■邵紫培　尹艷軍　袁洪水

（河北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，河北保定071000）

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冬蟲夏草菌粉對肉雞生長性能和免疫功能的影響

■邵紫培尹艷軍袁洪水

（河北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，河北保定071000）

摘要：試驗旨在研究冬蟲夏草菌粉對肉雞生長性能和免疫功能的影響。將200羽1日齡AA肉雞隨機分為5組，每組4個重復?？瞻讓φ战M僅飼喂基礎(chǔ)日糧；抗生素對照組在基礎(chǔ)日糧中添加350 mg/kg金霉素；冬蟲夏草菌粉試驗組設(shè)低、中、高3個劑量，分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%、0.1%、0.2%冬蟲夏草菌粉。試驗周期42 d，分為前期（1~21 d）、后期（22~42 d）兩個階段。結(jié)果表明，與空白對照組相比，中、高劑量組在增加肉雞均重、平均日增重，降低肉雞料重比，提高肉雞胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，增加機體外周血T淋巴細胞的轉(zhuǎn)化率、增強肉雞白細胞吞噬能力方面均呈顯著水平（P<0.05）；與抗生素對照組相比，可降低腹瀉發(fā)生率。由此可知，冬蟲夏草菌粉可作為飼料添加劑用來提高肉雞的生長性能和免疫功能，替代抗生素預防腹瀉發(fā)生。

關(guān)鍵詞：冬蟲夏草菌粉；肉雞；生長性能；免疫功能

抗生素具有防病、治病作用，從而間接促進生長，因此被長期用于動物飼料添加劑，曾對畜牧業(yè)的發(fā)展起到了一定的促進作用。但抗生素的長期大量使用，導致病原菌產(chǎn)生耐藥性，畜禽機體免疫力下降，極易引發(fā)畜禽內(nèi)源性感染和交叉感染[1-2]。同時，動物性食品中抗生素的殘留對公眾健康和生態(tài)環(huán)境也造成了一定的危害[3]。因此，抗生素替代品的研究和開發(fā)成為諸多科研學者的工作重點。

冬蟲夏草是我國一味傳統(tǒng)的名貴中藥材，主要用于年老體弱、久病不愈的患者，具有補益強壯、抗衰老等保健和防病作用?，F(xiàn)代生物學研究表明，其本質(zhì)是冬蟲夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼蟲而發(fā)育成的蟲菌復合體，成分分析顯示冬蟲夏草含有多糖類、核苷類、生物堿類、環(huán)狀肽類、酶類、多種氨基酸和無機元素等活性成分。藥理學研究表明，蟲草多糖和核苷類成分對于提高免疫功能、預防和治療感染性疾病具有重要作用[4]。由于其生長環(huán)境特殊，資源匱乏、價格昂貴，一直僅用于人的治療藥品和保健品。

隨著人們分離出天然蟲草真菌菌種并研究證明發(fā)酵獲得冬蟲夏草菌絲體與天然冬蟲夏草成分相似，多糖類、核苷類等藥用成分的含量甚至高于天然冬蟲夏草，且二者具有相同的功效和藥理作用[5-7]。趙樂樂等[8]研究表明，用人工培植蟲草菌絲粉作為雞飼料添加劑，可以促進其生長發(fā)育，提高生長性能，改善雞肉品質(zhì)。潘美慧等[9]用蝙蝠蛾擬青霉菌株發(fā)酵蟲草粉能夠提高雞的細胞免疫水平，增強免疫力?？梢娤x草菌粉作為飼料添加劑同樣在提高動物免疫力、防病治病、促生長等方面具有良好的效果。

通過人工發(fā)酵生產(chǎn)制備蟲草菌粉工藝簡單，技術(shù)成熟，易于大規(guī)模生產(chǎn)，不僅提高了產(chǎn)量，改善了天然冬蟲夏草供不應求的局面，也極大地降低了生產(chǎn)成本，為其在養(yǎng)殖行業(yè)中規(guī)?；瘧玫於藞詫嵉幕A(chǔ)。本研究以本實驗室從西藏那曲冬蟲夏草分離的CC-10菌株制備的蟲草菌粉為試驗材料，研究了其對肉雞免疫功能和生長性能的影響，為研究和開發(fā)飼用抗生素替代品添加劑提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗動物：AA肉雞，購于大午種禽公司。

試驗飼料：全期商品日糧，由北京華都飼料有限公司生產(chǎn)。

冬蟲夏草菌粉：由河北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院制藥工程實驗室從那曲冬蟲夏草中分離的冬蟲夏草菌株CC-10，經(jīng)液體發(fā)酵、離心、干燥后制得冬蟲夏草菌粉。

