司振書，殷國政，路建彪，李玉保

（聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東 聊城 252000）

海蘭褐蛋雞感染雞傷寒沙門菌的診斷*

司振書，殷國政，路建彪，李玉保

（聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東 聊城 252000）

某蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)90日齡海蘭褐蛋雞疑似沙門菌感染，為確定病原，對(duì)該雞群隨機(jī)采血，通過平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行雞白痢-雞傷寒沙門菌的血清學(xué)診斷，同時(shí)，無菌采取病雞肝臟進(jìn)行了細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果，血清陽性率達(dá)54.5%，分離菌在麥康凱瓊脂上形成無色、透明、有光澤的圓形菌落，能發(fā)酵甘露醇、甘露糖、蕈糖、果糖、麥芽糖，不能發(fā)酵乳糖、棉子糖、蔗糖，鳥氨酸脫羧試驗(yàn)陰性，符合雞傷寒沙門菌的生化特性。分離菌對(duì)頭孢吡肟、頭孢噻肟、氟苯尼考及丁胺卡那敏感，而對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星及強(qiáng)力霉素等耐藥。表明該雞群受到了雞傷寒沙門菌的感染，采取了綜合防治措施，病情得到有效控制。

海蘭褐；蛋雞；雞傷寒沙門菌；分離鑒定

雞傷寒沙門菌(Salmonella gallinarum)又稱雞沙門菌，為腸桿菌科沙門菌屬D血清群的成員，雞和火雞都可感染，引起產(chǎn)蛋前各種日齡雞的敗血性傷寒癥，也可引發(fā)成年母雞的卵巢炎[1]。禽傷寒發(fā)生于各種日齡的雞，但多發(fā)于生長(zhǎng)期，特別是3月齡到產(chǎn)蛋期的母雞，雛雞如果不是經(jīng)卵感染，很少發(fā)病[2]。病原菌在病雞糞便和分泌物中大量存在，主要經(jīng)消化道或眼結(jié)膜感染。2016年2月，陽谷縣某養(yǎng)雞場(chǎng)養(yǎng)殖海蘭褐蛋雞9500羽，90日齡出現(xiàn)消瘦，精神萎頓、雞冠蒼白等癥狀，病雞排黃綠色或灰白色稀糞。發(fā)病嚴(yán)重的陸續(xù)衰竭死亡，死亡率達(dá)7.8%。剖檢主要病變?yōu)椋焊闻K腫大，質(zhì)脆，呈青銅色，有大量彌漫性出血點(diǎn)，有的肝臟破裂，剖開從腹腔流出大量血色腹水，脾臟淤血性腫大。對(duì)該雞群進(jìn)行了血清學(xué)和病原學(xué)診斷，經(jīng)鑒定分離到1株雞傷寒沙門菌，并對(duì)該菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，采取了對(duì)發(fā)病雞隔離、淘汰、敏感藥物治療、消毒、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合措施，發(fā)病情況逐漸好轉(zhuǎn)，至150日齡雞群產(chǎn)蛋率達(dá)50%。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備 普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美藍(lán)瓊脂平板培養(yǎng)基由聊城大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室制備。雞白痢-雞傷寒多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原 (批號(hào)2014003)，雞白痢-雞傷寒多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)陽性血清(批號(hào)2014001)，購于北京中海生物科技有限公司；各種細(xì)菌微量生化管及藥敏紙片，購于杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2 病料的采取 隨機(jī)選取22只雞，分別翅靜脈采血1～1.5ml，2000prm離心10min，析出血清，用于血清學(xué)診斷。無菌采取發(fā)病雞肝臟進(jìn)行細(xì)菌的分離。

1.3 凝集試驗(yàn) 將雞白痢-雞傷寒多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原搖勻，用移液器吸取抗原30μl于潔凈的載玻片，吸取待檢血清30μl滴于抗原液上，不斷傾斜搖動(dòng)玻片，使抗原與血清充分混合，3min內(nèi)觀察結(jié)果，同時(shí)做陰性和陽性血清對(duì)照。如出現(xiàn)較大顆粒凝集塊，液體透明為陽性，若不出現(xiàn)凝集塊，則為陰性。

