肖成燕， 朱 毅， 董 志*

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，重慶400016；2.海南省藥品檢驗所，海南海口570216）

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水黃皮膠囊劑的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

肖成燕1， 朱 毅2， 董 志1*

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，重慶400016；2.海南省藥品檢驗所，海南海口570216）

摘要：目的 建立水黃皮膠囊的制備工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 以休止角、吸濕率、臨界相對濕度、堆密度為考察指標(biāo)，確定水黃皮膠囊的處方組成；TLC法對膠囊中的水黃皮進(jìn)行定性鑒別；紫外分光光度和HPLC法分別測定總黃酮和水黃皮次素的含有量。結(jié)果 最佳處方為10％微粉硅膠，臨界相對濕度為63.9％，選用0號膠囊即可滿足膠囊劑裝填要求。TLC鑒別斑點清晰，無干擾。每粒膠囊劑含總黃酮不低于162.42 mg/g，水黃皮次素不低于39.56 mg/g。結(jié)論 該工藝路線合理可行，質(zhì)量控制方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于控制水黃皮膠囊的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：水黃皮膠囊；制備工藝；總黃酮；水黃皮次素；TLC；HPLC；紫外分光光度

水黃皮Pongamia pinnata（L.）Merr.（異名Pongamia glabra）為豆科水黃皮屬的半紅樹植物［1］，具有抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、抗?jié)儭⒖寡趸?、降血糖以及降血脂等作用?，F(xiàn)代研究表明，水黃皮主要含黃酮、三萜、生物堿、脂肪酸及類固醇，其主要活性成分為黃酮類化合物［2-4］，尤其在治療胃潰瘍中，水黃皮次素具有獨特的效果［5］。本實驗在前期對水黃皮有效部位總黃酮提取、分離、純化研究［6-7］的基礎(chǔ)上，以休止角、吸濕率、臨界相對濕度、堆密度為考察指標(biāo)，進(jìn)一步對其膠囊劑的制備進(jìn)行研究，并采用TLC進(jìn)行定性鑒別，紫外UV和HPLC進(jìn)行含有量測定，建立合理可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其工業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

XFB-200高速中藥粉碎機(jī)（吉首市中誠制藥機(jī)械廠）；標(biāo)準(zhǔn)篩（上虞市申克試驗儀器廠）；手工膠囊填充板（長沙市雨花區(qū)中誠制藥機(jī)械廠）；BPH9200A高溫鼓風(fēng)干燥箱（上海藍(lán)豹試驗設(shè)備有限公司）；AE240電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；SK8200HP超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；EVOLUTION 300紫外可見分光光度計（美國賽默飛世爾科技公司）；LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司）。

藥用乳糖、糊精、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、微粉硅膠（安徽山河藥用輔料股份有限公司）；0號空心膠囊（浙江綠健膠囊有限公司）。水黃皮次素對照品（美國Chroma-Dex公司）；水黃皮總黃酮粉（總黃酮含有量56.39％，水黃皮次素含有量13.74％，自制，水黃皮莖醇經(jīng)D101大孔樹脂純化后濃縮，減壓干燥，即得）。乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 輔料的選擇 預(yù)試驗表明，水黃皮總黃酮原粉的流動性差、吸濕性強(qiáng)，故選用乳糖、糊精、預(yù)膠化淀粉、微粉硅膠和微晶纖維素作為輔料，按表1配方混合藥粉，過篩，考察流動性和吸濕性，以確定輔料種類。

表1　輔料與水黃皮總黃酮原粉的配方組成

2.1.1 休止角的測定［8］采用固定漏斗法，將3只漏斗串聯(lián)，使最底端距水平坐標(biāo)紙1 cm，將藥粉沿漏斗壁倒入最上層的漏斗，直到藥粉圓錐尖端接觸到漏斗口為止，結(jié)果見表2。

表2　不同輔料的休止角及吸濕率

2.1.2 吸濕率的測定［9］將底部盛有NaC1飽和溶液的玻璃干燥器于實驗前1天，放入25℃恒溫培養(yǎng)箱中。精密稱取各配方，平鋪于已恒重的扁形稱量瓶中，厚度約2 mm，瓶蓋打開，置于玻璃干燥器中，間隔一段時間稱量，結(jié)果見表2。

由表可知，水黃皮總黃酮原粉中加入輔料后，其流動性和吸濕性都有所改善。其中，以微粉硅膠為輔料時，其休止角可達(dá)到30°左右，而且在75％濕度環(huán)境中放置6 h后，仍呈粉末狀。因此，選擇微粉硅膠為輔料制備膠囊劑。2.2 輔料用量的篩選 為了確定微粉硅膠的最佳用量，按表3配方混合藥粉，考察不同配方的流動性和吸濕性，結(jié)果見表3。

