顯齒蛇葡萄葉有效成分的提取工藝研究

顯齒蛇葡萄為葡萄科蛇葡萄屬的一種野生木質(zhì)落葉藤本植物，又名白茶、藤茶、龍須茶、甘露茶等。2013年12月24日國家衛(wèi)生計(jì)生委發(fā)布了《關(guān)于批準(zhǔn)顯齒蛇葡萄葉等3種新食品原料的公告》，確定了顯齒蛇葡萄葉可以作為新資源食品來使用。顯齒蛇葡萄葉中黃酮化合物含量高達(dá)43.4~45.5%，富含二氫楊梅素、槲皮素、顯齒蛇葡萄素、山奈酚等成分。由于人體不能直接合成黃酮化合物，只能從食品中間接獲得，因此研究植物中黃酮化合物的提取方法有重大意義。本試驗(yàn)采取超聲波提取法，對顯齒蛇葡萄黃酮化合物的提取工藝條件進(jìn)行篩選，以期獲得顯齒蛇葡萄黃酮化合物超聲提取的優(yōu)化工藝條件，為顯齒蛇葡萄食用及藥用資源的合理開發(fā)提供一定的依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)材料,顯齒蛇葡萄葉干品（產(chǎn)地為湖南省）、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉等，以上試劑均為分析純，原料及試劑均由吉林益健生物科技有限公司提供。KQ250DB型數(shù)控超聲波清洗器、QUINTIX124-1CN型分析天平、HH-6型恒溫水浴鍋、TDZ5-WS低速臺式離心機(jī)、UV-1750型紫外可見分光光度計(jì)。

試驗(yàn)方法,選取顯齒蛇葡萄干品，粉碎過60目篩，準(zhǔn)確稱取5.00g干粉置于圓底燒瓶中，以乙醇溶液作為提取溶劑，分別考查液料比、提取劑濃度、超聲溫度、超聲時(shí)間、超聲功率對黃酮化合物提取效果的影響。具體條件設(shè)為：液料比設(shè)為10:1、20:1、30:1、40:1、50:1、60:1（mL/ g），乙醇濃度設(shè)為25%、35%、45%、55%、65%、75%、100%，超聲溫度設(shè)為25℃、35℃、45℃、55℃、65℃、80℃，超聲時(shí)間設(shè)為10、25、40、55、70、85min，超聲功率設(shè)為120、150、180、210、240、270W。經(jīng)過超聲波提取后，過濾、離心、稀釋，利用硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法測定溶液吸光度，計(jì)算顯齒蛇葡萄中黃酮化合物的得率。以上不同條件實(shí)驗(yàn)均平行3次，結(jié)果取平均值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,液料比的影響：提取劑的體積直接關(guān)系到物料有效成分的浸出量，當(dāng)液料比小于30:1時(shí)，得率明顯上升，液料比為30:1時(shí)，得率達(dá)到12.7%，當(dāng)液料比大于30:1時(shí)，其得率上升趨勢變緩。從節(jié)約能耗的角度出發(fā)，液料比確定為30:1最佳。提取劑濃度的影響：當(dāng)提取劑乙醇的濃度變化時(shí)，極性也隨之變化，對提取效果有一定影響。乙醇濃度在65%左右時(shí)得率最大，可達(dá)到13.05%，當(dāng)乙醇濃度升高至75%或100%時(shí)，得率反而降低?？赡苁怯捎谝掖紳舛冗^高使非極性物質(zhì)也隨之溶出，導(dǎo)致黃酮化合物得率下降。因此確定乙醇濃度為65%時(shí)較佳。超聲溫度的影響：當(dāng)溫度小于65℃時(shí)，隨著溫度的升高得率有所增加，當(dāng)溫度超過65℃時(shí)，得率逐漸下降，同時(shí)提取物的顏色逐漸變深。可能是由于溫度過高使部分黃酮化合物結(jié)構(gòu)被破壞，同時(shí)葉綠素溶出使顏色變深，因此確定超聲溫度為65℃為宜。

超聲時(shí)間的影響：當(dāng)超聲時(shí)間在40min左右時(shí)得率最大為13.93%，延長超聲時(shí)間，得率反而降低。可能是由于超聲時(shí)間過短黃酮化合物溶解不充分，超聲時(shí)間過長，溶解出來的化合物易被氧化。綜合時(shí)間、能耗等因素，確定超聲時(shí)間為40min為宜.超聲功率的影響：當(dāng)超聲功率小于240W時(shí)，得率隨著功率的增加也逐漸提高，超聲功率大于240W后，得率反而下降，可能是由于超聲功率太高對分子造成一定程度的破壞。因此確定超聲功率應(yīng)控制在240W以內(nèi)。

從顯齒蛇葡萄中提取黃酮化合物的常用方法主要有五種：熱浸提法、微波提取法、超聲波提取法、超臨界萃取法、逆流提取法。超聲波提取法是通過超聲振蕩產(chǎn)生空化效應(yīng)、擾動效應(yīng)，對提取物進(jìn)行攪拌和破碎，加速有效成分的擴(kuò)散釋放，具有易操作、省時(shí)、提取率高、結(jié)構(gòu)破壞性小的優(yōu)點(diǎn)，該方法被廣泛用于食品原料中有效成分的提取。本實(shí)驗(yàn)得到的超聲法提取顯齒蛇葡萄黃酮化合物的最佳條件為：液料比為30:1；提取劑乙醇的濃度為65%；超聲溫度為65℃，超聲時(shí)間40min；超聲功率240W。用以上工藝條件進(jìn)行超聲提取，得率可達(dá)15,11%。以上數(shù)據(jù)可為顯齒蛇葡萄黃酮化合物相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。

□長春醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 汲軍 王丹丹

吉林省中醫(yī)中藥研究院 趙昱偉