危芬蘭

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EGFR、KLF4在不同臨床分期肺癌組織中的表達變化研究

危芬蘭①

【摘要】目的：探討表皮生長因子受體（EGFR）、Kruppel樣因子（KLF4）在不同臨床分期肺癌組織中的表達變化。方法：選取本院腫瘤內(nèi)科肺癌患者63例，手術(shù)收集肺癌組織標(biāo)本63例作為研究組，癌旁正常肺組織（肺癌邊緣外＞5 cm）標(biāo)本60例作為對照組，采用免疫組化方法檢測EGFR、KLF4表達，比較組間及不同臨床分期EGFR、KLF4陽性率的差異。結(jié)果：研究組EGFR陽性率明顯高于對照組，KLF4陽性率明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Ⅲ～Ⅳ期EGFR陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織，Ⅲ～Ⅳ期KLF4陽性率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：EGFR在肺癌組織中陽性表達率顯著增高，而KLF4在肺癌組織中的陽性表達率顯著降低，其中肺癌組織臨床分期越高，EGFR陽性率越高，KLF4陽性率越低。

【關(guān)鍵詞】表皮生長因子受體； Kruppel樣因子； 臨床分期； 肺癌

①江西省鷹潭市人民醫(yī)院 江西 鷹潭 335000

First-author’s address：Yingtan People’s Hospital，Yingtan 335000，China

目前，隨著經(jīng)濟社會的發(fā)展，環(huán)境污染加重和吸煙等多種影響因素均導(dǎo)致肺癌發(fā)生率和死亡率逐漸增加[1]。目前關(guān)于肺癌的病理發(fā)生機制尚未完全明確，其中與肺癌緊密相關(guān)性基因有P53、FHJT和Bal-2基因等，上述基因表達異常是導(dǎo)致肺癌發(fā)生和發(fā)展的重要因素[2-3]。但關(guān)于EGFR、KLF4在不同臨床分期肺癌組織中的表達變化研究甚少，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月-2015年1月本院收治的腫瘤內(nèi)科肺癌患者63例作為研究對象，手術(shù)期間收集肺癌組織標(biāo)本63例作為研究組，癌旁正常肺組織（肺癌邊緣外＞5 cm）標(biāo)本60例作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：全部患者均符合肺癌的手術(shù)病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)前未接受輔助治療[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重未控制性急性感染或內(nèi)科疾病史，未同意此次臨床試驗研究，合并其他腫瘤，急性肺膿腫和急性肺結(jié)核患者。其中男40例，女23例，年齡45～63歲，平均（53.64±8.59）歲，臨床TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期29例，Ⅳ期9例；病理類型：鱗癌25例，腺癌30例，小細胞肺癌8例；組織分化程度：高分化13例，中分化34例，低分化或未分化16例；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例；手術(shù)方式：肺葉切除術(shù)40例，全肺切除術(shù)23例。

1.2 檢測方法 （1）試劑與儀器：兔抗人EGFR、KLF4單克隆抗體，PBS緩沖液（美國Sigma公司），DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)公司）。（2）操作步驟：采用免疫組化方法，10％甲醛固定，脫水、石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片，脫蠟、水化和自來水沖洗，采用檸檬酸抗原修復(fù)液高溫高壓抗原修復(fù)，室溫下冷卻10 min，采用自來水在壓力鍋外壁沖淋修復(fù)液冷卻，冷卻至室溫后取出切片，自來水沖洗，PBS沖洗3 min×2次，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次，滴加100 μL一抗，EGFR（1∶150）、KLF4（1∶100），4 ℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗3 min×3次，滴加二抗，室溫下孵育15 min，PBS沖洗3 min×3次，滴加DAB顯色劑，顯色3 min，自來水沖洗終止顯色，蘇木精復(fù)染，PBS返藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 免疫組化結(jié)果判定 EGFR、KLF4以細胞膜和細胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色[5-6]，400倍視野下隨機選取5個視野，當(dāng)陽性細胞比例≤5％評定為0分，6％～25％評定為1分，26％～50％評定為2分，51％～75％評定為3分，≥75％評定為4分；當(dāng)顯色強度為未著色者評定為0分，顯色強度為淺黃色者評定為1分，棕黃色者評定為2分，棕褐色者評定為3分，陽性細胞比例×顯色強度劃分等級，其中0～1分為陰性，2～4分為弱陽性，5～7分為陽性，≥8分為強陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料以百分比表示，比較采用 χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組EGFR、KLF4陽性率的比較 研究組EGFR陽性率明顯高于對照組，KLF4陽性率明顯低于對照組，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組EGFR、KLF4陽性率的比較　例（％）

