

        2.7.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品內(nèi)容物30 mg,置于100 mL量瓶中,甲醇定容至刻度,超聲(250 W、100 Hz)30 min,放冷,甲醇補足至刻度,搖勻,濾過,取濾液1 m L,置于25 m L量瓶中,甲醇定容,即得。

        2.7.3 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液0.3、0.5、0.7、0.9、1.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,258 nm波長下測定。以吸收度為縱坐標(Y),水黃皮次素質(zhì)量濃度為橫坐標(X),得回歸方程Y= 0.101 4X+0.012 5,r=0.999 8,表明在2.16~7.22 μg/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。

        2.7.4 精密度試驗 精密移取對照品溶液0.9 mL,置于10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,258 nm波長下測定其吸收度,重復(fù)6次。結(jié)果,RSD為0.29%,說明儀器精密度良好。2.7.5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液適量,每隔3 h測定1次,連續(xù)5次。結(jié)果,RSD為0.41%,說明該樣品在15 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.7.6 重復(fù)性試驗 精密稱取本品內(nèi)容物30 mg,共6份,按“2.7.2”項下方法制備供試品溶液,重復(fù)6次。結(jié)果,RSD為0.65%,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.7.7 加樣回收試驗 精密稱取含有量已知的內(nèi)容物50 mg,共9份,分成3組,分別按80%、100%、120%的比例精密加入水黃皮次素對照品,按“2.7.2”項下方法制備供試品溶液,進行測定。結(jié)果,加樣回收率為99.48%,RSD為1.11%。

        2.7.8 總黃酮含有量的測定[13]按“2.7.2”項下方法制備3份供試品溶液,計算水黃皮膠囊中總黃酮的平均含有量為507.57 mg/g。根據(jù)生產(chǎn)實際,按平均含有量的80%計算,即不得低于406.06 mg/g。若每粒膠囊劑按0.4 g計算,則每粒含總黃酮應(yīng)不低于162.42 mg。

        2.8 水黃皮次素的含有量測定

        2.8.1 對照品溶液的制備 按“2.7.1”項下方法制備。

        2.8.2 供試品溶液的制備 精密稱取內(nèi)容物30 mg,置于500 m L量瓶中,甲醇定容至刻度,超聲(250 W、100 Hz)30 min,放冷,甲醇補足至刻度,搖勻,濾過,即得。

        2.8.3 色譜條件[14]大連依力特Hypersi1-C18ODS2色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相為0.1%甲酸溶液(三乙胺調(diào)pH=3.0)-乙腈(60∶40);體積流量0.8mL/min;柱溫35℃;檢測波長258 nm;進樣量20 μL,結(jié)果見圖3。

        圖3 水黃皮膠囊中水黃皮次素的HPLC色譜圖

        2.8.4 線性關(guān)系考察 精密移取水黃皮素對照品儲備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10 mL,置于10 m L量瓶中,甲醇定容至刻度,搖勻,在“2.8.3”項色譜條件下測定。以峰面積為縱坐標(Y),水黃皮次素質(zhì)量濃度為橫坐標(X)進行線性回歸,得到回歸方程Y= 149 292X+22 032,r=0.999 9。在7.22~72.2 μg/m L范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。

        2.8.5 精密度試驗 精密吸取水黃皮次素對照品溶液9 mL,置于10 mL量瓶中,甲醇稀釋至刻度,測定其峰面積,重復(fù)6次。結(jié)果,RSD為0.15%,說明儀器精密度良好。

        2.8.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批號水黃皮膠囊內(nèi)容物適量,按“2.8.2”項下方法制備供試品溶液,每隔3 h進樣1次,共5次,記錄峰面積。結(jié)果,RSD為1.69%,說明該樣品在15 h內(nèi)穩(wěn)定,滿足測定要求。

        2.8.7 重復(fù)性試驗 取同一批號水黃皮膠囊內(nèi)容物適量,平行6份,按“2.8.2”項下方法制備供試品溶液。結(jié)果,RSD為1.78%,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.8.8 加樣回收試驗 精密稱取含有量已知的水黃皮膠囊內(nèi)容物15 mg,共9份,分成3組,分別按照80%、100%、120%比例準確加入水黃皮次素對照品,按“2.8.2”項下方法制備供試品溶液,測定含有量。結(jié)果,回收率為99.08%,RSD為2.50%。

        2.8.9 水黃皮次素含有量的測定 按“2.8.2”項下方法制備3份供試品溶液,在“2.8.3”項色譜條件下測定,計算水黃皮膠囊中水黃皮次素的平均含有量為123.65 mg/g。根據(jù)生產(chǎn)實際,按平均含有量的80%計算,即不得低于98.92 mg/g。若每粒膠囊劑按0.4 g計算,則每粒含水黃皮次素應(yīng)不低于39.56 mg。

        3 討論

        目前水黃皮單味藥材及其制劑并未收載于《中國藥典》中,結(jié)合其現(xiàn)有的化學(xué)成分和藥理研究,本實驗對其提取、濃縮、干燥工藝進行了考察,用70%乙醇回流提取3次,減壓濃縮至相對密度為1.25~1.30(60℃)的稠膏,然后用50~60℃的程序升溫減壓干燥,得到表面成蜂窩狀、疏松、易粉碎的干膏粉。然后,考察了水黃皮總黃酮原粉的吸濕性和流動性,以休止角、吸濕率、臨界相對濕度、堆密度為篩選指標,選用以10%微粉硅膠為最佳輔料的成型工藝。在該工藝下,藥粉直接填充膠囊,減少了制粒過程中原料的損失,而且操作簡單、穩(wěn)定、可靠,可滿足實際生產(chǎn)過程中膠囊制劑的要求。

        基于水黃皮質(zhì)量標準[15]研究的基礎(chǔ)上,本實驗采用薄層色譜對膠囊中水黃皮藥材進行定性鑒別,發(fā)現(xiàn)用石油醚:乙酸乙酯(92∶8)萃取后得到的色譜圖不僅較前期依次用石油醚、乙酸乙酯萃取后更清晰,斑點更分明,而且重現(xiàn)性更好。研究表明,水黃皮的主要活性物質(zhì)為黃酮類成分,因此采用UV和HPLC法分別控制水黃皮膠囊中總黃酮和水黃皮次素的含有量,結(jié)果顯示,這兩種方法準確、可靠、重現(xiàn)性好,可有效控制水黃皮膠囊劑的質(zhì)量,為水黃皮及其制劑的深入研究提供參考。

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        *通信作者:董 志(1960—),男,教授,博士生導(dǎo)師,從事神經(jīng)藥理方面研究。Te1:(023)68486678,E-mai1:zhidong073@hotmai1.com

        作者簡介:肖成燕(1989—),女,碩士,從事熱帶天然藥物的藥理毒理研究。Te1:(0898)66832932,E-mai1:1063007138@qq.com

        基金項目:海南省中藥現(xiàn)代化專項項目(2011ZY020)

        收稿日期:2014-09-09

        doi:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.049

        中圖分類號:R944

        文獻標志碼:B

        文章編號:1001-1528(2016)01-0200-04

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