趙瑩,李文,陶換,劉曉曉,劉婷宇,余燕,馬金友

（河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003）

IBDV感染雛雞盲腸扁桃體的病理組織學(xué)變化

趙瑩,李文,陶換,劉曉曉,劉婷宇,余燕,馬金友

（河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003）

為了探究雛雞感染傳染性法氏囊病毒（IBDV）后盲腸扁桃體病理組織學(xué)變化的發(fā)展規(guī)律,用實(shí)驗(yàn)室保存的IBDV毒株感染19日齡雛雞,分別在感染后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h取盲腸扁桃體,通過(guò)石蠟切片、HE染色,觀察盲腸扁桃體的病理組織學(xué)變化.結(jié)果表明：在IBDV感染24 h,盲腸扁桃體淋巴小結(jié)內(nèi)淋巴細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)壞死凋亡；IBDV感染48~72 h,淋巴小結(jié)和彌散淋巴組織區(qū)淋巴細(xì)胞大量減少,空泡化程度嚴(yán)重；IBDV感染96 h,盲腸扁桃體固有層彌散淋巴組織區(qū)和淋巴小結(jié)內(nèi)空泡減少,淋巴細(xì)胞增多；IBDV感染120~192 h,組織結(jié)構(gòu)開(kāi)始恢復(fù)正常形態(tài).由IBDV感染造成的雛雞盲腸扁桃體的損傷在感染72 h后最為嚴(yán)重,96 h后開(kāi)始恢復(fù).

雛雞；盲腸扁桃體；IBDV；病理組織學(xué)

傳染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）是雙鏈線狀RNA病毒,能引起雛雞急性、高度接觸性傳染病.早期的研究認(rèn)為,IBDV主要在法氏囊中成熟的B淋巴細(xì)胞[1]、攜帶IgM的未成熟B淋巴細(xì)胞[2]或正在增殖的B淋巴細(xì)胞[3]中復(fù)制,而在T淋巴細(xì)胞內(nèi)不會(huì)復(fù)制,因而IBDV感染導(dǎo)致大量的B淋巴細(xì)胞壞死和凋亡,引起感染雛雞的體液免疫受到抑制,而機(jī)體細(xì)胞免疫功能不會(huì)受到顯著影響.然而,后來(lái)的研究顯示,雛雞感染IBDV后,T淋巴細(xì)胞的體外增殖能力明顯減弱[4],還能造成組織內(nèi)網(wǎng)狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、異嗜細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞凋亡,破壞各組織器官的結(jié)構(gòu)[5].這說(shuō)明IBDV不但能抑制感染雛雞的體液免疫和細(xì)胞免疫,還能造成多組織器官的損傷.目前,關(guān)于雛雞感染IBDV對(duì)免疫器官的損傷已有不少報(bào)道[6-7],其中大多針對(duì)的是侵害最為嚴(yán)重的法氏囊.而有關(guān)感染IBDV后盲腸扁桃體損傷的發(fā)展規(guī)律缺乏較為詳盡的研究.本文采用組織切片、HE染色技術(shù)對(duì)病毒感染后不同時(shí)間點(diǎn)的盲腸扁桃體進(jìn)行病理組織學(xué)觀察,為IBDV感染后雛雞各組織器官損傷的發(fā)展變化規(guī)律提供基礎(chǔ)資料.

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物處理

1日齡白來(lái)航雛公雞150只（河南省新鄉(xiāng)市世周養(yǎng)雞場(chǎng)）,置于河南科技學(xué)院實(shí)訓(xùn)中心飼養(yǎng)室喂養(yǎng),在整個(gè)飼養(yǎng)過(guò)程中給予自由采食與飲水,飼養(yǎng)過(guò)程嚴(yán)格按照《蛋雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》進(jìn)行.飼養(yǎng)2周,待雛雞母源抗體消失后,10倍稀釋實(shí)驗(yàn)室保存的IBDV（編號(hào)：19951128）200 μL,分別通過(guò)點(diǎn)眼（50 μL）、滴鼻（50 μL）和肛門吸收（100 μL）感染小雞10只,3 d后收集感染小雞的法氏囊,稱質(zhì)量后按5 g加1 mLPBS（pH 7.36）冰浴中充分勻漿,離心取上清,PCR檢測(cè)病毒含量,調(diào)整濃度感染雛雞70只,感染量和部位與前面相同,感染時(shí)間為19日齡,其余70只未感染IBDV雛雞為對(duì)照組.