1.2試驗方法

1.2.1試驗動物分組及管理

將200羽1日齡AA肉雞隨機分為5組，每組40羽，設(shè)置4個重復?？瞻讓φ战M飼喂基礎(chǔ)日糧；抗生素對照組在基礎(chǔ)日糧中添加350 mg/kg金霉素；試驗組設(shè)低、中、高三個劑量，分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%、0.1%、0.2%冬蟲夏草菌粉。試驗周期42 d，分為前期（1~21 d）、后期（22~42 d）兩個階段。光照和免疫程序按常規(guī)進行，各組飼養(yǎng)管理條件一致。

1.2.2生長性能測定

試驗期間記錄各組肉雞的耗料量和腹瀉情況，于肉雞第21、42日齡時，對空腹12 h后的各組肉雞進行稱重，計算試驗前期、后期及全期肉雞均重、平均日增重和料重比。

1.2.3免疫器官指數(shù)測定

于肉雞第21、42日齡，每組隨機抽取5羽進行空腹稱重，屠殺。取胸腺、脾臟、法氏囊，剔除多余的脂肪組織，用吸水紙洗凈表面液體后，分析天平稱重。計算免疫器官指數(shù)。

1.2.4外周血T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的測定

外周血T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的測定參考趙超等[10]方法進行。于肉雞第21、42日齡時，每組隨機抽取3只健康肉雞翅下靜脈采血2 ml，肝素抗凝。取抗凝血0.1 ml，加入到裝有1.8 ml細胞液的淋巴細胞轉(zhuǎn)化管中，再加100 μg/ml PHA 0.1 ml。充分搖勻，二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)3 d，每天搖勻2次。培養(yǎng)結(jié)束后，離心棄上清，取沉淀制片、吉姆薩染色，顯微鏡下觀察并計數(shù)200個淋巴細胞中轉(zhuǎn)化的細胞個數(shù)。

T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率(%)=

1.2.5白細胞吞噬率的測定

白細胞吞噬率的測定參照何正義等[11]方法進行。取肝素抗凝血60 μl于無菌的雙凹片中，加白色葡萄球菌菌懸液20 μl（6×108cfu/ml），混勻。將雙凹片置于鋪有厚的濕紗布的平皿內(nèi)，蓋上平皿蓋，37℃培養(yǎng)30 min，10 min混勻一次。培養(yǎng)結(jié)束后，涂片，自然干燥后用瑞-姬氏染色液染色，油鏡鏡檢并計數(shù)。

白細胞吞噬率(%)=

1.3數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以“平均值±標準誤”表示，數(shù)據(jù)處理與分析采用SPSS17.0統(tǒng)計處理軟件，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2結(jié)果與分析

2.1冬蟲夏草菌粉對肉雞生長性能的影響

2.1.1試驗肉雞腹瀉情況

試驗期間，各組肉雞腹瀉情況：空白對照組7只，抗生素對照組3只，低、中、高劑量組分別有5只、3只、1只發(fā)生腹瀉。分籠飼養(yǎng)后，部分肉雞恢復正常，各組因腹瀉死亡情況：空白對照組5只，抗生素對照組2只，低、中、高劑量組分別為3只、1只和0只。結(jié)果表明，與空白對照組相比，冬蟲夏草菌粉可有效降低肉雞腹瀉數(shù)量，減少肉雞死亡；中、高劑量組肉雞因腹瀉死亡只數(shù)少于抗生素對照組，說明冬蟲夏草菌粉與金霉素具有相似功效，抗腹瀉作用明顯。

2.1.2冬蟲夏草菌粉對肉雞均重的影響(見表1)

表1冬蟲夏草菌粉對肉雞均重的影響（g）

由表1可知，21日齡時，與空白對照組相比，低劑量組對肉雞均重影響不顯著（P>0.05），中、高劑量組肉雞均重分別顯著提高6.26%、10.82%（P<0.05）；與抗生素對照組相比，低劑量組肉雞均重顯著降低7.09% （P<0.05），中、高劑量組間差異不顯著（P>0.05）。42日齡時，中、高劑量組較空白對照組分別顯著提高5.90%、6.96%（P<0.05），低劑量組與對照組相比差異不顯著（P>0.05）；與抗生素對照組相比，中、高劑量組肉雞均重分別顯著提高2.72%、3.75%（P<0.05），但二者之間不存在顯著差異（P>0.05）。

2.1.3冬蟲夏草菌粉對肉雞平均日增重的影響(見表2)

由表2可知，試驗前期，與空白對照組相比，低劑量組對肉雞平均日增重影響不顯著（P>0.05），中、高劑量組分別提高6.82%、11.66%，差異顯著（P<0.05）；與抗生素對照組相比，低劑量組顯著降低7.36%（P< 0.05），中、高劑量組差異性不顯著（P>0.05）。試驗后期，與抗生素對照組相比，中劑量組顯著提高3.61% (P<0.05)，低、高劑量組與抗生素對照組相比差異不顯著（P>0.05）。試驗全期，與空白對照組和抗生素對照組相比，低劑量組對平均日增重的影響均不顯著（P> 0.05），而中、高劑量組則呈現(xiàn)顯著性差異（P<0.05）。