1.4 細(xì)菌的分離培養(yǎng) 無菌取病雞肝臟劃線接種于麥康凱瓊脂，37℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果，挑取單個(gè)菌落用麥康凱瓊脂進(jìn)行純培養(yǎng)。將純化的單個(gè)菌落分別接種于普通瓊脂平板及伊紅美藍(lán)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h，觀察生長(zhǎng)情況。

1.5 細(xì)菌的形態(tài)觀察 將分離到的細(xì)菌純培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。

1.6 細(xì)菌的鑒定 將分離純化的細(xì)菌分別接種于乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、賴氨酸、鳥氨酸、枸櫞酸鹽、棉子糖等適宜的生化鑒定管，置37℃恒溫箱培養(yǎng)，按使用說明書觀察判定結(jié)果。

1.7 藥敏試驗(yàn) 挑取分離純化的細(xì)菌菌落，用滅菌生理鹽水稀釋混勻，校正濃度為0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，用無菌棉棒蘸取少量菌液，均勻涂抹于營養(yǎng)瓊脂表面，然后用無菌鑷子取不同藥敏紙片緊貼其上，各紙片應(yīng)均勻分散開，置37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24h，觀察并測(cè)量抑菌圈直徑，判斷標(biāo)準(zhǔn)按2010版CLSI M100-S20執(zhí)行。選取敏感藥物進(jìn)行治療。

2 結(jié)果

2.1 凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 經(jīng)檢測(cè)，22份血清有12份為陽性，10份為陰性，陽性率達(dá)54.5%。

2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)結(jié)果 分離菌在麥康凱瓊脂平板上，形成光滑、濕潤(rùn)、隆起、圓形的無色透明菌落；在普通瓊脂上形成光滑、濕潤(rùn)、灰白色、透明的菌落，多數(shù)菌落呈圓形，邊緣整齊；在伊紅美藍(lán)瓊脂上呈表面光滑、圓形、微凸、邊緣整齊、淡藍(lán)色的小菌落。

2.3 細(xì)菌形態(tài)染色特點(diǎn) 分離菌呈桿形，革蘭氏染色陰性，兩端鈍圓，多單個(gè)存在。

2.4 分離菌的生化試驗(yàn)結(jié)果 分離菌的生化鑒定結(jié)果為：蕈糖+，蔗糖-，賴氨酸脫羧酶+，乳糖-，尿素酶-，靛基質(zhì)試驗(yàn)-，七葉苷-，丙二酸鹽-，鳥氨酸脫羧酶-，山梨醇+，OF+，水楊素-，枸櫞酸鹽-，肌醇-，精氨酸-，棉子糖-，β半乳糖+，甘露醇+，側(cè)金盞花醇-，赤蘚醇-，甘露糖+、麥芽糖+，果糖+，衛(wèi)矛醇-。

2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 分離到的雞傷寒沙門菌的敏感藥及抑菌圈直徑分別為：頭孢吡肟31mm，頭孢噻肟28mm，氟苯尼考26mm，丁胺卡那25mm，而對(duì)環(huán)丙沙星、妥布霉素、強(qiáng)力霉素、阿奇霉素、恩諾沙星等耐藥。

3 討論

李鳳玲等[3]對(duì)南京規(guī)模化蛋雞場(chǎng)進(jìn)行了雞白痢、雞傷寒的血清學(xué)調(diào)查，海蘭蛋雞的陽性率為12.6%，而該雞群雞白痢、雞傷寒血清陽性率高達(dá)54.5%，是前者的4.33倍，說明該雞群帶菌、感染較為嚴(yán)重。