2.2 不同臨床分期肺癌組織EGFR、KLF4陽性率的比較 Ⅲ～Ⅳ期EGFR陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期KLF4陽性率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期，兩者比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

3 討論

EGFR是ERB-B家族成員之一，是一種170ku的膜受體蛋白，具有酪氨酸激酶活性，與生長因子結(jié)合具有活化細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，促進細胞增殖，而表皮生長因子受體自身則發(fā)生內(nèi)化作用或下調(diào)[7]。表皮生長因子受體與配體相結(jié)合促進EGFR形成二聚體和磷酸化而活化，活性EGFR可以向細胞內(nèi)傳導(dǎo)信號[8]。相關(guān)研究顯示，胃癌組織EGFR表達顯著上調(diào)，且與胃癌浸潤深度和病理組織學(xué)分期具有緊密的關(guān)系，EGFR表達與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度顯著相關(guān)[9]。目前大量研究證實，EGFR及其配體系統(tǒng)參與惡性腫瘤細胞增殖及其病情的發(fā)生和發(fā)展[10]。未分化胃癌動物模型上應(yīng)用EGFR酪氨酸激酶抑制劑具有明顯抑制腫瘤細胞的生長，證實了EGFR陽性表達具有促進惡性腫瘤病情的發(fā)生和發(fā)展過程[11]。KLF4是一種真核生物鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子，通過激活或抑制靶向基因調(diào)控基因表達的時間或組織特異性。相關(guān)研究表明，KLF4在結(jié)腸癌組織中的陽性表達顯著降低，但在口腔上皮異常增生、口腔癌的全層上皮中過度彌漫性表達[12-13]。目前關(guān)于KLF4在肺癌組織中的表達及其機制尚未完全明確。

表2　不同臨床分期肺癌組織EGFR、KLF4陽性率的比較　例（％）

本研究結(jié)果顯示，肺癌組織EGFR陽性表達率明顯高于癌旁正常肺組織，兩者比較差異具有顯著性，其中Ⅲ～Ⅳ期肺癌組織EGFR陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織，兩者比較差異具有顯著性，研究揭示了EGFR陽性表達率在肺癌組織中顯著性上調(diào)，其中隨著臨床分期的增加，EGFR陽性表達率越高，肺癌病情越嚴(yán)重[14]。因此，EGFR陽性表達率在反映肺癌病情程度和預(yù)后狀況中具有重要的意義。另一方面，肺癌組織KLF4陽性表達率明顯低于癌旁正常肺組織，兩者比較差異具有顯著性，其中Ⅲ～Ⅳ期肺癌組織KLF4陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織，兩者比較差異具有顯著性。揭示了KLF4陽性表達率在肺癌組織中顯著下調(diào)，隨著肺癌病情的發(fā)展，KLF4陽性表達率顯著下降，KLF4在細胞增生和分化中具有重要的作用，并參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[15]。

綜上所述，EGFR在肺癌組織中陽性表達率顯著增高，KLF4在肺癌組織中的陽性表達率顯著降低，其中肺癌組織臨床分期越高，EGFR陽性率越高，KLF4陽性率越低。

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Study on EGFR，KLF4 Express in Different Clinical Stages of Lung Cancer Tissues

/WEI Fen-lan.//Medical Innovation of China，2016，13（03）：048-050

【Abstract】Objective： To investigate the epidermal growth factor receptor（EGFR），Kruppel like factor （KLF4） express in different clinical stages of lung cancer tissues. Method： 63 lung cancer patients in our hospital were selected，63 specimens of lung cancer were collected as study group，60 specimens of adjacent normal lung tissues （lung edge ＞5 cm） were collected as control group，EGFR and KLF4 were detected by immunohistochemical method. The differences of EGFR，KLF4 positive express between groups and clinical stage were compared. Result： EGFR positive rate of the study group was significantly higher than the control group，KLF4 positive rate of the study group was significantly lower than the control group（P＜0.05）. EGFR positive rate of Ⅲ-Ⅳ stage was significantly higher than Ⅰ-Ⅱ stage，KLF4 positive rate of Ⅲ-Ⅳ was significantly lower than Ⅰ-Ⅱ stage（P＜0.05）. Conclusion： EGFR positive expression in lung cancer tissue is significantly higher，while KLF4 positive expressionbook=49,ebook=53in lung cancer tissues is significantly lower，with clinical stage in cancer tissues higher is，EGFR positive rate is higher，KLF4 positive rate is lower.

【Key words】Epidermal growth factor receptor； Kruppel like factor； Clinical staging； Lung cancer

收稿日期：（2015-09-22） （本文編輯：蔡元元）

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.03.015

通信作者：危芬蘭