表2冬蟲夏草菌粉對肉雞平均日增重的影響（g）

2.1.4冬蟲夏草菌粉對肉雞料重比的影響（見表3）

表3冬蟲夏草菌粉對肉雞料重比的影響

由表3可知，試驗前期，低、高劑量組肉雞料重比與空白對照組相比差異不顯著（P>0.05），但呈現(xiàn)降低的趨勢；中劑量組料重比顯著降低12.72%（P<0.05）。試驗后期，與空白對照組相比，所有處理組對肉雞料重比影響差異均不顯著（P>0.05）。試驗全期，中劑量組料重比較抗生素對照組降低5.53%，差異顯著（P< 0.05），表明中劑量冬蟲夏草菌粉對提高肉雞飼料轉(zhuǎn)化率效果更好。

2.2冬蟲夏草菌粉對肉雞免疫器官指數(shù)的影響(見表4)

表4冬蟲夏草菌粉對肉雞免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表4可知，21日齡時，與空白對照組相比，低劑量組所有免疫器官指數(shù)不存在顯著差異（P>0.05），而中、高劑量組免疫器官指數(shù)均顯著提高（P<0.05）；與抗生素對照組相比，除低劑量組胸腺指數(shù)差異顯著（P<0.05）外，所有處理組對免疫器官指數(shù)影響均不顯著（P>0.05）。42日齡時，與空白對照組和抗生素對照組相比，低、中、高3個劑量組法氏囊指數(shù)差異性不顯著（P>0.05），胸腺指數(shù)顯著提高（P<0.05）；中、高劑量組脾臟指數(shù)顯著高于空白對照組（P<0.05），與抗生素對照組相比差異不顯著（P>0.05）。

2.3冬蟲夏草菌粉對T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響(見表5)

表5冬蟲夏草菌粉對T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響（%）

由表5可知，在肉雞21和42日齡時，與空白對照組相比，低劑量組對肉雞T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響均不顯著（P>0.05），中、高劑量組T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率分別顯著提高10.17%、14.85%和17.30%、22.20%（P< 0.05）；中、高劑量組T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率與抗生素組相比差異不顯著（P>0.05）。

2.4冬蟲夏草菌粉對白細胞吞噬率的影響(見表6)

表6冬蟲夏草菌粉對白細胞吞噬率的影響（%）

由表6可知，21日齡時，各處理組與空白對照組相比對肉雞白細胞吞噬率影響均不顯著（P>0.05），但隨著冬蟲夏草菌粉劑量的增加，白細胞吞噬率逐漸升高。42日齡時，低劑量組白細胞吞噬率與空白對照組相比差異不顯著（P>0.05），中、高劑量組分別顯著提高9.41%、11.54%（P<0.05）；各試驗組與抗生素對照組相比，對肉雞白細胞吞噬率的影響差異均不顯著（P> 0.05），但中、高劑量組白細胞吞噬率高于抗生素對照組，說明冬蟲夏草菌粉對肉雞白細胞吞噬率的影響與金霉素作用效果相似。

3　討論

3.1冬蟲夏草菌粉對肉雞生長性能的影響

液體發(fā)酵冬蟲夏草菌絲體中蟲草多糖、腺苷、麥角甾醇等主要功能成分與天然冬蟲夏草一致且含量接近，甚至高于天然冬蟲夏草[12]。飼料中添加冬蟲夏草菌粉，可以提高肉雞機體抗病力和營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，提高肉雞的生長性能。趙樂樂等[8]研究表明，在飼料中添加蟲草粉可顯著提高7日齡肉雞增重（P< 0.05）。劉正遠等[13]研究顯示，試驗前期，冬蟲夏草菌粉添加組（0.2%冬蟲夏草菌粉）較對照組料重比顯著降低7.80%（P<0.05）；試驗后期冬蟲夏草菌粉添加組比對照組肉雞日增重顯著提高10.89%（P<0.05）。本試驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，試驗前期飼料中添加中劑量的冬蟲夏草菌粉使肉雞的料重比顯著降低12.72%（P<0.05）；試驗前期和后期，添加中、高劑量冬蟲夏草菌粉均可顯著提高肉雞平均日增重（P< 0.05），與劉正遠等試驗結(jié)果相似，但對肉雞平均日增重顯著提高的階段不同，這可能與試驗肉雞品種、生長環(huán)境及飼喂的蟲草粉劑量等有關(guān)。試驗全期，與抗生素對照組相比，中劑量組肉雞均重、平均日增重顯著提高，料重比顯著降低（P<0.05），表明飼料中添加中劑量冬蟲夏草菌粉可以提高肉雞生長性能，效果優(yōu)于抗生素對照組，同時可以避免藥物在雞體內(nèi)殘留。