1.2 病料收集與處理

分別于雛雞感染IBDV的0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h隨機(jī)取試驗(yàn)組和對(duì)照組雛雞各6只,頸椎脫臼處死,然后取盲腸扁桃體,置于4%多聚甲醛固定液中（0.1 mol/L,pH 7.4）,48 h以后按常規(guī)方法修塊、脫水、透明、浸蠟、包埋,制作厚度為5 μm的組織切片,HE染色.每只雞的盲腸扁桃體選取5張切片,利用Olympus顯微照相系統(tǒng)拍照觀察.

2 結(jié)果與分析

光學(xué)顯微鏡下,IBDV感染的0 h,雛雞盲腸扁桃體固有層淋巴小結(jié)結(jié)構(gòu)清晰,小結(jié)內(nèi)沒(méi)有形成明顯的皮髓質(zhì)和生發(fā)中心,小結(jié)外彌散的淋巴組織分布均勻,淋巴細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常,固有層內(nèi)腸腺上皮細(xì)胞發(fā)育良好,細(xì)胞核清晰（圖1-a）.雛雞感染IBDV 24 h,盲腸扁桃體固有層淋巴小結(jié)中淋巴細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、核碎裂、核溶解等典型細(xì)胞壞死現(xiàn)象,導(dǎo)致細(xì)胞排列疏松,細(xì)胞間間隙變寬（圖1-b）.雛雞感染IBDV48 h,低倍鏡下盲腸扁桃體淋巴小結(jié)和彌散淋巴組織分界不明顯或無(wú)分界；高倍鏡下,大量網(wǎng)狀組織增生,細(xì)胞大小不一,巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞增多,淋巴細(xì)胞和碎裂溶解的淋巴細(xì)胞大量減少.同時(shí)腸腺上皮細(xì)胞胞核界限不清晰,胞質(zhì)溶解呈空泡狀,大量盲腸上皮細(xì)胞壞死、脫落（圖1-c）.雛雞IBDV 72 h,盲腸扁桃體固有層內(nèi)大量淋巴細(xì)胞消失,空泡化嚴(yán)重,破碎的淋巴細(xì)胞胞核隨處可見(jiàn).雛雞感染IBDV 96 h,盲腸扁桃體固有層空泡減少,淋巴細(xì)胞數(shù)量增多,腸腺已基本恢復(fù)正常（圖1-d）.雛雞感染IBDV 120~192 h,盲腸扁桃體固有層空泡消失,彌散的淋巴組織區(qū)內(nèi)淋巴細(xì)胞分布均勻,和淋巴小結(jié)界限清晰,與對(duì)照組相比無(wú)甚差異（圖1-e、f、g、h、i）.

圖1 IBDV感染后不同時(shí)間點(diǎn)雛雞盲腸扁桃體的病理組織學(xué)觀察Fig.1 Pathological histologyofcecal tonsils at different time points after chicken infected with IBDV

3 結(jié)論與討論

由傳染性法氏囊病毒感染引起的雞傳染性法氏囊病是目前養(yǎng)禽業(yè)危害最大的疾病之一,已被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為影響?zhàn)B禽業(yè)的重要疫病.本病主要侵害法氏囊,引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞變性、壞死,并逐漸被異噬性白細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞取代,法氏囊濾泡消失.在法氏囊受到損傷的同時(shí),其他免疫器官如盲腸扁桃體的組織結(jié)構(gòu)也受到損害.