表3　不同比例微粉硅膠的休止角及吸濕率

由表可知，隨著微粉硅膠比例的增加，其流動性和吸濕性逐漸得到改善。當(dāng)置于75％濕度環(huán)境中6 h后，微粉硅膠為5.0％的配方表面有少量黏結(jié)，其他配方均為粉末。根據(jù)休止角和吸濕率測定結(jié)果的綜合分析，選擇微粉硅膠的最佳比例為10％。

2.3 臨界相對濕度的測定［10］將混合藥粉干燥至恒重后，平鋪于已恒重的稱量瓶底部，厚度約2 mm，再置于不同相對濕度的玻璃干燥器中，7 d后稱量。結(jié)果，相對濕度分別為0.59％、2.23％、3.78％、6.82％、15.41％、24.17％、29.65％。以吸濕率為縱坐標(biāo)，相對濕度為橫坐標(biāo)，應(yīng)用SPSS軟件作圖，測得其臨界相對濕度為63.9％，見圖1。

圖1　不同相對濕度下的吸濕率

2.4 選擇膠囊的型號 先稱定量筒質(zhì)量，將適量混合藥粉置于其中，再稱定其質(zhì)量。上下振動，至體積不變時讀出體積，計算3次，測得堆密度分別為0.618 5、0.616 1、0.610 8 g/mL，平均值為0.615 1 g/mL，RSD=0.39％。根據(jù)藥效學(xué)實驗研究結(jié)果，水黃皮總黃酮的有效劑量為（標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量60 kg）［11］150×0.162 =24.3 mg/kg，日服劑量每人約1.5 g。另外，每粒膠囊可裝0.4 g，每日服用4粒，其所占體積約0.65 mL，與0號膠囊0.67 mL接近，故選用0號膠囊填充。

2.5 工藝驗證［12］按照上述處方及工藝條件，對3批樣品以外觀、崩解時限、水分、含有量為工藝的評價指標(biāo)進(jìn)行驗證，結(jié)果見表4。由表可知，各項指標(biāo)均符合《中國藥典》2010年版附錄項下對膠囊劑的質(zhì)量要求，表明該工藝可行，生產(chǎn)出的產(chǎn)品符合要求。

表4　水黃皮總黃酮膠囊工藝驗證結(jié)果

2.6 薄層鑒別 取本品內(nèi)容物0.5 g，置于具塞三角瓶中，加甲醇100 mL，超聲（250 W、100 Hz）30 min，過濾，水浴蒸干，加水10 mL溶解，石油醚∶乙酸乙酯（92∶8）萃取3次，每次10 mL，揮干脂質(zhì)部分，移取1 m L，用甲醇溶解，作為供試品溶液。另取水黃皮對照藥材2.0 g，同法制成對照藥材溶液。再取水黃皮次素對照品1.0 mg，加甲醇10 mL溶解，作為對照品溶液。上述3種溶液各取2～5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮（7.5∶2.5）為展開劑展開，于紫外燈（365 nm）下觀察，結(jié)果見圖2。由圖可知，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，呈現(xiàn)出相同顏色的斑點。

1.供試品 2.對照品 3.對照藥材圖2　水黃皮膠囊的TLC色譜圖

2.7 總黃酮含有量的測定

2.7.1 對照品溶液的制備 精密稱取真空干燥24 h的水黃皮次素對照品3.61 mg，置于50 mL量瓶中，甲醇溶解，定容至刻度，超聲（250 W、100 Hz）30 min，放冷，甲醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為72.2 μg/m L的水黃皮次素對照品溶液。

2.7.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品內(nèi)容物30 mg，置于100 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，超聲（250 W、100 Hz）30 min，放冷，甲醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，濾過，取濾液1 m L，置于25 m L量瓶中，甲醇定容，即得。

2.7.3 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液0.3、0.5、0.7、0.9、1.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，258 nm波長下測定。以吸收度為縱坐標(biāo)（Y），水黃皮次素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），得回歸方程Y= 0.101 4X+0.012 5，r=0.999 8，表明在2.16～7.22 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.7.4 精密度試驗 精密移取對照品溶液0.9 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，258 nm波長下測定其吸收度，重復(fù)6次。結(jié)果，RSD為0.29％，說明儀器精密度良好。2.7.5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液適量，每隔3 h測定1次，連續(xù)5次。結(jié)果，RSD為0.41％，說明該樣品在15 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7.6 重復(fù)性試驗 精密稱取本品內(nèi)容物30 mg，共6份，按“2.7.2”項下方法制備供試品溶液，重復(fù)6次。結(jié)果，RSD為0.65％，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7.7 加樣回收試驗 精密稱取含有量已知的內(nèi)容物50 mg，共9份，分成3組，分別按80％、100％、120％的比例精密加入水黃皮次素對照品，按“2.7.2”項下方法制備供試品溶液，進(jìn)行測定。結(jié)果，加樣回收率為99.48％，RSD為1.11％。

2.7.8 總黃酮含有量的測定［13］按“2.7.2”項下方法制備3份供試品溶液，計算水黃皮膠囊中總黃酮的平均含有量為507.57 mg/g。根據(jù)生產(chǎn)實際，按平均含有量的80％計算，即不得低于406.06 mg/g。若每粒膠囊劑按0.4 g計算，則每粒含總黃酮應(yīng)不低于162.42 mg。

