李芳蓉* ，劉鳳霞，劉淑梅，陳軍

（甘肅中醫(yī)藥大學定西校區(qū) 甘肅 定西，743000）

超聲波清洗中草藥當歸的研究

李芳蓉* ，劉鳳霞，劉淑梅，陳軍

（甘肅中醫(yī)藥大學定西校區(qū) 甘肅 定西，743000）

在25℃的水中分別以頻率為40kHz，功率為250W的超聲波清洗干當歸和普通水洗干當歸。分別測定了清洗水中和清洗后的當歸中當歸粗多糖的含量，得到結(jié)論為：（1）當歸很適合于超聲波洗滌，不僅清洗潔凈度高，而且省水省時耗能少。（2）超聲波清洗和普通水洗當歸后清洗水中當歸多糖含量都很低且相差甚微，說明當歸的清洗過程中當歸多糖的損失量都很小。（3）超聲波清洗和普通水洗后的當歸中當歸多糖的含量相差較小，其粗當歸多糖的含量相對文獻值較高，說明清洗過程中當歸多糖的損失量很少，與清洗水中當歸多糖的含量很低相一致。超聲波清洗是理想的中藥材當歸清洗方法，具有相當?shù)目尚行院捅匾?，以及廣泛的應用和推廣價值。

當歸；超聲波清洗；超聲功率；超聲頻率；水溫；清潔度

1. 引言

當歸藥材為傘形科植物當歸[Angelica sinensis (Oliv.)Diels]的干燥根。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，屬無毒上品藥，素有“十方九歸”之美譽。其味甘、辛、微苦，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)。有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥通便之功效。臨床用含當歸藥物多達80余種[1]，亦可作為滋補品食用[2]。主要化學成分有揮發(fā)油、有機酸類、多糖類、核苷類、氨基酸和微量元素等[3]。其中主要有效成分為當歸多糖、阿魏酸、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞、丁苯酞和核苷等?？芍委熝撐S、眩暈心悸，月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、腸燥便秘，虛寒腹痛，風濕痹痛，跌仆損傷，癰疽瘡瘍等癥[4]。

當歸多糖是當歸的主要水溶性成分，具有促進造血、增強免疫功能[5]、抗腫瘤[6-7]、抗輻射損傷[8]、拮抗脾臟萎縮、鎮(zhèn)痛及抗氧化、增強血清和腦組織SOD活力[9]等廣泛的藥理作用和生物活性。現(xiàn)已成為當歸藥效成分研究的熱點之一。植物多糖的含量測定現(xiàn)多采用苯酚- 硫酸法[10]。

當歸為典型的根類中草藥，藥食兩用，根部可能帶有大量泥土、病原生物及蟲卵等，傳統(tǒng)上深加工、貯藏和運銷前必須用大量的人力進行刷洗，耗時費力；或用滾筒或高壓水射流洗滌，藥材損耗大、耗費大量水。且因干當歸表面皺縮、不規(guī)整，污垢藏于縫隙或根叉深處而清洗不掉，凈洗效果欠佳，直接影響其藥用、加工和開發(fā)。洗滌后還需晾曬和硫黃熏蒸防腐、防蟲蛀等。應用超聲波輔助清洗中藥材，既可降低勞動強度、節(jié)水，還可使附著在藥材表面尤其是莖、根須間隙內(nèi)的泥土、蟲卵、病原體等雜物得到快速徹底的清洗，不留死角，且潔凈度高。同時超聲波的空化效應，對抑制蟲卵與病原微生物、防止有效成分散失等方面更有效[11]。此外，應用超聲波清洗實現(xiàn)遙控或自動化清洗更加容易。當歸屬于典型的根類中草藥，很適合于超聲波洗滌，不但清洗潔凈度高[12]、殺毒滅菌效果好，防腐、防蟲蛀，還可提高藥效成分的利用率、減少有效成分散失，縮短晾曬時間，減少硫黃熏蒸等步驟。

本實驗組在超聲波清洗當歸初步試驗的基礎上，以當歸多糖為例，以硫酸-苯酚比色法[13,14]通過對普通水洗和超聲波清洗水中當歸多糖的測定、普通水洗和超聲波清洗后當歸中當歸多糖的測定，進一步驗證超聲波清洗當歸后有效成分散失與否、散失量高低。

2. 材料與方法

2.1 試驗材料及儀器

2.1.1 藥材來源

本實驗所用當歸由甘肅省岷縣四族鄉(xiāng)四族村藥農(nóng)提供，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學定西校區(qū)生化系張尚智教授鑒定，為傘形科植物當歸的干燥根。

2.1.2 儀器

KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲有限公司出品。TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-30/50L，上海況勝實業(yè)發(fā)展有限公司）電子天平（精度0.0001g，上海?？惦娮觾x器廠）。超帥智能高速中藥粉碎機（CS-1000 1ADY2，武義海納電器有限公司）。

