王嘉，孫佳瑋，韓雙雙，孫武裝，王鵬羽，王麗紅

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，石家莊050031)

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肺癌組織中Kiss-1蛋白的表達(dá)變化及意義

王嘉，孫佳瑋，韓雙雙，孫武裝，王鵬羽，王麗紅

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，石家莊050031)

摘要：目的 探討Kiss-1蛋白在肺癌組織中的表達(dá)變化及意義。方法 選取肺癌患者60例,其中肺鱗癌3例(鱗癌組)、腺癌27例(腺癌組)，另?yè)穹伟┩瑐?cè)距腫瘤邊緣5 cm以上的肺泡(25例)(肺泡組)及支氣管正常組織(29例)(支管組)。采用免疫組化SP法檢測(cè)Kiss-1蛋白的表達(dá)，并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果Kiss-1蛋白在肺鱗癌和肺腺癌組中的表達(dá)均顯著低于肺泡組或支氣管組(P均<0.01)；Kiss-1蛋白表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)(P均<0.05),與肺癌患者性別、年齡及腫瘤大小、分化程度、組織學(xué)類型無(wú)明顯相關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論 Kiss-1蛋白在肺癌組織中表達(dá)降低，其在肺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮抑癌作用。

關(guān)鍵詞：肺腫瘤；Kiss-1蛋白；免疫組織化學(xué)

肺癌是人類常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率均居惡性腫瘤首位[1,2]，嚴(yán)重威脅人類生命健康。肺癌的病理組織學(xué)分型主要包括鱗癌、腺癌、腺鱗癌、未分化癌等，其中以鱗癌和腺癌常見，約占全部上皮來(lái)源肺惡性腫瘤的70%左右[3]。其發(fā)病機(jī)制未明，目前認(rèn)為是由癌基因和抑癌基因共同參與調(diào)節(jié)的復(fù)雜過(guò)程。研究表明，Kiss-1基因作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因與多種惡性腫瘤相關(guān)，其蛋白產(chǎn)物對(duì)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移發(fā)揮抑制作用[4]。2010年6月～2013年6月，本研究觀察了Kiss-1蛋白在肺鱗癌、肺腺癌及正常支氣管和肺泡組織中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討其在肺癌發(fā)病過(guò)程中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料肺癌患者60例(肺癌組)，均符合2004版WHO肺腫瘤分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理檢查確診。男41 例、女19 例，年齡42～81(63.57±9.06)歲。肺鱗癌33例(鱗癌組)，腺癌27例(腺癌組)；低分化17例，中高分化43例；伴有周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無(wú)周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。對(duì)照組標(biāo)本選取肺癌同側(cè)距腫瘤邊緣5 cm以上的肺泡(25例)(肺泡組)及支氣管正常組織(29例)(支氣管組)。入選者術(shù)前均未進(jìn)行化療或放療。各組年齡、性別有可比性。本研究獲得河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2組織Kiss-1蛋白的檢測(cè)采用免疫組化SP法。所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，將待檢測(cè)切片放入恒溫烤箱，60~65 ℃過(guò)夜，檸檬酸緩沖液煮沸修復(fù)，嚴(yán)格按照免疫組化試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。以已知Kiss-1蛋白陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。兔抗人Kiss-1蛋白(FL-145)sc-15400單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

結(jié)果判定：采用雙盲法顯微鏡下觀察結(jié)果，Kiss-1蛋白為細(xì)胞質(zhì)染色，胞質(zhì)棕黃色為陽(yáng)性，不著色為陰性。以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度綜合判定[5]。按視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞所占總細(xì)胞數(shù)的比例計(jì)分，≤5%為0分，6%~25%為1分，26%~50%為2分，≥51%為3分；染色強(qiáng)度:不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。每張切片隨機(jī)取5個(gè)400倍視野，二者相加，≤4分為陰性，>4分為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)或百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組Kiss-1蛋白的表達(dá)Kiss-1蛋白在肺癌細(xì)胞質(zhì)呈淡黃色，弱陽(yáng)性表達(dá)；肺泡細(xì)胞及支氣管黏膜上皮細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。Kiss-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在肺癌組為30.00%(18/60)，鱗癌組為30.30%(10/33)，腺癌組為29.63%(8/27)，肺泡組為80.00%(20/25)，支氣管組為89.66%(26/29)，Kiss-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在肺癌組、鱗癌組和腺癌組中均顯著低于肺泡組和支氣管組(χ2分別為35.660、27.445、25.563,P均<0.01)。Kiss-1蛋白表達(dá)在肺泡組與支氣管組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.374，P=0.541)。

2.2Kiss-1蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1　肺癌Kiss-1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

3討論

Kiss-1是最早在黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，基因定位于1號(hào)染色體短臂3區(qū)2帶，編碼一個(gè)由145個(gè)氨基酸組成的親水性蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，Kiss-1基因在多種惡性腫瘤的發(fā)病過(guò)程中起抑癌作用。Masui等[6]通過(guò)檢測(cè)30份胰腺癌組織及癌旁胰腺組織中Kiss-1 mRNA表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Kiss-1在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁正常組織。Mitchell等[7]通過(guò)研究Kiss-1在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)情況及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，提出Kiss-1的低表達(dá)在胃癌的浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。張洪蘭等[8]研究發(fā)現(xiàn)，Kiss-1蛋白表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌組明顯低于正常對(duì)照組，參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。Mooez等[9]采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)乳腺癌及正常乳腺組織中Kiss-1 mRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Kiss-1在乳腺癌組織中表達(dá)明顯低于乳腺正常組織。嚴(yán)寶國(guó)等[10]檢測(cè)食管鱗癌及癌旁正常組織中Kiss-1的表達(dá)，提示Kiss-1表達(dá)缺失參與了食管鱗癌的發(fā)生。這些研究結(jié)果進(jìn)一步提示，Kiss-1在多種組織類型的惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌作用。本文重點(diǎn)探討Kiss-1在肺鱗癌和肺腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。