2.8 水黃皮次素的含有量測定

2.8.1 對照品溶液的制備 按“2.7.1”項下方法制備。

2.8.2 供試品溶液的制備 精密稱取內(nèi)容物30 mg，置于500 m L量瓶中，甲醇定容至刻度，超聲（250 W、100 Hz）30 min，放冷，甲醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.8.3 色譜條件［14］大連依力特Hypersi1-C18ODS2色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為0.1％甲酸溶液（三乙胺調(diào)pH=3.0）-乙腈（60∶40）；體積流量0.8mL/min；柱溫35℃；檢測波長258 nm；進(jìn)樣量20 μL，結(jié)果見圖3。

圖3　水黃皮膠囊中水黃皮次素的HPLC色譜圖

2.8.4 線性關(guān)系考察 精密移取水黃皮素對照品儲備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10 mL，置于10 m L量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，在“2.8.3”項色譜條件下測定。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），水黃皮次素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程Y= 149 292X+22 032，r=0.999 9。在7.22～72.2 μg/m L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.8.5 精密度試驗 精密吸取水黃皮次素對照品溶液9 mL，置于10 mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，測定其峰面積，重復(fù)6次。結(jié)果，RSD為0.15％，說明儀器精密度良好。

2.8.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批號水黃皮膠囊內(nèi)容物適量，按“2.8.2”項下方法制備供試品溶液，每隔3 h進(jìn)樣1次，共5次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD為1.69％，說明該樣品在15 h內(nèi)穩(wěn)定，滿足測定要求。

2.8.7 重復(fù)性試驗 取同一批號水黃皮膠囊內(nèi)容物適量，平行6份，按“2.8.2”項下方法制備供試品溶液。結(jié)果，RSD為1.78％，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8.8 加樣回收試驗 精密稱取含有量已知的水黃皮膠囊內(nèi)容物15 mg，共9份，分成3組，分別按照80％、100％、120％比例準(zhǔn)確加入水黃皮次素對照品，按“2.8.2”項下方法制備供試品溶液，測定含有量。結(jié)果，回收率為99.08％，RSD為2.50％。

2.8.9 水黃皮次素含有量的測定 按“2.8.2”項下方法制備3份供試品溶液，在“2.8.3”項色譜條件下測定，計算水黃皮膠囊中水黃皮次素的平均含有量為123.65 mg/g。根據(jù)生產(chǎn)實際，按平均含有量的80％計算，即不得低于98.92 mg/g。若每粒膠囊劑按0.4 g計算，則每粒含水黃皮次素應(yīng)不低于39.56 mg。

3 討論

目前水黃皮單味藥材及其制劑并未收載于《中國藥典》中，結(jié)合其現(xiàn)有的化學(xué)成分和藥理研究，本實驗對其提取、濃縮、干燥工藝進(jìn)行了考察，用70％乙醇回流提取3次，減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30（60℃）的稠膏，然后用50～60℃的程序升溫減壓干燥，得到表面成蜂窩狀、疏松、易粉碎的干膏粉。然后，考察了水黃皮總黃酮原粉的吸濕性和流動性，以休止角、吸濕率、臨界相對濕度、堆密度為篩選指標(biāo)，選用以10％微粉硅膠為最佳輔料的成型工藝。在該工藝下，藥粉直接填充膠囊，減少了制粒過程中原料的損失，而且操作簡單、穩(wěn)定、可靠，可滿足實際生產(chǎn)過程中膠囊制劑的要求。

基于水黃皮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［15］研究的基礎(chǔ)上，本實驗采用薄層色譜對膠囊中水黃皮藥材進(jìn)行定性鑒別，發(fā)現(xiàn)用石油醚：乙酸乙酯（92∶8）萃取后得到的色譜圖不僅較前期依次用石油醚、乙酸乙酯萃取后更清晰，斑點更分明，而且重現(xiàn)性更好。研究表明，水黃皮的主要活性物質(zhì)為黃酮類成分，因此采用UV和HPLC法分別控制水黃皮膠囊中總黃酮和水黃皮次素的含有量，結(jié)果顯示，這兩種方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，可有效控制水黃皮膠囊劑的質(zhì)量，為水黃皮及其制劑的深入研究提供參考。

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*通信作者：董 志（1960—），男，教授，博士生導(dǎo)師，從事神經(jīng)藥理方面研究。Te1：（023）68486678，E-mai1：zhidong073@hotmai1.com

作者簡介：肖成燕（1989—），女，碩士，從事熱帶天然藥物的藥理毒理研究。Te1：（0898）66832932，E-mai1：1063007138@qq.com

基金項目：海南省中藥現(xiàn)代化專項項目（2011ZY020）

收稿日期：2014-09-09

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.049

中圖分類號：R944

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1001-1528（2016）01-0200-04