邵銳鋒，皮潔

(長(zhǎng)江大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，湖北 荊州 434020)

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吡喹酮對(duì)雌性大鼠卵巢儲(chǔ)備功能的影響

邵銳鋒，皮潔

(長(zhǎng)江大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，湖北 荊州 434020)

目的：通過(guò)研究吡喹酮對(duì)雌性大鼠卵巢儲(chǔ)備功能的影響，探討其臨床用藥的安全性。方法：成年雌性SD大鼠60只,隨機(jī)分為吡喹酮組(150mg/(kg·d))和對(duì)照組(生理鹽水組)，分別于用藥后1、4、8周采用股動(dòng)脈放血處死受試動(dòng)物，取血清，放射免疫方法測(cè)定雌二醇(E2)濃度、卵泡刺激素(FSH)濃度、酶聯(lián)免疫方法測(cè)定抗苗勒管激素(AMH)濃度。結(jié)果：吡喹酮組與對(duì)照組血清E2、FSH濃度無(wú)明顯差異，血清AMH濃度有下降的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：吡喹酮對(duì)SD雌性大鼠的卵巢儲(chǔ)備功能沒(méi)有影響。

吡喹酮；卵巢儲(chǔ)備功能；卵泡雌激素；抗苗勒管激素

現(xiàn)階段治療血吸蟲病的藥物中，吡喹酮因其療效高、療程短、不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最為廣泛。隨著吡喹酮在流行區(qū)的大量長(zhǎng)期使用，其對(duì)育齡女性生育能力的影響逐漸受到人們的關(guān)注。本研究通過(guò)觀察雌性大鼠血清激素水平的變化，研究吡喹酮對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能的影響，為臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

成年Spragne-Dawley(SD)雌性大鼠60只，年齡60～70d，體質(zhì)量(230±20)g，均來(lái)自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

吡喹酮(PZQ)上海第六制藥廠 、AMH ELISA試劑盒(Diagnostic Systems Laboratories 公司 美國(guó))、 ELISA檢測(cè)儀(Molecular Devices 公司 美國(guó))、 FSH試劑盒(上海生物工程公司)、E2試劑盒(上海羅氏公司)。

1.2 研究方法

1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組 全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)成年未孕SD大鼠，自由攝食，室溫25℃，濕度45%～55%，每日光照12h，定期消毒和通風(fēng)，飼養(yǎng)一周熟悉環(huán)境。隨機(jī)分為吡喹酮組和空白對(duì)照組，每組30只。

2) 給藥方法 根據(jù)大鼠與人體間的等效劑量換算[1],稱取300mg吡喹酮加適量蒸餾水配置成10ml吡喹酮懸液，每日8至9時(shí)吡喹酮組給予1ml吡喹酮懸液灌胃,空白對(duì)照組給予生理鹽水1mL/d灌胃，分別于用藥后1、4、8周于動(dòng)情期股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，分為1、4、8周三個(gè)組，每組均為10只，取血清置于0℃冰箱待測(cè)。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

放射免疫分析法測(cè)定血E2、FSH，按試劑盒操作規(guī)程進(jìn)行。用AMH ELISA試劑盒檢測(cè)大鼠血清中AMH濃度：取20μL標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和血清加入96孔板中，孵育，洗板。將抗體加入板中，孵育，洗板。最后，TMB顯色，酶標(biāo)儀測(cè)450nm和620nm處波長(zhǎng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清E2、FSH水平測(cè)定結(jié)果

吡喹酮組1、4、8周后 E2濃度分別為(20.60±2.47)、(21.01±2.55)、(21.89±2.64)pg/mL，F(xiàn)SH濃度分別為(2.00±0.20)、(2.04±0.15)、(2.15±0.13)ng/mL；對(duì)照組1、4、8周后 E2濃度分別為(19.95±2.44)、(20.79±2.25)、(21.42±2.47)pg/mL，F(xiàn)SH濃度分別為(2.01±0.22)、(2.03±0.13)、(2.13±0.18)ng/mL，兩組間血清E2和FSH濃度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 血清AMH水平測(cè)定結(jié)果