2.1.2 試劑

實驗用水為一次蒸餾水，主要試劑有葡萄糖對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號：0831-9606），苯酚（重蒸餾）、無水乙醇、濃硫酸均為分析純。

2.2 當歸的清洗

2.2.1 超聲波清洗和普通水洗當歸

分別稱取相同量的兩份當歸，分別在25℃的等量的水中間歇性手工振搖水洗和超聲波輔助清洗（250W、40kHz） 清洗60min，兩種方法清洗后的當歸都達到了表面清潔，無明顯泥土或泥斑。清洗后的當歸在40℃的烘箱中干燥2h，收集于塑料自封袋中備用。清洗后的水各取2000mL，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40℃溫度下濃縮至500mL，收集于棕色試劑瓶中備用。

2.3 超聲波清洗和普通水洗當歸后當歸及清洗后水中當歸多糖的測定

2.3.1 溶液的配制

2.3.1.1 對照品溶液

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品0.1250g，置于250mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為0.5000mg/mL的葡萄糖對照品溶液，備用。吸取該葡萄糖對照品溶液25mL，注入50mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為0.2500mg/mL的葡萄糖對照品溶液[ ]，保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.1.2 苯酚溶液的配制

精密稱取苯酚12.5002g，置于250mL棕色容量瓶中，加適量蒸餾水溶解，定容至刻度，即得5%苯酚溶液，置于4℃的冰箱中，冷藏備用。該試劑宜現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.3.1.3 供試品溶液的制備

精密稱取當歸樣品粉末（已過 40目篩），5.0002g置圓底燒瓶中，加80%乙醇100mL加熱回流2h，抽濾；取濾渣加水60mL加熱回流2h，趁熱過濾，將濾液定容至100mL容量瓶中，即得。

2.3.2 當歸多糖的測定

2.3.2.1 標準曲線的繪制

精密移取質(zhì)量濃度為0.25mg/mL葡萄糖對照品溶液各0.00， 0.50，0.75，1.00，1.25，1.50，1.75mL置于已編號為1～7的25mL干燥具塞刻度試管中，各加入17.50mL濃硫酸，新配制的5%的苯酚3.75mL，蒸餾水補齊至刻度，沸水浴10min后，立即置于冰水浴中冷卻5min，以5號標準溶液做全波長（200～800nm）掃描，確定了λmax=484nm。在λmax=484nm下分別測定1～7號標準溶液的吸光度（A），以吸光度（A）為縱坐標，以葡萄糖對照品溶液質(zhì)量濃度（C）為橫坐標，求得回歸方程，繪制標準Y=40.203X-0.075，R2=0.9997。葡萄糖對照品溶液標準曲線見圖1。

圖1 葡萄糖對照品溶液標準曲線

2.3.2.2 超聲波清洗和普通水洗當歸后清洗水中當歸多糖的測定

精密移取分別用普通水洗和超聲波輔助清洗的已濃縮的清洗液1.25mL，與2.3.2.1繪制標準曲線的方法顯色，測定各自溶液的吸光度，并計算當歸粗多糖的含量。

2.3.2.2 超聲波清洗和普通水洗當歸中當歸多糖的測定

精密移取普通水洗和超聲波輔助清洗的當歸供試品溶液各1.25mL，與2.3.2.1繪制標準曲線的方法顯色，測定各自溶液的吸光度，均平行測定3次，并計算當歸粗多糖的含量。

表1 當歸粗多糖含量測定結(jié)果（n=3）

3. 結(jié)果與討論

3.1 超聲波清洗和普通水洗當歸后清洗水中當歸多糖含量很小且相差甚微

對分別用超聲波輔助清洗和普通水洗的已濃縮的清洗液，與2.3.2.1繪制標準曲線的方法顯色，測定各自溶液的吸光度，結(jié)果測得各自吸光度都較大（超過2.00000），因此又將溶液稀釋10倍后進行了相同的測定，所得吸光度分別為0.22621和0.22742，計算得各自當歸多糖的含量分別為0.007492mg/mL和0.007522mg/mL，折合成最初的未濃縮的清洗液濃度0.01873mg/mL和0.01881mg/mL，兩者濃度相差不大且溶液中當歸粗多糖的含量都很小，說明無論是普通水洗和超聲波清洗當歸，當歸的有效成分之一當歸多糖的損失量都很小。

3.2 超聲波清洗和普通水洗當歸中當歸多糖的含量較高且相差較小

由實驗數(shù)據(jù)可知，無論是超聲波輔助還是普通水洗后的當歸，其粗當歸多糖的含量相對其他文獻值[ , ]而言都比較高，說明清洗過程中當歸多糖的損失量很少，與清洗水中當歸多糖的含量很低相對應。