雞傷寒沙門菌與雞白痢沙門菌在生化特性上有些差異，可通過鳥氨酸脫羧試驗(yàn)進(jìn)行鑒別，前者不能脫羧，而后者相反[4]。另外，雞傷寒沙門菌能發(fā)酵麥芽糖，而雞白痢沙門菌則不能[1]。本研究分離到的菌株鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)陰性，能發(fā)酵麥芽糖，這點(diǎn)與武志強(qiáng)[5]報(bào)道的廣東分離株一致，但也有不同，主要是本分離菌不能發(fā)酵衛(wèi)矛醇，而后者衛(wèi)矛醇陽性。劉素英等[6]從陜西分離鑒定的13株雞傷寒沙門菌均不能發(fā)酵衛(wèi)矛醇，與本分離菌相同。說明雞傷寒沙門菌不同地域、不同來源、不同年代的菌株對(duì)衛(wèi)矛醇的反應(yīng)可能不一致。綜合分離菌的形態(tài)染色、培養(yǎng)特性及生化特點(diǎn)判斷，該菌為雞傷寒沙門菌。

分離到的雞傷寒沙門菌，對(duì)氟苯尼考、頭孢吡肟、頭孢噻肟、丁胺卡那等敏感，對(duì)環(huán)丙沙星、妥布霉素、強(qiáng)力霉素、阿奇霉素、恩諾沙星等耐藥，獸醫(yī)臨床應(yīng)重視該菌的感染及流行情況，合理使用抗菌藥物。吳白等對(duì)15株禽源沙門菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，分離株來源雞場(chǎng)長(zhǎng)期使用喹諾酮類和氨基糖苷類藥物，結(jié)果表明分離株對(duì)喹諾酮類和氨基糖苷類等藥物耐藥率較高，而對(duì)沒用過的頭孢曲松鈉、丁胺卡那霉素等耐藥率則很低或均敏感，說明耐藥菌株的出現(xiàn)與藥物的使用有一定的相關(guān)性[7]。

立即對(duì)發(fā)病雞進(jìn)行隔離治療，對(duì)發(fā)病嚴(yán)重的雞只淘汰、深埋。對(duì)雞舍地面、用具進(jìn)行全面徹底消毒，及時(shí)清理糞便并發(fā)酵處理。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，頭孢噻肟、頭孢吡肟在體外敏感性強(qiáng)，但考慮到沙門菌對(duì)一些頭孢類藥物在體外與體內(nèi)反應(yīng)可能不一致，所以選用氟苯尼考粉劑拌料進(jìn)行治療，5d后，發(fā)病情況逐漸好轉(zhuǎn)，有效控制了雞只的死亡。

[1]中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所組編.獸醫(yī)微生物學(xué) [M].第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2013： 159-166.

[2]李書光,王玉茂,管宇,等.一株高致病性雞傷寒沙門菌的分離及鑒定[J].中國家禽,2013,35(16):47-49.

[3]李鳳玲，呂宗德.南京市規(guī)?；半u場(chǎng)雞白痢血清流行病學(xué)調(diào)查 [J].畜牧與獸醫(yī),2015,47(11):107-108.

[4]辛朝安，主編.禽病學(xué)[M].第2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2003:148-153.

[5]武志強(qiáng).粵北地區(qū)雞沙門氏菌分離株的生化反應(yīng)特性[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2009,31(5):406-408.

[6]劉素英，王晶鈺，董睿，等.雞傷寒沙門菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,32(9):37-41.

[7]吳白,楊林,吳婷婷,等.15株禽源沙門菌的分離鑒定與耐藥性試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志,2014,50(6):27-29.

S858.31

B

1673-1085（2016）09-0007-03

2016-08-09

山東省高等學(xué)校青年骨干教師國內(nèi)訪問學(xué)者項(xiàng)目；山東省農(nóng)業(yè)良種工程重點(diǎn)課題(25114426)；聊城大學(xué)博士啟動(dòng)基金(318051310)。

司振書（1971-）女，副教授，博士，研究方向?yàn)轭A(yù)防獸醫(yī)。E-mail:dckszs@163.com。