結(jié)果顯示,雛雞感染IBDV 24 h,盲腸扁桃體開(kāi)始出現(xiàn)病變,48 h和72 h病變最為嚴(yán)重,到了96 h病變減輕,120~168 h盲腸扁桃體病變基本消失,這和我們之前對(duì)法氏囊的研究略有不同,即：雛雞感染IBDV96 h,法氏囊損傷最為嚴(yán)重,120 h以后病變減輕并開(kāi)始修復(fù)[8].雛雞IBDV感染后法氏囊和盲腸扁桃體這種損傷和修復(fù)時(shí)間上的不同可能和不同免疫器官的含毒量多少以及存留時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān),陳明勇等[9]的研究表明,IBDV人工感染雛雞,法氏囊含毒量最大,帶毒時(shí)間最長(zhǎng),其次是脾臟、胸腺、盲腸扁桃體、哈德氏腺含毒量較低,帶毒期也較短.

研究結(jié)果還顯示,雛雞感染IBDV 48 h,盲腸扁桃體固有層內(nèi)腸腺上皮細(xì)胞核固縮,胞質(zhì)溶解,盲腸上皮細(xì)胞壞死脫落,說(shuō)明雛雞感染IBDV后非免疫細(xì)胞也受到了侵害.大量的研究也表明,IBDV感染會(huì)造成非免疫器官如腎臟、肝臟、腺胃、肌肉、十二指腸等多器官的損傷[10],這可能與IBDV感染會(huì)造成雛雞血液中IFN-Y的水平增加有關(guān),Rautenschlein等[11]研究認(rèn)為,增加的IFN-Y啟動(dòng)巨噬細(xì)胞,激活一氧化氮合酶（iNOS）,導(dǎo)致NO和腫瘤壞死因子TNF-a的產(chǎn)生,引起組織炎癥和細(xì)胞凋亡,組織結(jié)構(gòu)遭到破壞.

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（責(zé)任編輯：盧奇）

The change of cecal tonsils in chickens infected with infectious bural disease virus

ZHAO Ying,LI Wen,TAO Huan,LIU Xiaoxiao,LIU Tingyu,YU Yan,MA Jinyou
（Henan Institute ofScience and Technology,Xinxiang453003,China）

To explore the histopathological change regulation of cecal tonsils in chickens infected with infectious bural disease virus,a group of 19-days-old chickens were infected with the standard strains of infectious bursal disease virus（IBDV）saved in our laboratory.Cecal tonsils were collected at 0,24,48,72,96,120,144,168 and 192 h after the chickens infected with IBDV,respectively.Histopathological changes of cecal tonsils were observed using paraffin section and HE staining.The results showed that necrosis and apotosis of the lymphocytes emerged in lymph node of lamina propria after the chicken infected with IBDV for 24 h.IBDV,the lymphocyte cells decreased dramatically and vacuolation emerged largely in lymph node and diffuse lymphoid tissue area during the chicken infected with IBDV for 48~72 h.Lymphocyte cells increased and vacuolation decreased in diffuse lymphoid tissue area and lymph node after the chicken infected with IBDV for 96 h.The tissue structure of cecal tonsil was beginning to recover to the normal after the chicken infected with IBDV for 120~192 h.The jury of cecal tonsil was the most serious after the chicken infected with IBDV for 72 h,then began to recover after 96 h.

chickens；cecal tonsil；infectious bursal disease virus；histopathologic

S858.31

A

1008-7516（2016）03-0043-04

10.3969/j.issn.1008-7516.2016.03.010

2016-04-05

河南省高校科技創(chuàng)新人才支持計(jì)劃（13HASTIT006）；河南科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（2014CX041）

趙瑩（1995―）,女,河南濟(jì)源人,本科生.

馬金友（1968―）,男,河南信陽(yáng)人,博士,副教授.主要從事分子病理學(xué)與動(dòng)物病原學(xué)研究