4. 結(jié)論

在25℃的等量的水中分別以頻率為40kHz，功率為250W的超聲波清洗和普通（間歇性手工振搖）水洗干當歸，并分別測定了清洗水中和清洗后的當歸中當歸粗多糖的含量，得到以下結(jié)論：

（1）當歸根部可能帶有大量泥土、病原生物及蟲卵等，普通水洗很難徹底清除干凈，很適合于超聲波洗滌，不僅清洗潔凈度高、殺毒滅菌效果好，防腐、防蟲蛀，還可縮短晾曬時間，減少硫黃熏蒸等步驟。

（2）超聲波清洗和普通水洗當歸后清洗水中當歸多糖含量都很低且相差甚微，說明無論是普通水洗和超聲波清洗當歸，當歸的有效成分之一當歸多糖的損失量都很小。

（3）超聲波清洗和普通水洗后的當歸中當歸多糖的含量相差較小，其粗當歸多糖的含量相對文獻值較高，說明清洗過程中當歸多糖的損失量很少，與清洗水中當歸多糖的含量很低相一致。

綜上所述，超聲波清洗當歸既可保證當歸中當歸多糖等基本無流失，省時省水，而且清潔度高，耗能少，是理想的中藥材清洗方法，具有相當?shù)目尚行院捅匾?，以及廣泛的應用和推廣價值。

[1] MA Jian-Ping, GUO Zhi-Bing, JIN Ling, et al．Phytochemical progress made in investigations of Angelica sinesis（Oliv．）Diels [J]． Chinese Journal of Natural Medicines, 2015(4): 241-249

[2] 曾東． 當歸及其提取物化學成分紅外光譜法分析[J]． 中國現(xiàn)代藥物應用, 2016, 10(4): 287-288

[3] 康軍． 當歸化學成分及其藥理作用研究進展[J]． 中醫(yī)中藥, 2005, 2(23): 120

[4] 中國藥典委員會． 中國藥典2015版（一部）[S]． 北京: 化學工業(yè)出版社, 2015 : 124-125

[5] 曹蔚, 李小強, 侯穎． 當歸多糖-1cII的抗腫瘤活性研究[J]．中國新藥雜志, 2008, 17(12): 1018-1021

[6] 王瑾, 劉君炎, 夏豐年． 當歸多糖促進瘤苗抗瘤作用初探[J]．遼寧中醫(yī)雜志, 1999, 26(1): 39-40．

[7] 吳素珍, 李加林, 陳水親． 硫酸酯化當歸多糖抗腫瘤實驗研究[J]． 時珍國醫(yī)國藥, 2012, 23(2): 319-320

[8] 洪艷, 劉君炎, 張渝侯, 等． 當歸多糖增強放射損傷小鼠胸腺細胞增殖及紅細胞C3b受體黏附功能的實驗研究[J]． 中國當代兒科雜, 2001, 3(3): 250-252

[9] 鄭敏, 王亞平． 當歸多糖對人髓系多向造血祖細胞增殖分化的影響及其機理研究[J]． 解剖學報, 2002, 25(2): 105-107

[10] 劉云． 當歸多糖的提取及含量測定[J]． 現(xiàn)代中藥研究與實踐, 2003,17(1): 49-50

[11] 張明鐸． 超聲波清洗在替代ODS清洗工藝技術(shù)中的獨特作用[J]． 聲學技術(shù), 2002, 4(21): 195-199

[12] 孫卓, 徐峰, 王蔚, 等． 中草藥超聲波清洗技術(shù)的理論分析[J]． 農(nóng)業(yè)與技術(shù), 2015, 35 (1): 72-73

[13] 張素斌, 呂嘉欣． 四種當歸多糖提取方法的比較研究[J]． 天津農(nóng)業(yè)科學, 2013(10): 33-36

[14] 王英, 張尚智, 朱田田, 等． 當歸有效成分的提取與分析研究進展[J]． 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志, 2016, 35 (2): 75-79

[15] 陳麗萍, 劉雄, 夏鵬飛, 等． 正交設計優(yōu)化當歸多糖的定量分析方法[J]． 解放軍醫(yī)藥雜志, 2015, 27(10): 100-102

[16] 馬毅, 晉玲, 王振恒, 等． 甘肅岷縣不同海拔栽培當歸多糖含量比較研究[J]． 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志, 2013, 32 (2): 7-9

[17] 商澎, 楊鐵虹, 賈敏, 等． 當歸多糖的分離、純化及分析鑒定[J]． 第四軍醫(yī)大學學報, 2001, 22(14): 1311-1314

2015A-180甘肅省高等學校科研項目 超聲波清洗技術(shù)在根莖類中草藥凈洗中的應用研究。2015B-143年度甘肅省高等學?？蒲许椖浚ǎ?/p>

S631.2；S634.3

A