吡喹酮組1、4、8周后AMH濃度分別為(2.09±0.16)、(1.99±0.10)、(1.88±0.12) ng/mL，對(duì)照組1、4、8周后AMH濃度分別為(2.16±0.14)、(2.04±0.09)、(1.93±0.10) ng/mL,血清AMH濃度有下降的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

卵巢的主要功能表現(xiàn)為周期性的排卵和周期性變化的激素分泌，它決定著個(gè)體的生育能力。目前評(píng)價(jià)卵巢的儲(chǔ)備功能的重要指標(biāo)包括基礎(chǔ)FSH，竇卵泡計(jì)數(shù)以及AMH的測(cè)定等。血清FSH、E2水平是臨床上衡量卵巢儲(chǔ)備功能最常用的指標(biāo)，其主要是通過(guò)下丘腦—垂體—卵巢軸之間的激素的正負(fù)反饋機(jī)制調(diào)節(jié)，血清FSH水平的升高常提示卵巢儲(chǔ)備功能的衰退[2]。AMH僅表達(dá)于女性卵巢內(nèi)卵泡的顆粒細(xì)胞，其水平與卵巢內(nèi)竇卵泡的數(shù)量呈正相關(guān)[3,4]，與體內(nèi)的其他激素FSH、E2無(wú)關(guān)，不受下丘腦—垂體—卵巢軸和藥物的影響，因此，測(cè)量血清中AMH的水平能夠比基礎(chǔ)FSH、E2更準(zhǔn)確的反映卵巢的儲(chǔ)備能力。梁元晶等[5]基礎(chǔ)研究表明，隨著大鼠年齡的增長(zhǎng)，卵巢中分泌AMH的卵泡數(shù)量減少，血清AMH水平下降，提示卵巢儲(chǔ)備功能的下降。

吡喹酮是治療血吸蟲病的首選藥物。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)吡喹酮用藥后會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)產(chǎn)生不同程度的損害[6]，也有學(xué)者觀察到吡喹酮用藥后會(huì)對(duì)女性的月經(jīng)周期產(chǎn)生影響[7]，但吡喹酮使用后對(duì)雌性動(dòng)物的生殖功能影響的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)SD雌性大鼠吡喹酮灌胃后觀察大鼠血清中AMH、FSH、E2等激素水平的變化，探討吡喹酮對(duì)SD雌性大鼠卵巢儲(chǔ)備功能的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，雌性大鼠在應(yīng)用吡喹酮后1、4、8周后血清中FSH、E2的濃度與對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異，說(shuō)明大鼠的下丘腦—垂體—卵巢軸沒(méi)有受到藥物的影響，這可能與吡喹酮的作用機(jī)制有關(guān)。吡喹酮口服后吸收迅速，于1h左右達(dá)到峰值，經(jīng)過(guò)肝臟時(shí)絕大部分被分解為羥基代謝物，靶向作用于血吸蟲細(xì)胞膜上電壓門控鈣通道(Voltage-gated calcium channels,VGCCs),使蟲體內(nèi)Ca2+上調(diào)，引起蟲體攣縮和死亡，故對(duì)機(jī)體的傷害比較小[8,9]，而腦脊液中的藥物濃度顯著低于血藥濃度，其原因除血腦屏障外，還可能與腦脊液的的引流作用有關(guān)[10]。而吡喹酮組大鼠血清AMH呈現(xiàn)出降低的趨勢(shì)，表明大鼠卵巢內(nèi)竇卵泡的數(shù)目減少，可能與藥物的持續(xù)時(shí)間有關(guān)，需要更大樣本量的研究。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，我們觀察到吡喹酮治療血吸蟲病效果好，對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能無(wú)明顯影響，但長(zhǎng)時(shí)間用藥時(shí)應(yīng)注意監(jiān)測(cè)卵巢功能。

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[編輯] 劉陽(yáng)

2016-05-16

邵銳鋒(1985-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事不孕不育與輔助生殖的臨床工作；通信作者：皮潔，hbpijie@163.com。

R532.21

A

1673-1409(2016)30-0079-02

[引著格式]邵銳鋒，皮潔. 吡喹酮對(duì)雌性大鼠卵巢儲(chǔ)備功能的影響[J]. 長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版),2016,13(30):79～80.