通常將原發(fā)于支氣管-肺的癌統(tǒng)稱為肺癌，是指主要發(fā)生于支氣管黏膜上皮細(xì)胞、少數(shù)發(fā)生于肺泡上皮細(xì)胞的惡性腫瘤。本組研究對(duì)象包括肺鱗癌33例和肺腺癌27例，是肺癌中最常見的兩種病理組織類型。由于不同的起源，肺鱗癌和腺癌可能存在著不同的癌變機(jī)制。為了減少偏倚，本研究特設(shè)立支氣管和肺泡雙正常對(duì)照組，分析Kiss-1蛋白在組間的表達(dá)情況，以提高研究數(shù)據(jù)的可靠性。研究結(jié)果顯示，Kiss-1蛋白在肺癌組中表達(dá)顯著低于支氣管組和肺泡組，提示Kiss-1發(fā)揮類抑癌基因作用，通過(guò)蛋白表達(dá)下調(diào)參與肺癌發(fā)病過(guò)程。Kiss-1蛋白表達(dá)在肺鱗癌組、腺癌組中均顯著低于肺泡組或支氣管組，其在雙對(duì)照組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步提示Kiss-1蛋白作為抑癌因子，在兩種組織類型肺癌的發(fā)病中可能存在相同或相似的作用機(jī)制，需進(jìn)一步研究。

本研究中，將60例肺癌患者按照臨床病理特征(性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、組織學(xué)類型)進(jìn)行分組，比較各組間Kiss-1蛋白表達(dá)情況，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明Kiss-1蛋白表達(dá)與肺癌患者的性別、年齡及腫瘤大小、分化程度、組織學(xué)類型均無(wú)關(guān)。Kiss-1蛋白表達(dá)在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺癌組明顯高于晚期(Ⅲ期+Ⅳ期)肺癌組，表明Kiss-1蛋白表達(dá)與肺癌的病程進(jìn)展密切相關(guān)；Kiss-1蛋白表達(dá)在肺癌無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示Kiss-1蛋白表達(dá)下調(diào)或缺失可作為肺癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一個(gè)指標(biāo)，有潛力成為判斷肺癌預(yù)后的預(yù)警指標(biāo)。以上結(jié)果與Zheng等[11]研究結(jié)果相一致。目前認(rèn)為，Kiss-1可能的作用機(jī)制是通過(guò)與其受體GPR54結(jié)合激活細(xì)胞內(nèi)磷脂酶C促進(jìn)鈣離子釋放，抑制腫瘤細(xì)胞趨化、增殖及轉(zhuǎn)移等[12,13]。

綜上，Kiss-1在肺鱗癌和肺腺癌的發(fā)生與進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮相似的抑癌和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移作用，有潛力成為判斷肺癌預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。進(jìn)一步深入研究，可為制訂肺癌個(gè)體化治療方案和選擇基因治療靶點(diǎn)提供新思路。

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Expression changes of Kiss-1 protein in lung cancer and the clinical significance

WANGJia,SUNJiawei,HANShuangshuang,SUNWuzhuang,WANGPengyu,WANGLihong

(TheFirstHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050031,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression changes of Kiss-1 protein in the lung cancer tissues and its clinical significance. MethodsThe expression of Kiss-1 in 60 cases of patients with lung cancer including 33 cases of patients with lung squamous cell carcinoma (squamous cancer group) and 27 cases of patients with lung adenocarcinoma (adenocarcinoma group), 25 cases of normal alveolar tissues which were taken from 5 cm above the edge of the lung cancer tissues (alveolar group) and 29 cases of normal bronchial tissues (bronchial group) was measured by immunohistochemistry and we analyzed their relationships with the clinical and pathological data. ResultsThe expression of Kiss-1 protein in the squamous carcinoma group and adenocarcinoma group was both significantly lower than that in the alveolar group and bronchial group (all P<0.01). The expression of Kiss-1 protein of lung cancer was significantly related with lymph node metastasis and TNM stage (all P<0.05). The expression of Kiss-1 protein of lung cancer was not significantly related with gender, age, tumor size, the degree of differentiation and histological type (all P>0.05). ConclusionKiss-1 expression was decreased in the lung cancer tissues, which played a tumor suppressor role in the occurrence and metastasis of lung cancer.

Key words:lung neoplasms; bronchi; Kiss-1 protein; immunohistochemistry

(收稿日期：2015-09-20)

中圖分類號(hào)：R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2016)01-0018-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.01.006

作者簡(jiǎn)介：第一王嘉(1971-)，女，副教授，主要研究方向?yàn)楹粑到y(tǒng)疾病診治。E-mail:Tim32@126.com

基金項(xiàng)目：河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃(20090333)。