3.2冬蟲夏草菌粉對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾臟、法氏囊是禽類重要的免疫器官，是免疫細胞形成、分化及抗體形成的主要場所，參與全身的細胞免疫和體液免疫，免疫器官指數(shù)越大，說明免疫機能越強[14]。潘美慧等[15]研究結(jié)果表明，蟲草菌粉中、高劑量組（0.6、1.8 g/kg）飼喂雛雞20日齡后，與對照組相比，脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)與對照組相比顯著提高（P<0.05）。本試驗21日齡時，添加中、高劑量的冬蟲夏草菌粉可顯著提高肉雞免疫器官指數(shù)（胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)），與潘美慧等研究結(jié)果一致。試驗前期，中、高劑量組與抗生素對照組相比差異均不顯著（P>0.05），說明中、高劑量冬蟲夏草菌粉與金霉素一樣，能夠提高肉雞免疫器官指數(shù)，增強其免疫功能。

3.3冬蟲夏草菌粉對T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

據(jù)報道[16]，冬蟲夏草及菌絲體可促進脾臟DNA合成，進而促進淋巴細胞增殖，使外周血T淋巴細胞數(shù)量增加。T淋巴細胞是體內(nèi)主要的免疫活性細胞，其轉(zhuǎn)化率是機體特異性免疫功能評價的一個重要指標。T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率越高，說明淋巴細胞受到刺激后增殖反應越強，機體的細胞免疫能力越強[17]。胡雅婷等[18]研究表明，中、高劑量（0.6、1.8 g/kg）蟲草菌粉能夠極顯著提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率（P<0.01），證明蟲草菌粉能夠提高細胞免疫水平，增強雛雞免疫力。本試驗結(jié)果顯示，21日齡和42日齡時，中、高劑量組肉雞T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率均顯著提高（P<0.05），與胡雅婷等研究結(jié)果不同，這可能與試驗所用菌種或劑量有關(guān)。

3.4冬蟲夏草菌粉對白細胞吞噬率的影響

白細胞作為機體的免疫細胞，具有強大的吞噬功能，參與機體非特異性免疫和特異性免疫，白細胞吞噬率越高，證明機體的免疫能力越強[19]。試驗結(jié)果顯示，日糧中添加中、高劑量冬蟲夏草菌粉可顯著提高42日齡時肉雞白細胞吞噬率（P<0.05），提高肉雞的免疫水平，增強機體免疫力和抗病力。

4　結(jié)論

飼料中添加0.1%和0.2%冬蟲夏草菌粉均能提高肉雞生長性能；促進免疫器官的生長發(fā)育；增加機體外周血T淋巴細胞的數(shù)量；提高肉雞白細胞吞噬率，增強機體免疫力和抗病能力；與添加金霉素效果一致，甚至更優(yōu)。本試驗為冬蟲夏草菌粉飼料添加劑的研究提供了一定的理論參考。從經(jīng)濟增效角度出發(fā)，建議養(yǎng)殖戶可以在飼料中添加0.1%冬蟲夏草菌粉。

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（編輯：高雁，snowyan78@163.com）

Effects of Cordyceps power on growth performance and immune function of broilers

Shao Zipei, Yin Yanjun, Yuan Hongshui

Abstract：The aim of this experiment is to study the effects of Cordyceps power on growth performance and immune function of broiler chicken. 200 1-day-old Arbor Acres broilers were randomly divided into 5 groups with 5 repeats. The blank control group was fed basal diet and the antibiotics control group was supplemented with 350 mg/kg chlortetracycline, the experimental groups were supplemented with 0.05%, 0.1%, 0.2% Cordyceps power respectively. The cycle of test were 42 days, including pro?phase (1~21 d) and anaphase (22~42 d). The results showed that: compared with control group, middle and high dose groups increased average weigh, average daily gain and reduced feed gain ratio signifi?cantly (P<0.05); improved thymus index and spleen index dramatically (P<0.05); increased the quanti?ty of T lymphocyte (P<0.05) and enhanced phagocytic function of leukocyte remarkably (P<0.05). Com?pared with antibiotics control group, middle and high dose groups can reduce incidence of diarrhea. This research indicated that growth performance and immune function of broilers could be improved by adding Cordyceps power as feed additive, meanwhile it can replace antibiotics to prevent diarrhea.

Key words：Cordyceps power；broiler；growth performance；immune function

收稿日期：2015-11-04

通訊作者：袁洪水，副教授，碩士生導師。

作者簡介：邵紫培，碩士，研究方向為藥源微生物資源與利用。

中圖分類號：S831

文獻標識碼：A

文章編號：1001-991X（2016）04-0010-05

doi:10.13302/j.cnki.fi.2016.04.003